一种肺癌早期诊断用小分子标志物及在诊断方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种肺癌早期诊断用小分子标志物及在诊断方面的应用，公开一种用于早期诊断肺癌的组合物，至少包括磷脂酰肌醇(20:4/0:0)；优选地，包括磷脂酰肌醇(20:4/0:0)、棕榈酰乙醇胺和柠苹酸。磷脂酰肌醇(20:4/0:0)单个用于诊断肺癌与非肺癌的AUC为0.858，具有中等准确性；棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)和柠苹酸联合用于诊断肺癌与非肺癌的AUC为0.965，具有较高准确性，最佳诊断临界值处的灵敏度和特异性均在0.9以上。在独立样品集验证证明血清棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)和柠苹酸联合用于诊断肺癌与非肺癌的准确度高达92.2%，诊断价值高。

A small molecular marker for early diagnosis of lung cancer and its application in diagnosis

The invention discloses a method for early diagnosis of lung cancer with small molecular markers using and in diagnosis, and discloses a composition for the early diagnosis of lung cancer, including at least phosphatidylinositol (20:4/0:0); preferably, including phosphatidylinositol (20:4/0:0), palmitoyl ethanolamine and citramalic acid. Phosphatidylinositol (20:4/0:0) single for diagnosis of lung cancer and non cancer AUC was 0.858, with moderate accuracy; palm phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol (20:4/0:0) and citramalic acid combination for the diagnosis of lung cancer and non cancer AUC was 0.965, with higher accuracy, the optimal diagnostic critical value of sensitivity and specificity. In more than 0.9. The independent sample set proved that the accuracy of serum palmitic ethanolamine, phosphatidylinositol (20:4/0:0) and citric acid in the diagnosis of lung cancer and non lung cancer is up to 92.2%, and the diagnostic value is high.

