一种界面自组装羰基还原酶的制备及在S‑利卡西平合成中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种界面自组装羰基还原酶的制备及在S‑利卡西平合成中的应用，所述界面自组装羰基还原酶按如下方法制备：将羰基还原酶加入缓冲液中，再加入溶解有聚苯乙烯的甲苯溶液，在黑暗、80r/min、30℃条件下，于摇床中震荡反应2小时，离心，获得上层为有机相，界面自组装羰基还原酶分布于油水界面，下层为水相的反应体系，获得界面自组装羰基还原酶；界面自组装羰基还原酶在油水两相界面具有较好的催化功能，能够将奥卡西平转化为S‑利卡西平，S‑利卡西平的对映体过剩值大于98％。在水相中，辅酶NADH能够顺利实现原位再生，有利于提高底物的转化率。界面自组装酶能够实现多次重复利用，这也是游离酶不可比拟的优势。

【技术实现步骤摘要】
一种界面自组装羰基还原酶的制备及在S-利卡西平合成中的应用(一)
本专利技术涉及一种微生物来源界面自组装羰基还原酶的制备及其在抗癫痫药物醋酸艾斯利卡西平关键手性中间体S-利卡西平合成中的应用。(二)
技术介绍
界面自组装酶是聚合物-酶复合物，是将酶与大分子聚合物结合使被修饰的酶具有两亲性结构，结构类似于以蛋白质为基础的表面活性剂，既含有亲水性的蛋白质头部还含有疏水性聚合物尾，当被放到油-水体系中时，聚合物-酶中的聚合物部分伸展到油相，而酶部分嵌入在水相中，将酶固定在油-水界面上催化油水两相中的化学反应。将羰基还原酶与聚合物在合适的油水界面结合形成界面自组装羰基还原酶，并将其应用于油水两相体系催化羰基化合物的不对称还原制备手性药物中间体对于提高油水两相体系生物催化效率具有积极的意义。具有选择性的羰基还原酶可以不对称还原羰基化合物制备手性化合物。羰基还原酶广泛存在于微生物体内，直接采用含有羰基还原酶的微生物不对称还原潜手性羰基化合物可以制备手性醇。微生物细胞通常在水溶液中能够发挥较高的活性，而有机底物水溶性较低，因此微生物细胞在水相中催化水溶性较低的底物转化效率较低。采用水/有机相两相体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种界面自组装羰基还原酶，其特征在于所述界面自组装羰基还原酶按如下方法制备：将羰基还原酶加入pH 6.5、0.02M的Tirs‑HCl缓冲液中，再加入溶解有聚苯乙烯的甲苯溶液，在黑暗、80r/min、30℃条件下在摇床中震荡反应2小时，将反应液转移至离心管中1000rpm离心20min，形成上层为有机相、中间层为界面自组装羰基还原酶、下层为水相的体系，去除水相和有机相，获得界面自组装羰基还原酶；所述羰基还原酶加入量以缓冲液体积计为20～200U/ml，所述聚苯乙烯的甲苯溶液浓度为1.0～4.0g/L，所述聚苯乙烯的甲苯溶液与缓冲液体积比为1‑3:1。

【技术特征摘要】
1.一种界面自组装羰基还原酶，其特征在于所述界面自组装羰基还原酶按如下方法制备：将羰基还原酶加入pH6.5、0.02M的Tirs-HCl缓冲液中，再加入溶解有聚苯乙烯的甲苯溶液，在黑暗、80r/min、30℃条件下在摇床中震荡反应2小时，将反应液转移至离心管中1000rpm离心20min，形成上层为有机相、中间层为界面自组装羰基还原酶、下层为水相的体系，去除水相和有机相，获得界面自组装羰基还原酶；所述羰基还原酶加入量以缓冲液体积计为20～200U/ml，所述聚苯乙烯的甲苯溶液浓度为1.0～4.0g/L，所述聚苯乙烯的甲苯溶液与缓冲液体积比为1-3:1。2.如权利要求1所述界面自组装羰基还原酶，其特征在于所述羰基还原酶酶活为180U/mg。3.如权利要求1所述界面自组装羰基还原酶，其特征在于所述羰基还原酶按如下方法制备：(1)将BacillusanthracisCGMCCNo.12337分散于pH6.5、0.02M的Tris-HCl缓冲液中，置于0～4℃冰水浴中，在功率400W、超声2s、间歇4s的条件下超声破碎20min，破碎混合液8000r/min离心10min，获得上清液，即为粗酶液Ⅰ；(2)将粗酶液Ⅰ置于冰水浴中预冷至0～4℃，搅拌的同时缓慢加入硫酸铵粉末至硫酸铵质量饱和度为40％，硫酸铵完全溶解后，冰水浴缓慢搅拌1h，于10000r/min离心10min，上清液继续添加硫酸铵直至质量饱和度为60％，冰水浴缓慢搅拌1h，于10000r/min离心10min得沉淀，将所得沉淀重新溶解于1～2倍沉淀体积的pH6.5、0.02M的Tris-HCl缓冲液中，得粗酶液Ⅱ；(3)将粗酶液Ⅱ加入10...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧志敏，徐佳慧，王莹，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33