本发明专利技术属于生物医药领域，尤其涉及布美他尼在缺血性脑卒中后恢复期促进神经功能重建中的应用，具体为布美他尼在缺血性脑卒中后恢复期神经功能重建药物中的应用。研究发现，布美他尼能够促进缺血性脑卒中大鼠的神经轴突再生、新生轴突突触重塑、运动神经功能恢复、下调缺血皮层周边的NogoA表达水平、上调缺血皮层周边的BDNF蛋白表达水平，以及通过上调缺血皮层周边的BDNF蛋白表达水平和下调NogoA水平促进神经轴突的再生。
Bumetanide promote application of nerve function reconstruction in the period of recovery after ischemic stroke
The invention belongs to the field of biology and medicine, especially to promote the application of bumetanide nerve function reconstruction in the period of recovery after ischemic stroke, specifically for the recovery of nerve function reconstruction application of bumetanide in medicine after cerebral ischemic stroke. The study found that bumetanide can promote ischemic stroke in rats, newborn axon axon regeneration, synaptic remodeling of motor nerve function recovery, lower the level of NogoA expression in ischemic cortex surrounding the ischemic cortex surrounding, up-regulated the expression level of BDNF protein, and by regulating the ischemic cortex surrounding the expression level of BDNF and lowered the level of NogoA and promote axonal regeneration.
【技术实现步骤摘要】
布美他尼在缺血性脑卒中后恢复期促进神经功能重建中的应用
本专利技术属于生物医药领域，尤其涉及布美他尼在缺血性脑卒中后恢复期促进神经功能重建中的应用。
技术介绍
脑卒中是临床上导致成年人残疾的主要原因之一，对患者，家属及医疗保健系统都造成了极大的负担，虽然对脑卒中已经进行了大量的研究，但是目前对其有效的治疗方法还是有限的，急性期溶栓疗法虽然有效，但却受到3-6小时的时间窗限制，所以对大部分患者来说，神经功能缺失是不可避免的。因此，寻找新的作用靶点和作用机制以及相关药物是当今治疗脑卒中研究的热点。许多研究表明，在脑梗死或其它脑损伤后，损伤侧和健侧半球皮质神经元的轴突会出现芽生，并与皮层和皮层下失神经支配的运动相关区域重建联系。脑梗死后中枢神经系统轴突再生的情况包括以下几种:局灶的脑梗死会导致起源于健侧运动皮层的皮质红核束发出芽生纤维到达对侧红核；或起源于健侧运动皮层的皮质脊髓束发出芽生纤维到达对侧颈段脊髓；健侧运动皮层发出神经纤维到达对侧纹状体和皮层梗死周边区域。这些新生的轴突芽生纤维可能是参与脑梗死后功能重组的重要解剖学基础。然而，脑损伤后，新生神经元和轴突发挥的神经修复作用十分有限，在此过程中许多新生神经元会发生生理性凋亡，存活率仅10%，这源于内在的再生动力不足，周围不利的微环境以及神经营养因子的缺乏等。已有大量的研究证实：髓磷脂相关的蛋白，包括勿动蛋白(Nogo)、髓鞘相关糖蛋白及少突胶质细胞髓鞘糖蛋白，它们与Nogo受体结合后会激活Rho/Rho激酶(ROCK)信号通路，使肌动蛋白细胞骨架重组，生长锥塌陷，从而抑制轴突再生。所以通过抑制Rho/ROCK信号通路可以达到促进轴突再生，明显改善神经功能的目的。体内除了不利于神经再生的抑制因子，还存在许多促生长因子或细胞因子如促红细胞生成素，成纤维细胞生长因子和粒细胞集落刺激因子，可以促进轴突芽生，神经发生和神经修复。例如，BDNF在神经损伤后表达上调，并且能够促进皮质脊髓束的芽生和神经细胞的存活。布美他尼作为一种对氨磺酰类袢利尿剂，常被用于高血压及各种水肿性疾病。由于布美他尼阻断NKCC1阳离子氯化物共转运体可降低神经元中的氯离子浓度，增加GABA的超极化作用，降低神经元兴奋性，因此,布美他尼还有望作为一种新生儿癫痫发作前瞻性用药。然而，到目前为止，未有布美他尼关于促进缺血性脑卒中后恢复期神经轴突再生的相关报道。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的问题，本专利技术提供布美他尼在缺血性脑卒中后恢复期促进神经功能重建中的应用，具体为布美他尼在缺血性脑卒中后恢复期神经功能重建药物中的应用。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为布美他尼在缺血性脑卒中后恢复期保护性药物中的应用。