沙眼衣原体抗原检测方法及其快速检测试剂盒和其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种沙眼衣原体抗原检测方法及其快速检测试剂盒和其制备方法，其方法包括下述步骤：（１）将胶体金标记的沙眼衣原体抗体载于载体上；并在与胶体金标记的抗体的载体相连的检测载体上包被沙眼衣原体单抗、多抗制成的检测线和由抗鼠、兔、羊ＩｇＧ二抗形成的控制线；（２）取人体的分泌物分散后，滴于胶体金标记的抗体的载体上，如有沙眼衣原体抗体则在检测载体上形成检测线、控制线双线为阳性，否则为阴性；该试剂盒是由样品处理液和抗原金标检测板组成，在检测板上设有测试端和检测层，测试端设有胶体金标记的沙眼衣原体抗体，检测层包被有由沙眼衣原体单抗、多抗形成的检测线和控制线；本发明专利技术的方法为一步法检测方法，灵敏度高、特异性强；而且速度快、简便，无需专门设施，适用于临床检测或普查等多种场合。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于诊断、检测沙眼衣原体抗原的方法，以及用于该方法的沙眼衣原体金标抗原快速检测试剂盒和其制备方法。
技术介绍
衣原体是专性的细胞内寄生物，只能在宿主细胞内生存。它的生长周期是独特的，形态学上位于细胞外面的衣原体原生小体(以下简称EB)被摄取到细胞内形成空泡包涵体，然后转变为网状小体(以下简称RB)。RB具有繁殖能力，但缺少感染能力；并且在细胞内繁殖的RB很快转变为EB。它穿破包涵体，破坏细胞壁，到达细胞外。EB缺乏繁殖能力但具有感染能力。目前证实有四种衣原体即沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体、肺炎衣原体和猫心衣原体。其中沙眼衣原体是数种性传播疾病的病原因素，包括非淋病性尿道炎、继淋病性尿道炎之后的直肠炎、子宫颈炎、不肓症、成人的赖特禾病综合症、包涵体结肠炎以及新生儿肺炎。如未能及时治疗感染，沙眼衣原体可致男性睾丸附睾炎或延及女性输卵管，引发一系列并发症如盆腔炎和子宫外妊娠。诊断男女病人衣原体感染的方法，目前有几种不同的方法。传统的诊断方法是细胞培养法，取女性子宫颈管可男性尿道的标本接种到单细胞层，然后进行48-72小时培养。对单细胞层进行染色，以观察有无典型的包涵体。如需提高此法的灵敏度，可将阴性培养物接种新鲜单层细胞，继续培养48-72小时后再观察，细胞培养法虽然灵敏度高，特异性强；但该方法工作量大，周期长，要求专门的设施和专业人员操作，而且费用昂贵。实际临床应用受到一定的限制。免疫荧光法和近来建立的合成酶链反应(LCR)和聚合酶链反应(PCR)检测方法均要求专门设施和掌握技巧的技术人员进行实验操作及判读结果，检测过程需要多步骤和数小时才能得出结果。而且需有相当大的测试标本数量才能达到可接受的成本效益比。本专利技术的公开本专利技术的第一目的是为了提供一种沙眼衣原体抗原的检测方法，该方法为一步法检测方法，灵敏度高、特异性强；而且速度快、操作简便，无需专门设施，适用于临床检测或普查等多种场合。本专利技术的第二目的是为了提供一种沙眼衣原体抗原快速检测试剂盒，该试剂盒针对沙眼衣原体抗原提供一种简便而且直接的一步法检测盒，利用该试剂盒检测沙眼衣原体抗原的灵敏度高、特异性强，而且速度快、操作简便，无需专门设施。本专利技术的第三目的是为了提供一种沙眼衣原体抗原快速检测试剂盒的制备方法，该制备方法简单、稳定性、重复性好。本专利技术的第一目的可通过如下措施来实现一种沙眼衣原体抗原检测方法包括下述步骤(1)将胶体金标记的沙眼衣原体抗体包括单抗、多抗载于玻璃纤维或无纺布载体上；并在与胶体金标记的抗体的载体相连的检测载体上包被沙眼衣原体单抗、多抗制成的检测线和由抗鼠、兔、羊IgG二抗形成的控制线；(2)取人体的分泌物经样品分散剂将其分散后，滴于胶体金标记的抗体的载体上，如有沙眼衣原体抗体则在检测载体上形成检测线、控制线双线为阳性，否则为阴性。本专利技术的第二目的可通过如下措施来实现一种沙眼衣原体抗原金标快速检测试剂盒内设有样品处理液和沙眼衣原体抗原金标检测板。所述的样品处理液2包括样品处理液A和样品处理液B，样品处理液A为样品组织细胞分散剂溶液；样品处理液B为沙限衣原体原生小体的胞液和胞质膜溶解液。所述的沙眼衣原体抗原金标检测板是在衬板上设有加样端吸水层、检测层和吸水端吸水层，在检测层与吸水端吸水层之间设有沙眼衣原体金标抗体层；在检测层上包被有检测线和控制线。本专利技术的第二目的还可通过如下措施来实现所述的样品处理液A选自胰蛋白酶、胶原蛋白酶、胶原酶中的至少一种，其浓度为0.2-0.4％。