肺炎衣原体抗原,制备该抗原的方法,利用该抗原测定抗肺炎衣原体抗体的方法及试剂技术

一种肺炎衣原体抗原，它包含来源于肺炎衣原体外膜的蛋白质。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
,制备该抗原的方法,利用该抗原测定抗肺炎衣原体抗体的方法及试剂的制作方法
本专利技术涉及用于诊断肺炎衣原体感染的，制备该抗原的方法，用该抗原测定抗肺炎衣原体抗体的方法及试剂。
技术介绍
衣原体是专性的细胞内寄生物，只能在宿主细胞内生存。它的生长周期是独特的，形态学上位于细胞外面的衣原体原生小体(以后称作EB)被摄取到细胞内形成空泡包涵体，然后转变为网状小体(以后称作RB)。RB具有繁殖能力，但缺少感染能力，并且在细胞内繁殖的RB很快转变为EB，它穿破包涵体，破坏细胞壁，到达细胞外。EB缺乏繁殖能力但具有感染能力。目前证实有四种衣原体(沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体，肺炎衣原体和猫心衣原体)，已知其中的肺炎衣原体通过空气传播感染人体。最近几年，肺炎衣原体作为肺炎、支气管炎、急性上呼吸道感染等呼吸系统感染的致病微生物而引起广泛的注意。在世界不同地方所进行的血清流行病学研究表明，抗肺炎衣原体抗体的发生率，在欧洲和美国为40-50％，在台湾、巴拿马、伊朗等为60％或60％以上，在日本为50-60％。由于肺炎衣原体感染的实际情况变得更加显而易见，因此增加了人们对感染的关注。诊断衣原体感染最灵敏的血清学方法是Wang和Grayston建立的间接微量免疫荧光试验(微量IF试验)(衣原体试剂引起的沙眼和相关疾病，医学摘要，阿姆斯特丹，pp.273-288，1971)。但是由于微量IF试验的步骤复杂，临床实验室中还没用它作为诊断方法。而且，标准的微量IF试验需要纯化的衣原体EB。为了进行免疫荧光反应，微量IF试验要求所鉴定微生物的形态和结构完整。因此不能应用形态或结构改变了的EB或破坏了的EB。但是由于EB具有感染能力和毒性，应用完整的EB作抗原物质需要特殊的处理使机体能防御感染。因此可应用甲醛，丙酮等固定剂处理的EB作抗原。另一方面，近来建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)具有这样的优越性，即它可以简单、便利地处理大量样品。有应用ELISA测定抗衣原体抗体的方法的报道，大多数的方法应用完整的衣原体EB作抗原。因此，由于应用了不完全纯化的抗原而导致非特异性反应的存在。这大多由衣原体的复合抗原性引起。关于衣原体的抗原性，据信有属特异性抗原，种特异性抗原和biobar特异性抗原。衣原体的代表性属特异性抗原为脂多糖(以后称为LPS)，它具有与来源于某些肠细菌Re突变体LPS共同的抗原。代表性的种特异性或biobar特异性的抗原为衣原体的主要外膜蛋白(以后称作MOMP)，该蛋白占衣原体外膜蛋白的60％左右。但是，MOMP也具有属特异的抗原性(Collett等，美国微生物协会年会，华盛顿特区，摘要号D-159，1986)。除MOMP外的衣原体外膜抗原主要是属特异性抗原，但也存在一些种特异的抗原性。例如Iijima等报道，用肺炎衣原体的EB进行免疫印迹测定，结果显示肺炎衣原体的分子量(MW)为40K道尔顿的MOMP是属特异性的，分子量为43K道尔顿、46K道尔顿和53K道尔顿的蛋白质是种特异性的，另外分子量为98K道尔顿的蛋白质可能是种特异性的(Y.Iijima等，临床微生物学杂志，p 583-588(1994))。如上所述，衣原体的抗原性很复杂，同属的衣原体在不同种间其抗原性存在着明显的差异。因此，尽管已经建立测定抗沙眼衣原体抗体的方法(日本未审查专利出版物Hei4-297871)，但由于肺炎衣原体和沙眼衣原体的抗原性彼此大不相同，该方法不能简单地以种特异性的方式测定肺炎衣原体。