基于分子生物学技术的蛹虫草子囊孢子杂交育种方法技术

本发明专利技术涉及一种基于分子生物学技术的蛹虫草子囊孢子杂交育种方法，具体包括：在无菌环境中诱导并分离蛹虫草单孢子并培养形成菌落；利用PCR技术对分离的单孢子形成的菌落进行交配型基因MAT1‑1‑1、MAT1‑1‑2和MAT1‑2‑1进行检测；选取含有交配型基因MAT1‑1‑1和MAT1‑1‑2却不含有MAT1‑2‑1的单孢子形成的菌落，与含有交配型基因MAT1‑2‑1却不含有MAT1‑1‑1和MAT1‑1‑2的单孢子形成的菌落分别取适当大小的菌丝体置于培养液中进行暗培养；将适当浓度的组合培养后的菌液接种到蛹虫草人工培养基，经过培养一段时间后，人工培养基上长出新品种的蛹虫草子实体。本方法培育的蛹虫草新品种更容易获得较好的产量以及子实体活性物质含量，通过统计不同组合培养出的子实体产量和活性物质含量，可以获得能稳定生产出优质蛹虫草子实体的组合，本方法周期较短，工作量较小，是一种高效的蛹虫草育种方法。

Hybrid breeding method of Cordyceps militaris conidium based on molecular biology technology

The invention relates to a method including Cordyceps ascospores, breeding methods, molecular biology techniques based on: in a sterile environment induced and isolated and cultured Cordyceps single spore colony formation; use PCR technology to separate single spore forming colonies were MAT1 mating type genes 1 1, 2 and 1 MAT1 MAT1 2 1 were selected with detection; mating type gene MAT1 1 and MAT1 1 1 2 does not contain MAT1 2 1 single spore formation of colony, mycelium and containing in mating type gene MAT1 2 1 but not containing MAT1 1 and MAT1 1 1 - 2 single spore colonies were taken into the appropriate size of the culture medium dark culture; combination of appropriate concentration of culture after inoculation to Cordyceps militaris culture medium, after a period of culture, artificial culture medium to grow new varieties of Cordyceps militaris Entity. The new varieties of the Cordyceps militaris cultivation method is easier to get good yield and fruiting active substance content, through the statistics of different combinations of cultivated fruitbody yield and the content of active substances, can obtain stable production of combination of high quality Cordyceps militaris, the cycle is short, the workload is small, the breeding of Cordyceps militaris an efficient method.

【技术实现步骤摘要】
基于分子生物学技术的蛹虫草子囊孢子杂交育种方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种基于分子生物学技术的蛹虫草子囊孢子杂交育种方法。
技术介绍
在真菌的有性生殖过程中，交配型能够说明真菌的遗传控制情况和有性生殖发展的过程，因此，交配型基因对真菌的性别控制和遗传进化起着决定性作用，也是性亲和表现型遗传决定因子。已知真菌的交配系统分为同宗配合和异宗配合两大类。同宗配合是一种自体可孕的有性生殖方式，异宗配合是一种自体不孕的有性生殖方式。异宗配合根据控制交配型的不亲和性因子是一对还是两对，分为两类：具有一对不亲和性因子的二极性异宗配合(bipolarheterothallism)和具有两对不亲和性因子的四极性异宗配合(tetrapolarheterothallism)。蛹虫草是二极性异宗配合真菌。蛹虫草的两种不同的交配型是由单一的交配位点MAT1决定的。其中一个是MAT-alpha（MAT1-1），它含有一个编码α盒子蛋白的开放阅读框，此位点含有两个交配型基因：MAT1-1-1和MAT1-1-2。另一个是MAT-HMG(MAT1-2)，它含有一个编码一种调节蛋白的开放阅读框，而此调节蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于分子生物学技术的蛹虫草子囊孢子杂交育种方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）在无菌条件下，将新鲜、成熟的蛹虫草子实体悬于水琼脂培养基上方，避免子实体与培养基接触；所述蛹虫草子实体由常德炎帝生物科技有限公司的菌种库中大孢子头品种、小孢子头品种、尖头孢子粉品种中的一种培植出的；（2）将其转移至生化培养箱中，21℃避光培养4‑5天，使子囊孢子自然弹射到PDA培养基上；（3） 在体式显微镜下挑取只有单个子囊孢子的菌落，再加入2ml的无菌水，搅拌均匀，制备成孢子悬液，取200微升的孢子悬浮液，涂布PDA平板培养基上，放置于21℃生化培养箱中避光培养；(4)培养3‑4天后，在超净工作台上选取肉眼可见的...

【技术特征摘要】
1.基于分子生物学技术的蛹虫草子囊孢子杂交育种方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）在无菌条件下，将新鲜、成熟的蛹虫草子实体悬于水琼脂培养基上方，避免子实体与培养基接触；所述蛹虫草子实体由常德炎帝生物科技有限公司的菌种库中大孢子头品种、小孢子头品种、尖头孢子粉品种中的一种培植出的；（2）将其转移至生化培养箱中，21℃避光培养4-5天，使子囊孢子自然弹射到PDA培养基上；（3）在体式显微镜下挑取只有单个子囊孢子的菌落，再加入2ml的无菌水，搅拌均匀，制备成孢子悬液，取200微升的孢子悬浮液，涂布PDA平板培养基上，放置于21℃生化培养箱中避光培养；(4)培养3-4天后，在超净工作台上选取肉眼可见的子囊孢子单菌落，转移至新的PDA平板培养基上，每个PDA平板培养基上只培养单个菌落；(5)培养5天后，取纯化的单个子囊孢子菌落提取其DNA，利用PCR扩增技术对提取的子囊孢子单菌落DNA进行交配型基因MAT1-1-1、MAT1-1-2和MAT1-2-1的检测；(6)配置营养液：由葡萄糖2%、蛋白胨...

【专利技术属性】
技术研发人员：阳武雄，易思富，杨子遥，王卫，周丰，杨胜辉，
申请(专利权)人：常德炎帝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43