一种流产衣原体抗体双抗原夹心ELISA检测方法技术
A double antigen sandwich ELISA method for detection of Chlamydia abortus antibody
A Chlamydia abortus antibody double antigen sandwich ELISA detection method, which is characterized in that the S labeled His label MIP recombinant protein as antigen with His tag S tag MIP recombinant protein as antigen and antibody directed HRP markers, anti His tag, double antigen sandwich ELISA detection animal serum antibody against Chlamydia abortus. The method of detection of Chlamydia abortus antibody double antigen sandwich ELISA can reduce the false positive rate and improve the detection specificity.
【技术实现步骤摘要】
一种流产衣原体抗体双抗原夹心ELISA检测方法
本专利技术涉及一种流产衣原体抗体双抗原夹心ELISA检测方法，具体涉及一种以MIP表达蛋白建立的流产衣原体抗体双抗原夹心ELISA检测方法。
技术介绍
流产嗜性衣原体(Chlamydophilaabortus)是一种专性细胞内寄生的革兰氏染色阴性微生物，属于衣原体科(Chlamydiaceae)嗜性衣原体属(Chlamydophila)的一个成员，，具有广泛的宿主嗜性，主要寄生于猪、牛、羊等多种动物生殖道黏膜表面的上皮细胞，造成生殖道黏膜受损，导致以母畜流产、死胎、弱胎，公畜睾丸炎、包皮炎等为特征的慢性接触性传染病，同时也也能够感染人类，导致孕妇流产，是一种重要的人兽共患病病原。近年来，流产嗜性衣原体在我国流行较为严重，尤其是奶牛、牦牛、绵羊、山羊、猪等，严重阻碍了奶牛产业、牦牛产业等的进一步发展，并造成了巨大的经济损失。此外，作为一种人兽共患病，流产嗜性衣原体不仅引起人的结膜炎，而且导致孕妇流产。因此，及时、及早的发现衣原体，并采用敏感、特异的诊断方法，在准确诊断动物流产嗜性衣原体病，提供科学防控流产嗜性衣原体病的...
【技术保护点】
一种流产衣原体抗体双抗原夹心ELISA检测方法，其特征在于，采用带有S标记无His标签的MIP重组蛋白作为包被抗原，以带有His标签无S标签的MIP重组蛋白作为指示抗原和HRP标记的、抗His标签的抗体，进行动物血清流产衣原体抗体的双抗原夹心ELISA检测。
【技术特征摘要】
1.一种流产衣原体抗体双抗原夹心ELISA检测方法，其特征在于，采用带有S标记无His标签的MIP重组蛋白作为包被抗原，以带有His标签无S标签的MIP重组蛋白作为指示抗原和HRP标记的、抗His标签的抗体，进行动物血清流产衣原体抗体的双抗原夹心ELISA检测。2.根据权利要求1所述的流产衣原体抗体双抗原夹心ELISA检测方法，其特征在于，所述双抗原夹心ELISA反应条件分别是带有His标签的MIP重组蛋白的包被浓度为0.2μg/孔,血清稀释度为1:100，HRP标记的带有His标签的MIP重组蛋白稀释度为1:5000，封闭液为5％明胶，待测血清和具有His标签的MIP重组蛋白均于37℃反应45min,底物于室温显色时间20min。3.根据权利要求1或2所述的流产衣原体抗体双抗原夹心ELISA检测方法，其特征在于，所述HRP标记的His标签的MIP重组蛋白为酶标抗原。4.根据权利要求1或2所述的流产衣原体抗体双抗原夹心ELISA检测方法，其特征在于，所述双抗原夹心ELISA检测出阴阳临界点为0.261。5.根据权利要求1～4之一所述的流产衣原体抗体双抗原夹心ELISA检测方法，其特征在于，所述带有His标签的MIP重组蛋白是由以下步骤构建而成：(1)流产嗜性衣原体MIP蛋白的编码基因序列扩增：以流产衣原体SX5基因组为模板，设计含有His标签的指示抗原MIP蛋白基因的引物如SEDIDNO：3和SEDIDNO：4所示；扩增出含有His标签巨噬细胞感染增强因子基因，进行PCR扩增产物的回收和纯化得到含有His标签的流产嗜性衣原体MIP蛋白的编码基因；(2...
【专利技术属性】
技术研发人员：周继章，蔺俊丽，李兆才，娄中子，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62
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