一种纳米级胶原蛋白的提纯方法技术

本发明专利技术公开了一种纳米级胶原蛋白的提纯方法，包括以下步骤：(1)将新鲜鱼皮剪碎，加入氯化钠水溶液中浸渍，离心取离心后的沉淀，将沉淀用水冲洗干净并晾干，得到预处理的鱼皮；(2)将步骤(1)预处理的鱼皮用丙酮脱脂；(3)脱脂后的鱼皮加入到乙酸水溶液中，再加入胃蛋白酶酶解，然后过滤、保留滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入氯化钠后离心，将离心所得沉淀加入到乙酸水溶液中搅拌均匀，得到胶原蛋白粗提取液；(5)将胶原蛋白粗提取液经过进一步提纯、冷冻干燥后得到胶原蛋白。本发明专利技术纳米级胶原蛋白的提纯方法，通过酶解法将胶原蛋白水解为纳米级活性寡肽胶原，再结合反胶团法提纯胶原蛋白，生产成本低、操作简单，胶原蛋白纯度高、产率高，对人体无毒副作用、无过敏现象，适合应用于生物医药、化妆品、食品等领域。

【技术实现步骤摘要】
一种纳米级胶原蛋白的提纯方法
本专利技术涉及一种胶原蛋白的提纯方法。
技术介绍
胶原蛋白是生物高分子，动物结缔组织、毛皮中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％～30％。胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用。在生物、医学领域，胶原力学性能高、促进细胞生长、止血、生物相容性和生物降解性。在化妆品领域，由于胶原及其水解物与人皮肤胶原的结构相似，相容性好，存在着离子键、氢键等相互作用，由其制备的材料，可以扩散到皮肤的深层，对人的皮肤有很好的营养作用，同时由于其分子中含有大量的羟基，因此它有着相当好的保湿作用；其分子中的氨基和羧基又赋予它一定的表面活性，这使它与其它材料的相容性很好，且对皮肤无刺激性。在食品方面，食品是人类赖以生存的最基本的生活材料，人们饮食结构的改变最能直接反映生活水平的提高，现在人们在饮食上不仅要求色、香、味俱佳，而且还要求食品具有保健、美容等功能，人们食用含胶原丰富的食品，可使皮肤增加弹性、延缓衰老，同时还可强筋健骨，增强体质的作用。胶原是通过复杂的化学键交联在一起的超大分子有机物，因此是很难直接溶于水的。在含有蛋白酶的醋酸溶液中，由于部分键被破坏，少部分胶原分子的基本组成单位γ链被溶解出来，同时γ链还有可能被继续降解成二聚体形式的β链和单体形式的α链，从而变成可以被提取的胶原蛋白。制备胶原蛋白的原料主要有牛肌腿、猪皮、鱼皮和动物骨等。相比猪皮、鸡皮，在胶原蛋白领域，鱼皮是高品质原料，是提取胶原和胶原蛋白的好材料。胶原的提取方法通常有酸法、碱法和酶法。酶法条件温和，效率高，适合于大批量生产，本专利技术的纳米级胶原蛋白，通过酶解法将胶原蛋白水解为纳米级活性寡肽胶原，纳米级活性寡肽胶原是构成胶原蛋白的小分子片断，是由二肽、三肽直至七肽组成的具有生物活性的纳米小分子混合寡肽，纳米级胶原蛋白的生物活性、吸收利用率、效用时间远优于大型胶原蛋白。酶法提取的胶原蛋白需要进一步提纯，才能得到纯度较高的、适合于工业应用的胶原蛋白。本专利技术将酶法提取胶原蛋白和反胶团法提纯胶原蛋白相结合，提纯得到的纳米级胶原蛋白产率高、纯度高，适合应用于生物医药、食品、化妆品等领域。
技术实现思路
本专利技术提供了一种纳米级胶原蛋白的提纯方法。本专利技术采用如下技术方案：一种纳米级胶原蛋白的提纯方法，包括以下步骤，所述份均为重量份：(1)将新鲜鱼皮剪碎后加入到质量为鱼皮质量10-30倍、质量分数为8-12％的氯化钠水溶液中，浸渍8-24小时，浸渍温度为30-40℃，然后离心，取离心后的沉淀，用质量为沉淀质量5-15倍的水冲洗表面，自然晾干，得到预处理的鱼皮；(2)将步骤(1)预处理的鱼皮15-30份、20-40份水加入到127.5-293份丙酮中，在温度为3-5℃、以20-100转/分钟的转速搅拌24-48小时，然后倾去上清液，用60-120份水冲洗鱼皮表面，自然晾干；(3)将步骤(2)处理后的鱼皮加入到110-250份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