感染有肺炎衣原体的个体携带的抗衣原体抗体也表现出与衣原体复杂的抗原性相一致的多样性。尽管这种模式随被感染的个体而变化，但应用EB本身作抗原可产生非特异性反应，因此用它进行特异的和高度精确的测定是困难的。专利技术公开本专利技术的第一目的是提供，该抗原具有高度的种特异性，很少有困扰临床的假阴性，假阳性率低，有很好的重现性。本专利技术的第二目的是提供一种制备的方法，该抗原具有高度的特异性，很少有困扰临床的假阴性，假阳性率低，并且有很好的重现性。本专利技术的第三目的是提供一种测定抗肺炎衣原体抗体的方法，该方法具有高度的种特异性，很少有困扰临床的假阴性，假阳性率低，允许简单的测定和样品的简单收集，能反映样品供体的临床情况，并且具有高度灵敏性。本专利技术的第四目的是提供测定抗肺炎衣原体抗体的试剂，它可提供高度的种特异性，很少有困扰临床的假阴性，假阳性率低，允许简单的测定，并且有高度的灵敏性。本专利技术的主题如下(1)一种，它包括从肺炎衣原体外膜而来的蛋白质。(2)上面(1)中的，它与抗沙眼衣原体抗体或抗鹦鹉热衣原体抗体基本上不发生非特异性反应。(3)上面(1)或(2)中的，其中来源于肺炎衣原体外膜的蛋白质，至少包括分子量为大约43K道尔顿，46K道尔顿和53K道尔顿这样三种蛋白质中的一种。(4)上面(1)-(3)中的，其中来源于肺炎衣原体外膜的蛋白质包括分子量为大约43K道尔顿，46K道尔顿，53K道尔顿的三种蛋白质。(5)一种制备的方法，包括用离子型去污剂溶解肺火衣原体原生小体的胞液和胞质的膜，然后移去溶解的部分，得到残余部分。(6)一种测定抗肺火衣原体抗体的方法，包括应用上面(1)-(4)中的任意。(7)上面(6)中测定抗肺炎衣原体抗体的方法，包括把(1)-(4)中的一种固定到固相载体上，使固相载体与待测样品接触，使所得抗原-抗体复合物与标记的抗样品中抗体的抗体接触，测定结合的或未结合的标记的抗体数量，根据测定值来确定样品中的抗肺炎衣原体抗体。(8)上面(7)中测定抗肺炎衣原体抗体的方法，其中待测的样品是人的泪液，咽部化验标本或人的血清。(9)上面(7)或(8)中测定抗肺炎衣原体抗体的方法，其中标记的抗体是标记的抗人IgG抗体，标记的抗人IgA抗体或标记的抗人IgM抗体。(10)上面(7)-(9)中任意测定抗肺炎衣原体抗体的方法，其中标记的抗体是酶标记的抗体。(11)一种测定抗肺炎衣原体抗体的试剂，它包含上面(1)-(4)中任意。(12)上面(11)中测定抗肺炎衣原体抗体的试剂，它包含固定在固相载体上的固定化抗原和与待测抗体反应的标记的抗体。(13)上面(12)中测定抗肺炎衣原体抗体的试剂，其中的固相载体是聚苯乙烯珠或聚苯乙烯微量滴定板。(14)上面(12)或(13)中用于测定抗肺炎衣原体抗体的试剂，其中标记的抗体是酶标记的抗体。(15)上面(14)中用于测定抗肺炎衣原体抗体的试剂，其中酶标记的抗体是碱性磷酸酶标记的抗体或辣根过氧化物酶标记的抗体。下面对本专利技术进行详细阐述。肺炎衣原体的外膜是不包含胞质和胞质膜的肺炎衣原体细胞壁，主要由蛋白质和脂类组成。本专利技术的包括来源于上述肺炎衣原体外膜的蛋白质。在中，优选那些与沙眼衣原体或鹦鹉热衣原体基本上不发生非特异性反应的抗原。因为它们很少有困扰临床的假阴性或假阳性。本文所用术语“基本上不产生非特异性反应物”指没有或几乎没有非特异性反应。来源于肺炎衣原体外膜的蛋白质为这样一些蛋白质，它们的分子量为大约30K道尔顿、大约37K道尔顿、大约40K道尔顿、大约43K道尔顿、大约46K道尔顿、大约53K道尔顿、大约60K道尔顿和大约98K道尔顿。对于本专利技术的，在来源于上述肺炎衣原体外膜的蛋白质中优选对肺炎衣原体具有种特异性的，分子量为大约43K道本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：守川俊英，川越清隆，井筒浩，井口晃史，山木光男，
申请(专利权)人：日立化成工业株式会社，
类型：发明
国别省市：