发酵法制备的牡丹花粉蛋白多肽制造技术

本发明专利技术公开了一种发酵法制备的牡丹花粉蛋白多肽，具备减肥功效，并且具有优异的降血压功效。发酵法制备牡丹花粉蛋白多肽的方法，包括花粉破壁、精油提取、发酵、脱脂、喷雾干燥。将牡丹花粉进行冷冻、机械粉碎，再采用植物乳杆菌和酿酒酵母厌氧发酵继续破壁，再采用枯草芽孢杆菌发酵，利用其发酵产生的中性蛋白酶对牡丹花粉蛋白进行酶解，得到活性强度的牡丹花粉蛋白多肽，接着采用壳聚糖固定化脂肪酶对发酵液进行脱脂。

Polypeptide of Peony Pollen protein prepared by fermentation method

The invention discloses a polypeptide of Peony Pollen protein prepared by the fermentation method, which has the effect of losing weight and has excellent effect of lowering blood pressure. The methods of preparing polypeptides from Peony Pollen by fermentation include pollen wall breaking, essential oil extraction, fermentation, degreasing and spray drying. The Peony Pollen was frozen, mechanical crushing, using Lactobacillus and Saccharomyces cerevisiae to anaerobic fermentation by Bacillus subtilis broken, fermentation of Peony Pollen protein was hydrolyzed by neutral protease the fermentation of the Peony Pollen protein polypeptide obtained activity, then using immobilized lipase with chitosan for degreasing fermentation liquid.

