一种用于缺血性脑卒中诊断的lncRNA制造技术

本发明专利技术公开了一种用于缺血性脑卒中诊断的lncRNA，该lncRNA为LOC105376505。本发明专利技术首次发现LOC105376505基因与缺血性脑卒中的发生发展相关，在缺血性脑卒中患者中表达下调，进一步丰富了缺血性脑卒中发病机制的研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，涉及一种用于缺血性脑卒中诊断的lncRNA，具体地该lncRNA为LOC105376505。
技术介绍
脑血管病与心血管病及肿瘤一起是严重危害人类健康的三大疾病之一，其具有高发病率、高致残率与高死亡率的特点，同时也与心血管病及肿瘤一起是人类三大死亡原因之一。脑血管病主要是由于脑组织血液循环障碍而导致局部神经功能缺失的神经系统疾病，可分为急性脑血管病及慢性脑血管病。急性脑血管疾病又常被称为脑卒中，在美国，每年约80万人患有脑卒中类疾病，且发病率随着年龄的增加而增加，这给其不断老年化的社会带来严重的问题。在中国，脑血管病发病率逐年上升，已占据人口致死和致残原因的第一位。而随着经济水平的快速发展，我国人口老龄化问题的不断加重，以及不健康的生活方式等众多因素，使得缺血性脑血管病发病率逐年增长。脑卒中又可分为缺血性脑卒中(ischemicStroke,IS)和出血性脑卒中(HemorrhagicStroke)。缺血性脑卒中占全部脑卒中发病率的80％左右，并且其发病率随年龄的增长而增高。缺血性脑卒中的发生主要是由于脑栓塞及局部血栓的形成，这可能是由动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)引起的血管狭窄、血栓栓塞，或者是来源于心脏的栓子随血流至脑部引起脑栓塞；而各种原因造成的血管损伤、血管炎症也是重要原因之一。诸多原因引起脑部血液供应障碍，而造成受损脑组织的不可逆性损害，使得脑组织缺血、缺氧导致最终坏死，给患者造成一系列的神经功能缺损和障碍。缺血性脑卒中是遗传因素和环境因素共同作用的多因子复杂疾病，除了环境因素的影响以外，遗传因素在脑卒中的发病过程中起着十分重要的作用，现有许多分子遗传学研究也表明了脑卒中的发生具有很高的遗传易感性。遗传因素可能是通过对传统因素的诱发，或者做为独立风险因素，最终影响到组织器官。目前缺血性脑卒中的诊断多依赖于脑CT扫描、脑MRI检查、DSA、MRA、经颅多普勒超声检查等，如何对更早的缺血性脑卒中进行诊断及预防，是目前研究的重要课题。最近人们发现，在人类基因组中除了有microRNA这一具有强大调控和表观遗传修饰功能的微小非编码RNA的存在，还存在着数以万计的另一种非编码RNA即长链非编码RNA(longnon-codingRNA，lncRNA)长链非编码是一类转录本长度超过200nt的RNA分子，它们不具有编码蛋白的功能。lncRNA起初被认为是RNA聚合酶II转录的副产物，是基因组转录的“噪音、垃圾”，不具有生物学功能。然而，最近的研究表明，它们可以通过DNA甲基化、组蛋白修饰、转录后调控、RNA干扰、印迹基因等多种不同的机制、在多种层面上影响基因的表达水平。因此，lncRNA可能成为缺血性脑卒中研究的新方向。现有技术中已经报道microRNA在缺血性脑卒中发生发展以及耐药中具有重要作用，但是同样作为非编码产物的lncRNA，其生物学功能以及其在缺血性脑卒中发生发展过程中的作用却不清楚，需要进一步的研究。目前，在患病组织中发现的异常表达的lncRNA可涉及全身各个系统，分布较为广泛，但是由于lncRNA数量庞大，目前针对lncRNA在脑卒中领域中的研究仍处在起步阶段，因此探寻LncRNA缺血性脑卒中的分子基础具有重要意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一，提供一种检测长链非编码RNALOC105376505的产品，为实现缺血性脑卒中的早期诊断提供基础。本专利技术的目的之二，提供一种缺血性脑卒中的诊断方法，通过检测lncRNALOC105376505的表达水平来诊断患者是否患有缺血性脑卒中。本专利技术的目的之三，提供一种分子标志物，作为疾病检测的指标应用于临床。