测定人血浆生物样品中的DTPA-Zn的方法技术

本发明专利技术涉及测定人血浆生物样品中的DTPA‑Zn的方法。具体的说，本发明专利技术涉及测定人血浆生物样品中的DTPA‑Zn的方法，该方法使用液相色谱‑串联质谱法测定经处理的人血浆生物样品中的DTPA‑Zn的含量，包括如下步骤：(1)生物样品的处理，(2)液相色谱‑串联质谱测定，(3)数据处理与分析。本发明专利技术方法呈现出如本发明专利技术说明书所述优异效果。

Methods plasma DTPA in biological samples Zn determination

The present invention relates to a method of human plasma DTPA in biological samples Zn determination. Specifically, the invention relates to a method of human plasma DTPA in biological samples Zn determination, the method of using liquid chromatography to determine the content of plasma biological sample processing in DTPA Zn tandem mass spectrometry, which comprises the following steps: (1) the treatment of biological samples, (2) liquid chromatography tandem mass spectrometry, (3) data processing and analysis. The inventive method exhibits excellent results as described in the present invention.

【技术实现步骤摘要】
测定人血浆生物样品中的DTPA-Zn的方法
本专利技术属于生物医药
，涉及一种可靠的方法用以测定生物体例如人、大鼠给予上述DTPA-金属螯合剂后生物样品例如血、尿等中的上述金属螯合剂的含量，以评估这些金属螯合剂的治疗效果或其在体内的行为。特别地，本专利技术涉及一种测定人血浆生物样品中的DTPA-Zn的方法。
技术介绍
铅污染以及铅中毒对人体健康的危害已经受到广泛关注。铅是人体非必需元素，主要通过呼吸道、消化道进入人体吸收，能够在体内蓄积，对全身各系统和器官有毒性作用，主要影响神经、消化、血液系统，铅污染和铅中毒是需要重点解决的公共卫生问题[HaoFT,DuXQ,NiuYM,etal.Progressinresearchoftheleadintoxication[J].ChinJIndMed(中国工业医学杂志),2008,21:200-202.1；ZhouQQ,HuFF,XiaCY,etal.Studyprogressonhealthhazardsinoccupationallead-exposedworkers[J].ChinJIndMed(中国工业医学杂志),2013,26:本文档来自技高网...

【技术保护点】
测定人血浆生物样品中的DTPA‑Zn的方法，该方法使用液相色谱‑串联质谱法测定经处理的人血浆生物样品中的DTPA‑Zn的含量，包括如下步骤：(1)生物样品的处理：(1a)取含有或不含有DTPA‑Zn的人血浆50μL，置于1.5mL离心管中，加内标溶液即25μg/mL的EDTA‑Zn水溶液20μL或者不加内标溶液，水900μL(或者不加内标溶液时加水920μL，使血浆、水、任选的内标溶液总体积为970μL)，涡流混合3min，全部上样于固相萃取小柱上；(1b)上样后依次用1mL水、1mL甲醇清洗，最后用含1％氨水的甲醇0.5mL洗脱；(1c)收集该洗脱液，吹干，残余物用150μL水复溶，吸取10...