【技术实现步骤摘要】
一种肺癌早期诊断用小分子标志物及在诊断方面的应用
本专利技术属于精准诊断领域，涉及一种肺癌早期诊断用小分子标志物及在诊断方面的应用。
技术介绍
肺癌是一种常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率均居各种恶性肿瘤之首，并呈持续上升趋势。由于肺癌有时与肺良性疾病难以鉴别，故易导致患者错过最佳治疗时期延误治疗。肺癌确诊的金标准是病理学检查，本方法特异性高，但具有创伤性，不易为患者接受，且取材存在一定难度，导致敏感性不高，对无症状或X线隐性肺癌更难查获。影像学检查是目前肺癌诊断主要依靠的手段，其能通过改变体位观察病变所在位置，明确肺癌分期，对肺癌的定性和定位具有重要意义，但成本高，对微小病灶不易检出，不能满足肺癌早期诊断的要求。血清肿瘤标志物的异常往往早于影像学的异常，检测方便，可重复性强，费用低，对于无临床相关症状患者，任何一项标志物的异常都可能具有提示意义，但其在健康人和肺良性疾病患者中也可能升高。因此，申请人旨在寻找可以用于早期诊断肺癌的标志物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种肺癌早期诊断用小分子标志物及在诊断方面的应用。本专利技术上述目的是通过以下技术方案得以实现：棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)或柠苹酸用于早期诊断肺癌的临床用途。一种用于早期诊断肺癌的组合物，至少包括磷脂酰肌醇(20:4/0:0)。优选地，所述的组合物包括磷脂酰肌醇(20:4/0:0)、棕榈酰乙醇胺和柠苹酸。更优选地，所述的组合物还包括内标L-2-氯苯丙氨酸。上述任一组合物在制备早期诊断肺癌的诊断试剂盒方面的应用。本专利技术的有益效果：ROC曲线分析中，ROC曲线下面积越大，其诊断价值越大。AUC为0.5时，即无诊断意义；AUC在0.5～0.7时，表示诊断准确率较低；AUC在0.7～0.9时，表示诊断准确性中等；AUC＞0.9时，表示诊断有较高的准确性。磷脂酰肌醇(20:4/0:0)单个用于诊断肺癌与非肺癌的AUC为0.858，具有中等的准确性；血清棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)和柠苹酸联合用于诊断肺癌与非肺癌的AUC为0.965，具有较高的准确性，最佳诊断临界值处的灵敏度和特异性均在0.9以上。在独立样品集中的进一步验证证明血清棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)和柠苹酸联合用于诊断肺癌与非肺癌的准确度高达92.2％，具有较高临床诊断价值。附图说明图1为血清棕榈酰乙醇胺单独诊断肺癌与非肺癌的ROC曲线；图2为血清磷脂酰肌醇(20:4/0:0)单独诊断肺癌与非肺癌的ROC曲线；图3为血清柠苹酸单独诊断肺癌与非肺癌的ROC曲线；图4为血清棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)、柠苹酸联合诊断肺癌与非肺癌的ROC曲线。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容。实施例1：小分子标志物对肺癌诊断的准确性一、材料和方法1、研究对象肺癌组病例为2015年3月至2016年12月在南京鼓楼医院住院治疗的患者，共240例，其中男158例，女82例，年龄36-75岁，平均年龄44岁。所有病例均经临床和病理确诊，其中鳞癌55例、腺癌138例和小细胞癌47例。肺良性疾病患者(均经临床或病理证实)共90例，其中男48例，女42例，年龄32-65岁，包括肺部感染35例、哮喘11例、支气管扩张24例、肺血管平滑肌瘤12例以及肺囊肿8例。健康人对照组为体检正常并排除其他慢性疾病的健康者，共80例，其中男45例，女35例，年龄26-58岁。2、仪器与试剂高效液相色谱-质谱仪：Agilent1200(G6410A)，美国Agilent公司；超纯水系统：Milli-Q，美国Millipor公司；自动液体进样器：美国Agilent公司；甲醇、乙腈、甲酸、异丙醇，美国Sigma公司，均为色谱纯或质谱级别。3、样本采集和预处理采集入选人员空腹血标本3ml于含有肝素钠的采血管中静止1h凝固分层，离心(3000rpm10min)，取上清液分装至离心管，保存于-80℃冰箱待用。将低温保存的血清样本室温解冻混匀，取100μL血清放入离心管，加入300μL乙腈摇晃混匀15s，室温静置15min，10000rpm离心10min(4℃)，取上清液200μL，在室温下用氮吹仪吹干，残渣用50μL乙腈/水溶剂(3:1)复溶，13000rpm离心10min(4℃)，取上清液加入50μL浓度为0.02mg/mL的L-2-氯苯丙氨酸内标后混匀备用。质控(QC)样本的制备。为了观察试验方法的稳定性，在每6个血清后分别都加入一个QC样本。QC样本制备方法为：室温摇匀解冻的血清样本取5μL，加入甲醇和乙腈1:1混合液再加入L-2-氯苯丙氨酸作为内标。其余处理同上。4、HPLC-MS分析条件色谱条件：色谱柱选用ZorbaxSB-C18柱(4.6mm×100mm，3.5μm)。柱温维持在45℃，流动相组成是A为体积浓度0.1％甲酸水溶液，B为体积浓度0.1％甲酸乙腈溶液；梯度洗脱条件：0～3min为0～30％B相，2min内B相线性增加到60％，5～10min线性变化至90％B相，然后在10～12min线性增加至100％B相并保持3min；流速1.0mL/min；单次进样10μL。质谱条件：采用ESI，正离子或负离子模式，毛细管电压4KV，电子能量3eV，延时溶液5min，离子源温度115℃，干燥气温度350℃，干燥气流速9L/min，参比荷质比(m/z)80-900，质量全扫描范围100-1000，扫描时间0.03s。5、数据处理和统计学分析计算各样本中棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)和柠苹酸的质谱总离子流峰面积与内标L-2-氯苯丙氨酸的质谱总离子流峰面积的比值，该比值即为各样本中棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)和柠苹酸的相对含量。应用SPSS16.0软件对数据进行统计分析，正态性分布检验用1-sampleK-S进行分析，各指标含量的组间比较用One-wayANOVALSD法检验，检测阳性率的比较采用χ2检验，用Logistic回归筛选变量并建立回归方程，对新变量及各单项指标进行ROC曲线分析。二、实验结果1、各组血清棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)和柠苹酸的相对含量比较组间差异比较发现，肺癌组血清中3种肿瘤标志物水平显著高于肺良性疾病组和健康对照组(P＜0.01)，而肺良性疾病组与健康对照组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。各组血清棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)和柠苹酸的相对含量比较如表1：表1各组血清棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)和柠苹酸的相对含量比较组别棕榈酰乙醇胺磷脂酰肌醇(20:4/0:0)柠苹酸肺癌组/健康对照组2.54倍4.88倍1.78倍肺良性疾病组/健康对照组1.06倍1.02倍1.03倍因此，将肺良性疾病组与健康对照组合并为非肺癌组，并将肺癌组和非肺癌组样本对半随机分为训练集和验证集，重新分组信息如下。2、血清棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)和柠苹酸的ROC曲线分析ROC曲线下面积越大，其诊断价值越大。AUC为0.5时，即无诊断意义；AUC在0.5～0.7时，表示诊断准确率较低；AUC在0.7～0.9时，表示诊断准确性中等；AUC＞0.9时，表示诊断有较高本文档来自技高网...

【技术保护点】
棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)或柠苹酸用于早期诊断肺癌的临床用途。

【技术特征摘要】
1.棕榈酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(20:4/0:0)或柠苹酸用于早期诊断肺癌的临床用途。2.一种用于早期诊断肺癌的组合物，其特征在于：至少包括磷脂酰肌醇(20:4/0:0)。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉梅，董明淑，曹阳，吴桐，
申请(专利权)人：南京拓睿谱基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32