，再加入3-8份胃蛋白酶，在温度为35-42℃、以20-100转/分钟的转速搅拌15-40分钟，然后停止搅拌，在温度为35-42℃条件下静置36-72小时，然后过100目筛，保留滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入氯化钠至滤液中氯化钠的浓度为5-7.5mol/L，然后离心，将离心后的沉淀加入到110-260份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，在温度为35-50℃、以50-200转/分钟的转速搅拌20-60分钟，得到胶原蛋白粗提取液；(5)将胶原蛋白粗提取液经过进一步提纯、冷冻干燥后得到胶原蛋白。一种纳米级胶原蛋白的提纯方法，包括以下步骤，所述份均为重量份：(1)将新鲜鱼皮剪碎后加入到质量为鱼皮质量10-30倍、质量分数为8-12％的氯化钠水溶液中，浸渍8-24小时，浸渍温度为30-40℃，然后离心，取离心后的沉淀，用质量为沉淀质量5-15倍的水冲洗表面，自然晾干，得到预处理的鱼皮；(2)将步骤(1)预处理的鱼皮15-30份、0.62-1.75份蛋白质保护剂、20-40份水加入到127.5-293份丙酮中，在温度为3-5℃、以20-100转/分钟的转速搅拌24-48小时，然后倾去上清液，用60-120份水冲洗鱼皮表面，自然晾干；所述蛋白质保护剂为β-环糊精、海藻酸钠、卡拉胶中的一种；(3)将步骤(2)处理后的鱼皮加入到110-250份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，再加入3-8份胃蛋白酶，在温度为35-42℃、以20-100转/分钟的转速搅拌15-40分钟，然后停止搅拌，在温度为35-42℃条件下静置36-72小时，然后过100目筛，保留滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入氯化钠至滤液中氯化钠的浓度为5-7.5mol/L，然后离心，将离心后的沉淀加入到110-260份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，在温度为35-50℃、以50-200转/分钟的转速搅拌20-60分钟，得到胶原蛋白粗提取液；(5)将胶原蛋白粗提取液进行超滤，将超滤获取的截留液冷冻干燥后，得到胶原蛋白。一种纳米级胶原蛋白的提纯方法，包括以下步骤，所述份均为重量份：(1)将新鲜鱼皮剪碎后加入到质量为鱼皮质量10-30倍、质量分数为8-12％的氯化钠水溶液中，浸渍8-24小时，浸渍温度为30-40℃，然后离心，取离心后的沉淀，用质量为沉淀质量5-15倍的水冲洗表面，自然晾干，得到预处理的鱼皮；(2)将步骤(1)预处理的鱼皮15-30份、0.62-1.75份蛋白质保护剂、20-40份水加入到127.5-293份丙酮中，在温度为3-5℃、以20-100转/分钟的转速搅拌24-48小时，然后倾去上清液，用60-120份水冲洗鱼皮表面，自然晾干；所述蛋白质保护剂为β-环糊精、海藻酸钠、卡拉胶中的一种；(3)将步骤(2)处理后的鱼皮加入到110-250份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，再加入3-8份胃蛋白酶、0.05-0.5份酶激活剂，在温度为35-42℃、以20-100转/分钟的转速搅拌15-40分钟，然后停止搅拌，在温度为35-42℃条件下静置36-72小时，然后过100目筛，保留滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入氯化钠至滤液中氯化钠的浓度为5-7.5mol/L，然后离心，将离心后的沉淀加入到110-260份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，在温度为35-50℃、以50-200转/分钟的转速搅拌20-60分钟，得到胶原蛋白粗提取液；(5)将胶原蛋白粗提取液进行超滤，将超滤获取的截留液冷冻干燥后，得到胶原蛋白。