【技术特征摘要】
1.测定人血浆生物样品中的DTPA-Zn的方法，该方法使用液相色谱-串联质谱法测定经处理的人血浆生物样品中的DTPA-Zn的含量，包括如下步骤：(1)生物样品的处理：(1a)取含有或不含有DTPA-Zn的人血浆50μL，置于1.5mL离心管中，加内标溶液即25μg/mL的EDTA-Zn水溶液20μL或者不加内标溶液，水900μL(或者不加内标溶液时加水920μL，使血浆、水、任选的内标溶液总体积为970μL)，涡流混合3min，全部上样于固相萃取小柱上；(1b)上样后依次用1mL水、1mL甲醇清洗，最后用含1％氨水的甲醇0.5mL洗脱；(1c)收集该洗脱液，吹干，残余物用150μL水复溶，吸取10μL进行LC-MS/MS分析；(1d)标准曲线的制备：取不同浓度的DTPA-Zn标准系列溶液分别加至空白人血浆中，配制成相当于浓度为1、2、5、10、20、50、和100μg/mL的标准曲线血浆样品；取该血浆样品50μL，依次加入内标溶液20μL，水900μL，涡流混合3min，全部上样于固相萃取小柱上，接着照以上(1b)和(1c)操作，根据LC-MS/MS分析结果绘制标准曲线，该标准曲线用于计算各种样品中的目标物质含量；(2)液相色谱-串联质谱测定：(2a)提供高效液相色谱仪和串联质谱仪，所述高效液相色谱仪配备梯度泵和进样器，所述串联质谱仪配备电喷雾离子源和数据处理系统；(2b)色谱条件：所用的分析柱为SHISEIDOProteonavi品牌的色谱柱(其规格例如为5μm，250×4.6mmI.D.)，柱前连接C18保护柱(其规格例如为4×3.0mmI.D.，例如美国Phenomenex公司的保护柱)，流动相为甲醇-2mM甲酸铵(例如，其中含0.03％氨水)(50:50，v/v)，流速0.45mL/min；(2c)质谱条件：电喷雾离子化源(例如使用TurboIonspray源)，负离子方式检测；喷射电压为-4000V；源温度为500℃；卷帘气(CUR)为20；碰撞气(CAD)为4；扫描方式为多反应监测(MRM)，用于定量分析的离子反应分别为m/z454.2→m/z364.3+m/z226.6→m/z204.5(DTPA-Zn，CE为45V)和m/z353.0→m/z263.0(EDTA-Zn，CE为15V)，扫描时间为150msec；(3)数据处理与分析(3a)通过上述液相色谱-串联质谱测定得到生物样品中的目标物质含量；和，任选的(3b)用非房室模型计算选自下列的一下或多个药动学参数：Cmax、Tmax、t1/2、MRT、AUC0-t、Vz、CL；其中，Cmax为实测的最大血药浓度，Tmax为口服给药后血药浓度达峰时间，t1/2为药物末端消除半衰期，MRT为药物在体内平均滞留时间，血药浓度-时间曲线下面积AUC0-t由梯形法计算得到，Vz为稳态时表观分布容积，CL为清除率；以及，任选的(3c)计算给药的生物利用度：在等当用药剂量下，用第二给药方式所得AUC值除以第一给药方式所得AUC值再乘以100％所得百分数，作为第二给药方式相对于第一给药方式的相对生物利用度。2.根据权利要求1的方法，其中所述人血浆是从给予或未给予Zn-DTPA的人静脉血置于含肝素钠的离心管中，2000～4000g离心10～30min(例如3000g离心20min)获得的血浆。3.根据权利要求1的方法，其中所获得的人血浆任选的被置于-20℃冰箱中冻存，以等待测定。4.根据权利要求1的方法，其中所用的内标为EDTA-ZnNa2·xH2O。5.根据权利要求1的方法，其中所述固相萃取小柱在上样前，先用1mL甲醇活化，再用1mL水平衡；或者，先用2mL甲醇活化，再用2mL水平衡。6.根据权利要求1的方法，其中：所述高效液相色谱仪例如是美国安捷伦公司Agilent1200型液相色谱仪；所述串联质谱仪例如是美国ABSciex公司API4000型串联质谱仪；例如其配有TurboIonspray离子化源以及Analyst1.5数据处理系统；和/或所述用于药动学参数计算用的软件为软件，例如其版本为5.2.1版。7.根据权利要求1的方法，其中步骤(3a)中，各组的参数均用平均数据即“均数±标准差”的方式表示；进一步的，所述平均数据是以样本数大于等于3所得的平均数。8.根据权利要求1的方法，其中所述第二给药方式相对...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭继芬，孟繁华，虞林，李照丰，
申请(专利权)人：万舒北京医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11