一种耐受消化道酶的活性肽的筛选方法技术

本方面涉及一种活性肽的筛选方法，具体地说是一种将蛋白质组学与模拟消化道体系相结合，快速筛选混合酶解物中能够耐受消化道酶的活性肽的方法。将发酵物或酶解物经过模拟消化道降解为消化物，利用LC‑MS/MS分别分析原料及消化物中的肽组成并进行比对，筛选具有耐受消化酶降解的能力的肽，再利用构效关系从中筛选耐受消化道酶的活性肽。本发明专利技术将模拟消化道、蛋白质组学、构效关系相结合，筛选能够在消化道体系中存活的肽，提高了活性肽筛选的靶标性，具有高效、高通量的特点，可应用于发酵物、酶解物等混合体系中活性肽的快速筛选，具有广阔应用前景。

A screening method for active peptides that tolerate digestive enzymes

This aspect involves a screening method of active peptides, specifically, a combination of proteomics and simulated digestive tract system to quickly screen the active peptides that can tolerate digestive enzymes in mixed enzymatic hydrolysates. The fermentation or enzymolysis after simulated gastrointestinal digest degradation by LC MS/MS analysis, respectively raw materials and digest the peptide composition and for comparison, screening ability has tolerance of enzymatic degradation of the peptide by active peptide QSAR screening of digestive enzymes in tolerance. The present invention will simulate the digestive tract, proteomics and structure-activity relationship of combined screening can survive in the digestive system of the peptide, improve the activity of the target peptide, has the advantages of high efficiency, high throughput, rapid screening of bioactive peptides can be used in leavening, hydrolysate etc. in the mixed system. Has a broad application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种耐受消化道酶的活性肽的筛选方法
本专利技术属于生物

技术介绍
活性肽是近年来颇受关注的研究方向，特别是源于食品蛋白质的活性肽在肥胖、胰岛素抵抗、葡萄糖耐受、高血脂、降血压等心血管相关的慢性病的治疗和预防方面受到广泛关注。在蛋白水解酶的作用下，肽从其母体蛋白质中被释放出来而表现出各种各样生理活性。蛋白质酶、微生物降解是常用的制备活性肽的方法，由于蛋白质分子量量巨大，在蛋白酶及微生物的酶体系作用下会产生大量长度、结构千差万别的肽，从复杂的酶解物或发酵物中获得活性肽是一项具有挑战性的工作。常用的获得活性肽方法有：(1)传统分离纯化法：蛋白酶解物通过分离、纯化，获得较纯的肽进行结构鉴定及活性筛选。该方法法费时费力、效率低下。(2)模拟法：通过计算机模拟酶解肽段，依据肽与活性的构效关系，预测潜在的活性肽，合成肽段进行活性验证。该方法依据理论推测及计算获得目标肽信息，无法反映实际酶解条件的影响，而且应用也仅局限于性质明确的几个酶。活性肽进入人体后都面临被人体消化道酶降解的风险，只有耐受消化道酶的活性肽才有可能最终进入人体血液系统到达靶标器官而发挥作用。复杂的样品中快速筛选方法耐受消本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种耐受消化道酶的活性肽的筛选方法，其特征在于：利用模拟消化道体系降解原料，LC‑MS/MS分析消化前后的肽谱，两者间共同的肽段即为耐受消化道酶的肽，根据构效关系筛选其中具有生物活性的肽。

【技术特征摘要】
1.一种耐受消化道酶的活性肽的筛选方法，其特征在于：利用模拟消化道体系降解原料，LC-MS/MS分析消化前后的肽谱，两者间共同的肽段即为耐受消化道酶的肽，根据构效关系筛选其中具有生物活性的肽。2.按照权利要求1所述活性肽的筛选方法，其特征在于：1)将样品以20～80％(质量g/体积ml)的终浓度与35mMNaCI溶液混合，混合液于匀浆器中于1000～2000rpm匀浆5～20分钟，制备成为均质样品；2)将上述均质样品用1～6MHCI调节pH至1.0～3.0，按照酶：样品中蛋白质＝1：50～500的质量比例加入胃蛋白酶，于35～40℃酶解0.5～5小时；反应结束后用1～6MNaOH将pH调节至6.0～8.0，按照酶：样品中蛋白质＝1：20～200的质量比例加入胰酶，于35～40℃酶解0.5～5小时；反应结束后用1～6MNaOH将pH调节至10.0～12.0，获得样品消化液；3)将均质样品和消化液分别以10000～20000rpm离心5～30分钟，上清用截留分子量为10000～50000的超滤管以10000～20000rpm速度超滤离心5～30分钟，超滤液冷冻干燥后用于质谱分析；4)制备好的样品分别用LC-MS/MS分析，将获...

【专利技术属性】
技术研发人员：靳艳，王方军，叶明亮，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁,21