一种检测免疫性血小板减少症血小板自身抗体的方法技术
A method for detecting platelet autoantibodies in patients with immune thrombocytopenia
The present invention is a highly specific and sensitive method for detecting platelet autoantibodies in patients with immune thrombocytopenia. Use the following steps: preparation of Goat anti mouse monoclonal antibody (anti platelet monoclonal antibody) and perforated plate which is coated with antibody; platelet specific serum or platelet surface of centrifugal separation, adding O of normal platelets, platelet lysate dissolved into the supernatant; the supernatant with antibody coated porous plates and incubated at room temperature; with alkaline phosphatase labeled Goat anti human monoclonal antibody (anti two) and incubated at room temperature; adding substrate buffer solution, incubated at room temperature and color matching test data; T test. The invention has high sensitivity and specificity.
【技术实现步骤摘要】
一种检测免疫性血小板减少症血小板自身抗体的方法
：本专利技术属于一种血小板临床试验研究时用来检测免疫性血小板减少症血小板自身抗体的具有较高特异性和敏感性的新型试验检测方法。
技术介绍
：血小板减少症是临床上血液科常见疾病。根据发病机制的不同可分为免疫性血小板减少症和非免疫性血小板减少症。如何区分两者需要一种较高特异性和敏感性的血小板自身抗体试验检测方法。目前血小板抗体的检测方法出现的早晚，可分为I期、II期及III期检查方法。I期检查出现于19世纪50年代至70年代，主要检测患者血清或血浆在体外对正常血小板功能的影响，所用的试验方法均是间接法，其敏感性和特异性均很低。II期试验方法在19世纪70年代发展起来，主要是检测血小板相关抗体。血小板相关抗体虽然有较高的敏感性但特异性较低。III期试验方法是在19世纪80年代中期发展起来的抗原特异性分析法。最近发展起来的糖蛋白俘获检查法-即单克隆抗体固定特异血小板抗原法，不仅可检测血小板特异性抗体(间接法)而且可检测血小板相关的特异性抗体(直接法)；并且血小板裂解发生在特异性抗体与血小板膜糖蛋白结合后，避免了去垢剂处理对自身...
【技术保护点】
一种检测免疫性血小板减少症血小板自身抗体的方法，其特征在于它采用如下步骤：(1)制备备抗体包被多孔板，每孔内加入羊抗鼠单克隆抗体(一抗)，过夜孵育后，加入抗血小板单克隆抗体，室温孵育备用；(2)离心机分离患者血清或血小板表面的血小板特异性抗体，加入正常人O型血小板，室温孵育，血小板溶解液(含蛋白酶抑制剂)溶解血小板，制成上清液；(3)将上述上清液加入步骤1制备好的抗体包被多孔板，室温孵育，再加入碱性磷酸酶标记的羊抗人单克隆抗体(二抗)，室温孵育；(4)加PNPP/底物缓冲剂溶液，室温孵育至显色，观察结果；(5)所有试验数据用配对T检验进行统计学分析。
【技术特征摘要】
1.一种检测免疫性血小板减少症血小板自身抗体的方法，其特征在于它采用如下步骤：(1)制备备抗体包被多孔板，每孔内加入羊抗鼠单克隆抗体(一抗)，过夜孵育后，加入抗血小板单克隆抗体，室温孵育备用；(2)离心机分离患者血清或血小板表面的血小板特异性抗体，加入正常人O型血小板，室温孵育，血小板溶解液(含蛋白酶抑制剂)溶解血小板，制成上清液；(3)将上述上清液加入步骤1制备好的抗体包被多孔板，室温孵育，再加入碱性磷酸酶标记的羊抗人单克隆抗体(二抗)，室温孵育；(4)加P...
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