一种基于固定化酶的蛋白质酶解方法技术

本发明专利技术涉及一种基于固定化酶的蛋白质酶解方法，其是以温敏性微球为固定化酶载体，通过温度调节温敏固定化酶微球的亲疏水性质，进而控制蛋白质酶解过程，即在酶解温度高于温敏固定化酶微球的临界相转变温度时，微球呈疏水性，能够富集待测蛋白质样品的同时对其进行酶解，在酶解温度低于温敏固定化酶微球的临界相转变温度时，停止酶解并释放肽段，从而提高酶解效率和样品肽段的检出率。本发明专利技术所提供的蛋白质酶解方法具有步骤简单、操作方便等特点，有助于蛋白质组学等相关领域的研究。

A method of protein enzymatic hydrolysis based on immobilized enzyme

The invention relates to a method of solution of protein enzyme immobilized enzyme based on which is based on the temperature sensitive microspheres for enzyme immobilization, regulate the temperature sensitive enzyme immobilized microspheres by temperature of hydrophilic hydrophobic properties, and then control the proteolytic reaction, that is at the critical temperature is higher than the temperature sensitive enzyme immobilized enzyme microsphere phase when the transition temperature of microspheres is hydrophobic, can enrich measured protein samples for the enzyme solution, the critical temperature is lower than the temperature sensitive enzyme immobilized enzyme microsphere phase transition temperature, stop the enzymatic and release the peptide, so as to improve the detection rate of enzymatic efficiency and sample peptide. The method of enzymatic hydrolysis provided by the invention has the characteristics of simple steps and convenient operation, and is helpful to the research in the related fields of proteomics.

【技术实现步骤摘要】
一种基于固定化酶的蛋白质酶解方法
本专利技术涉及属于生物化工领域，具体涉及一种蛋白质酶解方法，尤其涉及一种基于固定化酶的蛋白质酶解方法。
技术介绍
蛋白质组学是一门后基因组学时代兴起的学科，涉及从蛋白质水平上对基因和细胞进行大规模直观的鉴定，其广泛应用于癌症的识别与治疗、疾病的预测等。蛋白质的酶解是蛋白质组学研究中蛋白质分析鉴定的关键步骤。传统的酶解过程是基于溶液酶解法，通常是将酶与待测样品以质量比1:50的比例混合后，在37℃下反应12-24h。这种方法存在酶解时间较长、容易产生酶的自身酶解、酶无法回收利用等问题。近年来，固定化酶技术以其快速、高效、可回收等特点在蛋白质酶解中得到广泛应用。众多固定化酶载体材料(如磁性颗粒、聚合物膜、介孔材料、二氧化硅等)均可以显著缩短酶解所需要的时间，加快酶解反应过程。然而，受到基体材料自身亲疏水性质的限制，亲水性载体材料在酶解过程中难以对待测蛋白质样品进行富集，而疏水性载体材料易对蛋白质及其酶解产物产生非特异性吸附，从而影响酶解的效率以及后续蛋白质鉴定的准确度。因此采用智能亲疏水载体材料进行蛋白质酶解和鉴定，可以在提高酶解效率的同时，增强蛋白质样本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白质酶解的方法，其特征在于，其包括：利用温敏固定化酶微球对蛋白质进行酶解。

【技术特征摘要】
1.一种蛋白质酶解的方法，其特征在于，其包括：利用温敏固定化酶微球对蛋白质进行酶解。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其包括以下步骤：(1)将待酶解的蛋白质样品进行热变性处理；(2)采用温敏固定化酶微球对步骤(1)得到的溶液进行酶解处理；(3)酶解1-60min后，终止酶解反应，分离温敏固定化酶微球与酶解产物溶液，收集酶解产物溶液。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述温敏固定化酶微球的载体材料是由N-异丙基丙烯酰胺与丙烯酸或甲基丙烯酸通过共聚反应形成的，优选由N-异丙基丙烯酰胺与丙烯酸通过共聚反应形成；优选地，所述温敏固定化酶微球的固定化酶为固定化胰蛋白酶或固定化糜蛋白酶，优选为固定化胰蛋白酶。4.如权利要求1-3之一所述的方法，其特征在于，所述温敏固定化酶微球的粒径为1-200μm，优选为1-100μm，更优选为1-50μm；优选地，所述温敏固定化酶微球的临界相转变温度为30-45℃，优选为32-43℃，更优选为35-42℃。5.如权利要求2-4之一所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述热变性处理前还包括：将待酶解的蛋白质样品溶解于碱性溶液中；优选地，所述碱性溶液选自碳酸氢铵缓冲液、Tris-HCl缓冲液或尿素溶液中的任意一种，优选为尿素溶液；优选地，所述碱性溶液的摩尔浓度为20-100mmol/L，优选为20-30mmol/L。6.如权利要求2-5之一所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述热变性处理的温度为60-100℃，优选为65-95℃，更优选为75-95℃；优选地，所述热...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉霞，马光辉，赖恩平，周炜清，韦祎，
申请(专利权)人：中国科学院过程工程研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11