一种蛋白酶酶解法制备蛋白肽的方法技术

一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法，涉及生物化学领域，包括以下步骤：先将底物蛋白调节pH至6.5～7.5，然后加入风味蛋白酶、维生素B1、川穹，搅拌进行酶解反应得蛋白肽；本发明专利技术的一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法中，选用风味蛋白酶，并加入维生素B1和川穹，能够激活风味蛋白酶的酶活性，增强对蛋白质的酶解作用。

A protease hydrolysis method for the preparation of protein peptide

A method of enzymatic hydrolysis preparation of protein peptide, which relates to the field of Biochemistry, which comprises the following steps: first the substrate protein pH adjusted to 6.5 to 7.5, and then adding flavourzyme, vitamin B1, Sichuan dome, stirring by enzymatic reaction of protein peptide; preparation method of protein peptide is a protein enzyme in the the invention of the solution, choose flavourzyme, and addition of vitamin B1 and Sichuan dome, the enzyme activity can activate flavorzyme, the solution process of protein enzymes.

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白酶酶解法制备蛋白肽的方法
本专利技术涉及生物化学领域，尤其涉及一种蛋白酶酶解法制备蛋白肽。
技术介绍
蛋白肽是一种生物活性物质，是蛋白经蛋白酶水解或微生物发酵等方法所制得的具有某些生物学功能的混合低聚肽。从化学角度上讲，蛋白肽则是蛋白质中20个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称。蛋白肽具有多种机体代谢和生理调节功能，以消化吸收。它还有降血糖、降血脂、舒张血管、促进骨的合成代谢保持其正常结构功能、促生长、促细胞分化、创伤修复的功能。水产品的蛋白肽的制备加工主要有溶剂提取法、微生物发酵法、合成法和酶解法。溶剂提取法是利用溶剂对多肽的溶解性不同从而提取出来的一种方法，这种方法和萃取方法很相似，这种方法适用于的生物体内的游离的多肽利用溶剂提取出来，提取过程会用用到一些特殊的手段。海洋生物中的多种活性的多肽存在于水产品的不同部分例如骨骼、肌肉中等各个部分，由于海洋生物中的游离出来的多肽含量较少。与此同时，利用溶剂提取法从水产品中提取的活性肽的纯度不高，要提高纯度，需要经过许多步骤，这些步骤会导致有毒物质的引进，还会对活性肽造成污染，有一些有机溶剂还会对环境造成污染，并产生有毒物质残留等问题。溶剂提取法的步骤繁多，并且提取率不高，得到多肽的纯度也不高，通过这种方法提取多肽会造成水产品的大量浪费，同时对海洋环境也造成很大的破坏。所以利用溶剂提取法从水产品中提取生理功能的多肽，主要用于提取多肽的比较基础的步骤，还要进行进一步的精深加工。第二种方法是微生物发酵法。微生物发酵法是指利用能够蛋白质生长的微生物进行发酵，这些微生物包括放线菌、霉菌、细菌等，在适宜的温度、pH值的条件下，并且接种量是一定的，经过微生物的代谢将蛋白进行体内发酵产生特定的多肽，作用于大分子蛋白质将其发酵降解变成了肽链长短不一的多肽混合物，再利用一些分离和纯化的手段将多肽混合分离。这种方法的优点是大大缩短了生物自身体内产生多肽的反应时间，降低了生产成本，同时提高了产量，使多肽中的有毒物质也减少了很多，对人体更加安全。但是微生物发酵过程中的会产生很多副产物，有些会减缓甚至抑制发酵过程中的中间产物和最终的的多肽的产生，经过微生物生长代谢的蛋白质，分解值后的产物很难控制，并且将这些多肽混合物分离纯化出来的工作量大，消耗时间长。所以微生物发酵方法要应用的到大规模的企业生产中还有很多问题需要克服。第三种方法是化学合成法，化学合成法是现在应用比较广泛的一种生产具有生理活性的多肽的方法，化学合成法是从水产品中通过一系列的试验方法得到的微量的，并且已经有十分准确的氨基酸残疾的序列的的多肽，这样的多肽才能够采用这种方法，这种方法能够有效的合成具有相同氨基酸残基序列多肽。但是这种方法缺点也造成生产成本太高，难以实现大规模的生产，在氨基酸合成过程中会使用有机溶剂进行反应，对人体造成一定的损伤，与此同时，在合成多肽的过程中会有很多副反应的发生，同时产生了很多副产物，造成了不必要的损失，这使得化学合成多肽的方法受到不同程度的阻碍。第四种方法是蛋白酶酶解法，蛋白酶酶解法利用蛋白酶的剪切力对蛋白质的结构进行分割，这种方法也是水解蛋白质用来制备多肽的一种十分常用的方法，蛋白酶酶解的过程中，只要保持比较稳定的反应的温度，反应条件比较温和，只要利用酶的专一性就可以剪切出反应终产物，使终产物活性比较稳定。在酶解过程中要保持者相对稳定的酶解温度和pH值，同时酶解时间、料液比和加酶量也要有所控制。在酶解时，酶的选择也是十分重要的，不同种蛋白酶对剪切位点不同，反应条件也不同。