【技术实现步骤摘要】
发酵法制备的牡丹花粉蛋白多肽
本专利技术涉及生物活性蛋白多肽领域，具体是一种发酵法制备的牡丹花粉蛋白多肽。
技术介绍
牡丹（PaeoniasuffruticosaAndr.）属毛莨科芍药属，落叶灌木，具有很高的观赏价值和医药价值。长久以来，牡丹深加工产品的开发利用却显得严重滞后，生产附加值很低，没有形成产业链。牡丹花粉不仅营养丰富而且含有多种生物活性物质。氨基酸含量在25.0％以上，富含有17种氨基酸，维生素B、维生素C含量丰富，还含有牡丹多糖、牡丹黄酮等生物活性物质。蛋白质含量39.3％，远高于一般花粉的蛋白质含量，被学术界称为蛋白质浓缩体、天然蛋白质之冠。天然花粉具有坚韧的细胞壁，其结构中的孢粉素具有耐酸、耐碱、耐温、耐压以及对胃酸和其他消化系统酶非常稳定的理化特性，阻碍了人体对花粉蛋白质的吸收利用。现有技术如授权公告号为CN103053893B的中国专利技术专利，公开了一种天然花粉发酵产物生产工艺，利用了先进的空气动力粉碎技术、生物发酵设备和技术，以天然花粉为原料，先利用空气动力将天然花粉粉碎破壁，再接入益生发酵微生物将花粉蛋白降解为氨基酸和多肽，从而获得一种营养丰富且含有大量益生物质的天然花粉发酵产物，最后经过干燥和粉碎制成产品。上述产品口感细腻、酸甜适中、无苦味臭味，但牡丹蛋白多肽的提取率不高，且提取的功能性多肽的活性不强，应用前景有限。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种发酵法制备的牡丹花粉蛋白多肽，具有优异的降血压功效，并且具备减肥功效。本专利技术针对
技术介绍
中提到的问题，采取的技术方案为：发酵法制备的牡丹花粉蛋白多肽，具备减肥功效，并且具有优异的降血压功效。发酵法制备牡丹花粉蛋白多肽的方法，包括花粉破壁、精油提取、发酵、脱脂、喷雾干燥。制备得到的牡丹花粉蛋白多肽不会被肠蛋白酶水解，直接作用于体内受体，可促进胰岛素和胰高血糖素的分泌和延长食物在肠道中的运转时间。同时，其可抑制血管紧张素转换酶（ACE）的活性，使激肽释放酶-激肽系统（KKS）处于激活状态，产生具有降低血压作用的舒缓激肽，降血压效果显著，明显优于现有技术。与此同时，牡丹花粉蛋白多肽还出于意料的具有减肥功效。发酵步骤为：在破壁后牡丹花粉中加入1~6倍体积的清水，再加入2~5wt‰精油、0.1~0.2wt‰的表面活性剂，灭菌后接种1~4wt‰植物乳杆菌和1~4wt‰酿酒酵母，于32~43℃、搅拌速率20~30r/min、自然pH条件下恒温厌氧发酵24~72h，灭菌后接种0.5~2.0wt‰枯草芽孢杆菌，于相同温度、搅拌速率、pH条件下发酵12~24h，发酵期间通入无菌空气0.001～0.01m3/min，过滤取发酵液，重复次数1~4次。其中，植物乳杆菌购于山东向日葵生物科技有限公司；酿酒酵母购于安琪酵母股份有限公司；枯草芽孢杆菌购于山东高龙生物科技有限公司。单单通过冷冻并机械破壁的方式来破坏花粉外壁，破壁率不高，会直接导致牡丹花粉蛋白多肽的提取率不高。在牡丹精油存在条件下，植物乳杆菌和酿酒酵母协同发酵，破坏牡丹花粉绒毡层的孢粉素，使得花粉细胞中的活性物质流出。枯草芽孢杆菌发酵过程产生中性蛋白酶，将溶出的牡丹花粉蛋白酶解成较小分子量的牡丹花粉蛋白多肽。花粉破壁步骤为将牡丹花粉置于-40~-50℃环境下冷冻2~24h，机械粉碎破壁，得到破壁后牡丹花粉。采用机械粉碎方法对花粉外壁进行初步破坏，有利于后序牡丹花粉的发酵操作。精油提取步骤为：在牡丹花瓣粉末中按料液比1g：2~6mL加入无水乙醇，置于微波萃取仪中萃取，微波功率为200~400W，一次微波作用时间为15~35s，提取次数为2~6次，过滤取萃取液静置，待其分层稳定后去掉水层，加入无水硫酸钠静置过夜，过滤取滤液，并旋蒸得到牡丹精油。相较于传统的SDE法，上述提取牡丹精油的方法提取的精油得率较高，提取温度较低，不会使精油中的有效成分受热分解或氧化破坏。脱脂步骤为在发酵液中加入2~4‰壳聚糖固定化脂肪酶，于25~50℃下恒温酶解0.8~2.5h，酶解结束后灭酶，过滤得到脱脂牡丹花粉蛋白多肽液。脂肪酶可将发酵液中的脂肪逐步水解成甘油和脂肪酸。固定化后的脂肪酶，其稳定性、酶活性、耐热性均有明显提高，并可重复使用。壳聚糖固定化脂肪酶的制备步骤为：用干燥壳聚糖粉末，用pH6.0~6.8的60~80mmol/L磷酸盐缓冲液浸泡过夜，然后加入壳聚糖粉末质量0.7~1.2％的1-乙基-3-（3-甲基氨基）丙基碳二亚胺活化0.5~0.9h，再加入壳聚糖粉末1~2倍体积的戊二醛偶联反应1~1.8h，用蒸馏水清洗5~8次，加入0.7~2.0mg/mL脂肪酶溶液和0.1~0.3‰活性短肽，于冰浴中缓慢搅拌0.5~1.5h，然后放置冰箱中过夜，次日用蒸馏水彻底冲洗，过滤干燥得到壳聚糖固定化脂肪酶。1-乙基-3-（3-甲基氨基）丙基碳二亚胺对壳聚糖进行化学改性，有效活化了壳聚糖表面羟基基团。活化后的壳聚糖表面氨基与戊二醛偶联得到优良的脂肪酶固定化载体。脂肪酶吸附在载体上形成壳聚糖固定化脂肪酶。活性短肽的氨基酸序列为SCASVCKARCLRARGCRCVSVYCRCLR。上述活性短肽可明显增强脂肪酶和脂肪酶固定化载体之间的物理和化学吸附作用力，提高固定化脂肪酶转化率，并且提高壳聚糖固定化脂肪酶可重复使用次数。表面活性剂为食品级表面活性剂。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：1.制备得到的牡丹花粉蛋白多肽不会被肠蛋白酶水解，直接作用于体内受体，可促进胰岛素和胰高血糖素的分泌和延长食物在肠道中的运转时间。同时，其可抑制血管紧张素转换酶（ACE）的活性，使激肽释放酶-激肽系统（KKS）处于激活状态，产生具有降低血压作用的舒缓激肽，降血压效果显著，明显优于现有技术。与此同时，牡丹花粉蛋白多肽还出于意料的具有减肥功效；2.采用1-乙基-3-（3-甲基氨基）丙基碳二亚胺活化壳聚糖，并与戊二醛偶联形成脂肪酶固定化载体，再利用氨基酸序列为SCASVCKARCLRARGCRCVSVYCRCLR的活性短肽来提高载体与脂肪酶之间的物理和化学吸附力，提高脂肪酶的稳定性、酶活性、耐热性和使用次数；3.在牡丹精油存在条件下，植物乳杆菌和酿酒酵母协同发酵，破坏牡丹花粉绒毡层的孢粉素，使得花粉细胞中的活性物质流出。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术方案作进一步说明：实施例1：发酵法制备的牡丹花粉蛋白多肽，具备减肥功效，并且具有优异的降血压功效。发酵法制备牡丹花粉蛋白多肽的方法，包括以下步骤：1）花粉破壁：将牡丹花粉置于-40~-50℃环境下冷冻2~24h，机械粉碎破壁，得到破壁后牡丹花粉；2）精油提取：在牡丹花瓣粉末中按料液比1g：2~6mL加入无水乙醇，置于微波萃取仪中萃取，微波功率为200~400W，一次微波作用时间为15~35s，提取次数为2~6次，过滤取萃取液静置，待其分层稳定后去掉水层，加入无水硫酸钠静置过夜，过滤取滤液，并旋蒸得到牡丹精油；3）发酵：在破壁后牡丹花粉中加入1~6倍体积的清水，再加入2~5wt‰精油、0.1~0.2wt‰的表面活性剂，灭菌后接种1~4wt‰植物乳杆菌和1~4wt‰酿酒酵母，于32~43℃、搅拌速率20~30r/min、自然pH条件下恒温厌氧发酵24~72h，灭菌后接种0.5~2.0wt‰枯草芽孢杆菌，本文档来自技高网...