本专利技术的显著效果。本专利技术是本课题组多年来对脑卒中各阶段的病症特点进行深入研究的科研成果；在脑卒中病机研究过程中，发现在脑卒中急性期（前2周）细胞发生功能性紊乱，导致选择性神经元死亡、炎性反应、血脑屏障损伤；然而恢复期（2周-6个月）机体表现出一定的神经可塑性，如神经营养因子的释放、神经发生及神经干细胞的迁移、神经环路的重塑等，尤以中风发生后2-3周最为明显。在这一时期脑卒中潜在自我修复能力达到峰值，在脑卒中神经功能恢复的关键期药物治疗常具有较好的潜在治疗作用，因此针对两个时期患者的神经病理表现不同，药物治疗的机制也不同。已有研究表明，在脑卒中急性期布美他尼可通过消除水肿，减轻神经细胞，星型胶质细胞和少突胶质细胞损伤，发挥神经保护作用。恢复期针对急性期所不具有的神经可塑性特点，进一步探索布美他尼是否依然能够起到神经保护性药物治疗效果；既往实验研究发现，布美他尼能够促进缺血性脑卒中恢复期侧脑室下区的神经再生，目前我们的研究发现布美他尼可以一定程度上可以重塑被破坏的脑神经环路，产生相应的神经功能重建，因此通过使用布美他尼促进神经环路的重塑将成为脑卒中恢复期的潜在治疗方法。且布美他尼这一作用是通过下调缺血皮层周边的NogoA表达水平、上调缺血皮层周边的BDNF蛋白表达水平实现的。本专利技术适用于脑卒中后慢性阶段，效果明显；而且布美他尼在临床使用多年，安全性高。因而，本专利技术为脑卒中后神经功能重建提供了一个新途径和手段。附图说明图1脑缺血后33天，免疫荧光显示皮质脊髓束(CST)芽生纤维支配对侧失神经支配的脊髓灰质情况。图2各实验组大鼠皮质脊髓束(CST)芽生纤维支配对侧失神经支配的脊髓灰质情况。图3脑缺血后33天，免疫荧光显示大鼠脊髓灰质PSD-95和vGlut1的表达情况。图4各实验组大鼠脊髓灰质PSD-95和vGlut1的表达情况。图5免疫荧光显示BDA与psd95，vGlut1在失神经支配的脊髓灰质共表达。图6脑缺血后30-32天大鼠行为学测试。图7脑梗死后33天后，免疫荧光显示大鼠脑梗死周边皮层NogoA的表达情况。图8各实验组大鼠脑梗死周边皮层NogoA的表达情况。图9脑梗死33天后，westernblot显示梗死周边皮层BDNF蛋白的表达情况。图10各实验组大鼠脑梗死周边皮层BDNF蛋白的表达情况。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例1。研究表明内皮素（endothelin-1，ET-1）能够用于缺血性脑卒中神经保护药物的筛选，因此，本专利技术选用了ET-1注射大鼠模型。1.动物模型的建立：将44只大鼠随机分配至缺血组（ISC组，n=12），假手术组（SHAM组，n=10），假手术+布美他尼组（SHAM+BUM组，n=10）,缺血+布美他尼组（ISC+BUM组，n=12）；大鼠吸入麻醉后，将ET-1（无菌盐水稀释成0.5ug/ul）,根据大鼠脑解剖图谱用微量注射器注射进入皮层和纹状体各三个位点（①AP+2.3mm，ML+2.5mm，DV-2.3mm；②AP+0.7mm，ML+2.2mm，DV-2.0mm；③AP+0.7mm，ML+3.8mm，DV-5.8mm），每点注药2μl，总量6μl；注射ET-1后约2h（大鼠麻醉已清醒），若提尾倒悬时大鼠出现右上肢向胸前屈曲，或大鼠行走时向右侧倾倒或者向右侧转圈，且症状持续超过24小时，则可判定为缺血模型制作成功，假手术组则在以上三个位点分别注射生理盐水。一、布美他尼对缺血性脑卒中后神经轴突再生有促进作用。布美他尼以浓度为0.2mg/kg/天，连续三天注射缺血大鼠模型；在14天时根据大鼠脑解剖图谱颅内定位注射10%BDA于四个位点（①AP+1.0mm,ML–2.0mm,DV12.0mm,DV21.5mm；②AP0mm，ML–1.5mm，DV12.0mm,DV21.5mm；③AP–1.0mm，ML–1.4mm，DV12.0mm,DV21.5mm；④AP+2.0mm，ML–1.4mm，DV12.0mm,DV21.5mm），每点注药2μl，总量8μl；在35天处死大鼠后，经大鼠左心尖快速灌注生理盐水200ml及4%多聚甲醛150-200ml固定,取大鼠颈膨大(颈6-颈8)部分脊髓进行冰冻切片的免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜照相，见图1；然后用ImageJ软件对越过脊髓中线的皮质脊髓束轴突芽生侧枝进行追踪测量,并对其总长度进行统计分析，对各实验组发芽并越过大鼠脊髓中线的CST轴突侧枝总长度的统计分析，结果见图2（缺血组#P<本文档来自技高网...
【技术保护点】
布美他尼在缺血性脑卒中后恢复期促进神经功能重建中的应用。
【技术特征摘要】
1.布美他尼在缺血性脑卒中后恢复期促进神经功能重建中的应用。2.如权利要求1所述的布美他尼在缺血性脑卒中后恢复期促进神经功能重建，其特征在于，所述的布美他尼用于制备缺血性脑卒中...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵传胜，程希，穆晓鹏，王慧彬，于航，赵岚青，段思宁，刘婷婷，孙叶飞，
申请(专利权)人：中国医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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