一种纳米级胶原蛋白的提纯方法，包括以下步骤，所述份均为重量份：(1)将新鲜鱼皮剪碎后加入到质量为鱼皮质量10-30倍、质量分数为8-12％的氯化钠水溶液中，浸渍8-24小时，浸渍温度为30-40℃，然后离心，取离心后的沉淀，用质量为沉淀质量5-15倍的水冲洗表面，自然晾干，得到预处理的鱼皮；(2)将步骤(1)预处理的鱼皮15-30份、0.62-1.75份蛋白质保护剂、20-40份水加入到127.5-293份丙酮中，在温度为3-5℃、以20-100转/分钟本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纳米级胶原蛋白的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤，所述份均为重量份：(1)将新鲜鱼皮剪碎后加入到质量为鱼皮质量10‑30倍、质量分数为8‑12％的氯化钠水溶液中，浸渍8‑24小时，浸渍温度为30‑40℃，然后离心，取离心后的沉淀，用质量为沉淀质量5‑15倍的水冲洗表面，自然晾干，得到预处理的鱼皮；(2)将步骤(1)预处理的鱼皮15‑30份、20‑40份水加入到127.5‑293份丙酮中，在温度为3‑5℃、以20‑100转/分钟的转速搅拌24‑48小时，然后倾去上清液，用60‑120份水冲洗鱼皮表面，自然晾干；(3)将步骤(2)处理后的鱼皮加入到110‑250份、0.5‑1.0mol/L的乙酸水溶液中，再加入3‑8份胃蛋白酶，在温度为35‑42℃、以20‑100转/分钟的转速搅拌15‑40分钟，然后停止搅拌，在温度为35‑42℃条件下静置36‑72小时，然后过100目筛，保留滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入氯化钠至滤液中氯化钠的浓度为5‑7.5mol/L，然后离心，将离心后的沉淀加入到110‑260份、0.5‑1.0mol/L的乙酸水溶液中，在温度为35‑50℃、以50‑200转/分钟的转速搅拌20‑60分钟，得到胶原蛋白粗提取液；(5)将胶原蛋白粗提取液经过进一步提纯、冷冻干燥后得到胶原蛋白。...

【技术特征摘要】
1.一种纳米级胶原蛋白的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤，所述份均为重量份：(1)将新鲜鱼皮剪碎后加入到质量为鱼皮质量10-30倍、质量分数为8-12％的氯化钠水溶液中，浸渍8-24小时，浸渍温度为30-40℃，然后离心，取离心后的沉淀，用质量为沉淀质量5-15倍的水冲洗表面，自然晾干，得到预处理的鱼皮；(2)将步骤(1)预处理的鱼皮15-30份、20-40份水加入到127.5-293份丙酮中，在温度为3-5℃、以20-100转/分钟的转速搅拌24-48小时，然后倾去上清液，用60-120份水冲洗鱼皮表面，自然晾干；(3)将步骤(2)处理后的鱼皮加入到110-250份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，再加入3-8份胃蛋白酶，在温度为35-42℃、以20-100转/分钟的转速搅拌15-40分钟，然后停止搅拌，在温度为35-42℃条件下静置36-72小时，然后过100目筛，保留滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入氯化钠至滤液中氯化钠的浓度为5-7.5mol/L，然后离心，将离心后的沉淀加入到110-260份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，在温度为35-50℃、以50-200转/分钟的转速搅拌20-60分钟，得到胶原蛋白粗提取液；(5)将胶原蛋白粗提取液经过进一步提纯、冷冻干燥后得到胶原蛋白。2.