所述的样品处理液B为离子型去污剂，选自N-十二烷酰肌氨酸钠、十二烷基肌氨酸钠中的至少一种，其浓度为0.002-0.006％。所述的沙眼衣原体抗原金标检测板是在衬板上粘贴有加样端吸水层、检测层和吸水端吸水层，在检测层与吸水端吸水层之间设有金标抗体层；在检测层上包被有检测线和控制线。本专利技术的第三目的可通过如下措施来实现一种沙眼衣原体抗原金标快速检测试剂盒的制备方法主要包括制备金标抗体层和检测层的控制线和检测线的包被，然后在衬板上组合沙眼衣原体抗原金标试纸条和检测板。所述的金标抗体层的制备方法包括下述步骤i胶体金的制备；在浓度为0.004-0.012％的氯金酸中加入其体积的1.3-2％、浓度为1-3％的柠檬酸三钠，煮沸10-20分钟，可得到15-50纳米的胶体金原子溶液；ii胶体金标记沙眼衣原体抗体，在胶体金溶液中用0.2M碳酸钾调PH8.0-8.4，按100ml胶体金溶液加入2-10mg沙眼衣原体抗体，搅拌10-20分钟后，再在溶液中按0.1-0.6mg/100ml加入动物血清蛋白和按4-12ml/100ml加入盐液得到混合液；iii将上述混合液经2000转/分离心10-15分钟，去沉淀物，得上清液；iv将上清液经10000转/分离心60-80分钟得沉淀物；v将沉淀物按4-10ml/100ml溶于0.02M、PH7.4Tris-HCl缓冲液得金标抗体溶液；该缓冲液中含有其重量的0.2-0.6％的动物血清白蛋白和0.01-0.06％叠氮钠；vi将金标抗体溶液浸入玻璃纤维或无纺布至液体开始渗出为止而形成金标抗体层。所述的胶体金标记沙眼衣原体单抗或兔、羊抗沙眼衣原体抗体。所述的检测层是在纤维素膜上设有由沙眼衣原体单抗或兔、羊抗沙眼衣原体抗体-多抗构成的检测线和由抗鼠、兔、羊IgG抗体形成的二抗抗体控制线。其制备方法是浓度为0.6-1.4mg/ml的抗体中加入1-3％的固定剂，再利用喷膜机将抗体喷在纤维膜上，喷膜后自然凉干，再用0.01MPH7.0含10％的小牛血清的PBS，在37℃下封闭30分钟凉干。其中喷膜时，当检测线抗体为单抗时，则控制线抗体为兔或羊抗鼠IgG抗体。当检测线抗体为兔抗沙眼衣原体抗体，则控制线抗体为羊抗兔IgG抗体。当检测线抗体为羊抗沙眼衣原体抗体，则控制线为兔抗羊IgG抗体。本专利技术相比现有技术具有如下优点1、本专利技术检测、诊断沙眼衣原体抗原的方法为一步法，具有高度的种特异性、很少出现困扰临床的假阴性、假阳性问题，具有高度的灵敏性，且操作简便，无需专门设施。2、本专利技术的检测试剂盒检测沙眼衣原体抗原时具有高度的种特异性，且灵敏度高、检测迅速、快捷、方便，很少出现假阴性、假阳性的问题，适于临床或普查。3、本专利技术的试剂盒的制备方法简便、稳定性、重复性好。图面说明附图说明图1是本技术的结构示意图1-试剂盒2-样品处理液3-检测板4-加样孔5-观察孔图2是本技术的检测板结构示意图6-加样端吸水层7-金标抗体层8-控制线9-检测线10-检测层11-吸水端吸水层12-衬板本专利技术的实施方式本专利技术还将结合实施例作进一步详述实施例一一种沙眼衣原体抗原检测方法包括下述步骤(1)将胶体金标记的沙眼衣原体抗体包括单抗、多抗载于玻璃纤维或无纺布载体上；并在与胶体金标记的抗体的载体相连的检测载体上包被沙眼衣原体单抗、多抗制成的检测线和由抗鼠、兔、羊IgG二抗形成的控制线；(2)取人体的分泌物经样品分散剂将其分散后，滴于胶体金标记的抗体的载体上，如有沙眼衣原体抗原则在检测载体上形成检测线、控制线双线为阳性，否则为阴性。参照图1，一种沙眼衣原体抗原金标快速检测试剂盒1内设有样品处理液2和沙眼衣原体抗原金标检测板3。所述的样品处理液2包括样品处理液A和样品处理本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种沙眼衣原体抗原检测方法，其特征在于（１）将胶体金标记的沙眼衣原体抗体包括单抗、多抗载于玻璃纤维或无纺布载体上；并在与胶体金标记的抗体的载体相连的检测载体上包被沙眼衣原体单抗、多抗制成的检测线和由抗鼠、兔、羊ＩｇＧ二抗形成的控制线；（２）取人体的分泌物经样品分散剂将其分散后，滴于胶体金标记的抗体的载体上，如有沙眼衣原体抗体则在检测载体上形成检测线、控制线双线为阳性，否则为阴性。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李克生，杜惠芬，
申请(专利权)人：李克生，
类型：发明
国别省市：62[中国|甘肃]