【技术保护点】
发酵法制备的牡丹花粉蛋白多肽，其特征在于：所述的牡丹花粉蛋白多肽具备减肥功效，并且具有优异的降血压功效。

【技术特征摘要】
1.发酵法制备的牡丹花粉蛋白多肽，其特征在于：所述的牡丹花粉蛋白多肽具备减肥功效，并且具有优异的降血压功效。2.根据权利要求1所述的发酵法制备的牡丹花粉蛋白多肽，其特征在于：所述的牡丹花粉蛋白多肽的制备方法包括花粉破壁、精油提取、发酵、脱脂、喷雾干燥；其中，所述的发酵步骤为：在破壁后牡丹花粉中加入1~6倍体积的清水，再加入2~5wt‰精油、0.1~0.2wt‰的表面活性剂，灭菌后接种1~4wt‰植物乳杆菌和1~4wt‰酿酒酵母，于32~43℃、搅拌速率20~30r/min、自然pH条件下恒温厌氧发酵24~72h，灭菌后接种0.5~2.0wt‰枯草芽孢杆菌，于相同温度、搅拌速率、pH条件下发酵12~24h，发酵期间通入无菌空气0.001～0.01m3/min，过滤取发酵液，重复次数1~4次。3.根据权利要求2所述的发酵法制备的牡丹花粉蛋白多肽，其特征在于：所述的花粉破壁步骤为将牡丹花粉置于-40~-50℃环境下冷冻2~24h，机械粉碎破壁，得到破壁后牡丹花粉。4.根据权利要求2所述的发酵法制备的牡丹花粉蛋白多肽，其特征在于：所述的精油提取步骤为：在牡丹花瓣粉末中按料液比1g：2~6mL加入无水乙醇，置于微波萃取仪中萃取，微波功率为200~400W...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈雨诗，
申请(专利权)人：磐安县派普特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33