一种纳米级胶原蛋白的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤，所述份均为重量份：(1)将新鲜鱼皮剪碎后加入到质量为鱼皮质量10-30倍、质量分数为8-12％的氯化钠水溶液中，浸渍8-24小时，浸渍温度为30-40℃，然后离心，取离心后的沉淀，用质量为沉淀质量5-15倍的水冲洗表面，自然晾干，得到预处理的鱼皮；(2)将步骤(1)预处理的鱼皮15-30份、0.62-1.75份蛋白质保护剂、20-40份水加入到127.5-293份丙酮中，在温度为3-5℃、以20-100转/分钟的转速搅拌24-48小时，然后倾去上清液，用60-120份水冲洗鱼皮表面，自然晾干；所述蛋白质保护剂为β-环糊精、海藻酸钠、卡拉胶中的一种；(3)将步骤(2)处理后的鱼皮加入到110-250份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，再加入3-8份胃蛋白酶，在温度为35-42℃、以20-100转/分钟的转速搅拌15-40分钟，然后停止搅拌，在温度为35-42℃条件下静置36-72小时，然后过100目筛，保留滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入氯化钠至滤液中氯化钠的浓度为5-7.5mol/L，然后离心，将离心后的沉淀加入到110-260份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，在温度为35-50℃、以50-200转/分钟的转速搅拌20-60分钟，得到胶原蛋白粗提取液；(5)将胶原蛋白粗提取液进行超滤，将超滤获取的截留液冷冻干燥后，得到胶原蛋白。3.一种纳米级胶原蛋白的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤，所述份均为重量份：(1)将新鲜鱼皮剪碎后加入到质量为鱼皮质量10-30倍、质量分数为8-12％的氯化钠水溶液中，浸渍8-24小时，浸渍温度为30-40℃，然后离心，取离心后的沉淀，用质量为沉淀质量5-15倍的水冲洗表面，自然晾干，得到预处理的鱼皮；(2)将步骤(1)预处理的鱼皮15-30份、0.62-1.75份蛋白质保护剂、20-40份水加入到127.5-293份丙酮中，在温度为3-5℃、以20-100转/分钟的转速搅拌24-48小时，然后倾去上清液，用60-120份水冲洗鱼皮表面，自然晾干；所述蛋白质保护剂为β-环糊精、海藻酸钠、卡拉胶中的一种；(3)将步骤(2)处理后的鱼皮加入到110-250份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，再加入3-8份胃蛋白酶、0.05-0.5份酶激活剂，在温度为35-42℃、以20-100转/分钟的转速搅拌15-40分钟，然后停止搅拌，在温度为35-42℃条件下静置36-72小时，然后过100目筛，保留滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入氯化钠至滤液中氯化钠的浓度为5-7.5mol/L，然后离心，将离心后的沉淀加入到110-260份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，在温度为35-50℃、以50-200转/分钟的转速搅拌20-60分钟，得到胶原蛋白粗提取液；(5)将胶原蛋白粗提取液进行超滤，将超滤获取的截留液冷冻干燥后，得到胶原蛋白。4.一种纳米级胶原蛋白的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤，所述份均为重量份：(1)将新鲜鱼皮剪碎后加入到质量为鱼皮质量10-30倍、质量分数为8-12％的氯化钠水溶液中，浸渍8-24小时，浸渍温度为30-40℃，然后离心，取离心后的沉淀，用质量为沉淀质量5-15倍的水冲洗表面，自然晾干，得到预处理的鱼皮；(2)将步骤(1)预处理的鱼皮15-30份、0.62-1.75份蛋白质保护剂、20-40份水加入到127.5-293份丙酮中，在温度为3-5℃、以20-100转/分钟的转速搅拌2...

【专利技术属性】
技术研发人员：田娟，
申请(专利权)人：上海新肌生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31