因此，急需开发一种能在限定条件下快速稳定进行酶解作用的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中存在的上述问题，提出了一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法。本专利技术的目的可通过下列技术方案来实现：一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法，包括以下步骤：先将底物蛋白调节pH至6.5～7.5，然后加入风味蛋白酶、维生素B1、川穹，搅拌进行酶解反应得蛋白肽。风味蛋白酶是由米曲霉菌株发酵，经提纯、复配而成的复合风味蛋白酶。在食品加工中的动植物水解产品，加入风味蛋白酶，可去除苦味，改善口感，同时提高蛋白有效利用率，降低生产的成本。同时经过酶加工后的肉类食品含有大量的氨基酸类营养物质，对人体健康非常有益，因此复合风味蛋白酶是一种安全、高效的产品。在本专利技术中，加入复合风味蛋白酶的基础上，还加入了维生素B1和川穹。这两者能复合增强风味蛋白酶的酶活性，从而提高风味蛋白酶对底物蛋白的分解作用，提高蛋白有效利用率。在上述的一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的过程中，所述风味蛋白酶、维生素B1、川穹三者的质量比为100:(1-2):(1-3)。维生素B1又称硫胺素或抗神经炎维生素或抗脚气病维生素，为白色晶体，在有氧化剂存在时容易被氧化产生脱氢硫胺素，后者在有紫外光照射时呈现蓝色荧光。在本专利技术中加入维生素B1，能有效提高风味蛋白酶的酶活性，从而提高风味蛋白酶对蛋白质的分解作用。另外，在本专利技术一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法中，还加入了川穹。川穹为一种多年生草本植物，常用于活血行气，祛风止痛。本专利技术中在风味蛋白酶酶解制备蛋白肽的过程中加入了川穹，可对风味蛋白酶有较强的激活作用，使风味蛋白酶在酶解过程中保持高活性，不仅能够增强对蛋白质的分解作用，且能提高效率，减短酶解周期。在上述的一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法中，在45℃～55℃下加入风味蛋白酶、维生素B1、川穹。在一定范围内升高温度，底物转变成产物的速度加快，酶解效率也相应提高。在本专利技术中若温度超过55℃，酶蛋白变性，酶的稳定性下降，酶解效率随之降低。温度低于45℃，不利于底物转变成产物，转化率降低。温度是酶解反应中的重要参数，会影响风味蛋白酶催化反应的速度和酶本身的稳定性。在上述的一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法中，所述底物蛋白为未经预处理的冷冻鱼肉蛋白。本专利技术采用未经预处理的冷冻鱼蛋白，不仅能使操作便利，提高效率，且经过本课题组探究，采用未经处理的冷冻鱼肉蛋白酶解制备蛋白肽，结果发现其氮利用率与经过预处理后相比持平甚至略高，而其水解度差异甚小，因此考虑成本和效率，本专利技术采用未经预处理的冷冻鱼肉蛋白作为底物蛋白。在上述的一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法中，所述pH为6.5～7.5。pH值过低，酶的稳定性下降，酶活降低，酶解率下降。pH过高，破坏酶的内在结构，则酶失活，不能酶解蛋白质。在上述的一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法中，所述底物蛋白的浓度为4％～5％。在底物浓度很低时，反应速度随底物浓度的增加而急骤加快，两者呈正比关系，表现为一级反应。随着底物浓度的升高，反应速度不再呈正比例加快，反应速度增加的幅度不断下降。如果继续加大底物浓度，反应速度不再增加，表现为0级反应。此时，无论底物浓度增加多大，反应速度也不再增加，说明酶已被底物所饱和。在上述的一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法中，所述风味蛋白酶用量为底物蛋白质量的3％-5％。原料加水少，水解不彻底，蛋白质提取率低；加水多，有助于水解反应的进行，提高了蛋白质提取率。但产物浓度过低，浓缩时能耗大。酶浓度与底物浓度之比为比酶浓度。比酶浓度本身能更好的反映酶解过程中的反应速度特征。当底物浓度一定，而增加的酶量又未使底物浓度饱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：先将底物蛋白调节pH至6.5～7.5，然后加入风味蛋白酶、维生素B1、川穹，搅拌下进行酶解反应得蛋白肽。

【技术特征摘要】
1.一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：先将底物蛋白调节pH至6.5～7.5，然后加入风味蛋白酶、维生素B1、川穹，搅拌下进行酶解反应得蛋白肽。2.根据权利要求1所述的一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法，其特征在于，所述风味蛋白酶、维生素B1、川穹三者的质量比为100:(1-2):(1-3)。3.根据权利要求1或2所述的一种蛋白酶酶解制备蛋白肽的方法，其特征在于，在45℃～55℃下加入风味蛋白酶、维生素...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁璞，
申请(专利权)人：舟山达康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33