本专利技术的目的之四，提供一种与缺血性脑卒中的发生发展密切相关的基因，为缺血性脑卒中的科学研究提供了理论依据。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了长链非编码RNALOC105376505在制备诊断缺血性脑卒中的产品中的应用。其中，LOC105376505指基因或从该基因转录的mRNA，在人类中，位于11号染色体短臂第1区第5带第5亚带上。进一步，所述LOC105376505的序列如SEQIDNO.1所示。进一步，所述LOC105376505在缺血性脑卒中患者中表达下调。进一步，所述产品包括：通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术或免疫测定的方法检测LOC105376505基因的表达水平。进一步，所述核酸扩增技术选自聚合酶链式反应(PCR)、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、转录介导的扩增(TMA)、连接酶链式反应(LCR)、链置换扩增(SDA)和基于核酸序列的扩增(NASBA)。其中，PCR需要在扩增前将RNA逆转录成DNA(RT-PCR)，TMA和NASBA直接扩增RNA。通常，PCR使用变性、引物对与相反链的退火以及引物延伸的多个循环，以指数方式增加靶核酸序列的拷贝数；RT-PCR则将逆转录酶(RT)用于从mRNA制备互补的DNA(cDNA)，然后将cDNA通过PCR扩增以产生DNA的多个拷贝；TMA在基本上恒定的温度、离子强度和pH的条件下自身催化地合成靶核酸序列的多个拷贝，其中靶序列的多个RNA拷贝自身催化地生成另外的拷贝，TMA任选地包括使用阻断，部分、终止部分和其他修饰部分，以改善TMA过程的灵敏度和准确度；LCR使用与靶核酸的相邻区域杂交的两组互补DNA寡核苷酸。DNA寡核苷酸在热变性、杂交和连接的重复多个循环中通过DNA连接酶共价连接，以产生可检测的双链连接寡核苷酸产物；SDA使用以下步骤的多个循环：引物序列对与靶序列的相反链进行退火，在存在dNTPαS下进行引物延伸以产生双链半硫代磷酸化的(hemiphosphorothioated)引物延伸产物，半修饰的限制性内切酶识别位点进行的核酸内切酶介导的切刻，以及从切口3'端进行的聚合酶介导引的物延伸以置换现有链并产生供下一轮引物退火、切刻和链置换的链，从而引起产物的几何扩增。本专利技术提供了一种体外检测样本中上述lncRNALOC105376505表达水平的产品，所述产品包括制剂、芯片、或试剂盒。所述“样本”包括细胞、组织、脏器、脑脊液、体液(血液、淋巴液等)、消化液、咳痰、肺胞支气管清洗液、尿、粪便等。优选的，所述样本为组织、血液。在本专利技术的具体实施方式中，所选样本为血液。进一步，所述制剂、芯片或试剂盒包括针对LOC105376505的特异性引物对或探针。进一步，所述特异性引物对的序列如SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示。进一步，所述特异性引物对对用于SYBRGreen、Taqman探针、分子信标、双杂交探针、复合探针的检测。本专利技术提供了一种上面所述的产品在制备诊断缺血性脑卒中的工具中的应用。本专利技术中“探针”指能与另一分子的特定序列或亚序列或其它部分结合的分子。除非另有指出，术语“探针”通常指能通过互补碱基配对与另一多核苷酸(往往称为“靶多核苷酸”)结合的多核苷酸探针。根据杂交条件的严谨性，探针能和与该探针缺乏完全序列互补性的靶多核苷酸结合。探针可作直接或间接的标记，其范围包括引物。杂交方式，包括，但不限于：溶液相、固相、混合相或原位杂交测定法。所述探针具有与靶点基因的特定的碱本文档来自技高网...

【技术保护点】
长链非编码RNA LOC105376505在制备诊断缺血性脑卒中的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.长链非编码RNALOC105376505在制备诊断缺血性脑卒中的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述LOC105376505的序列如SEQIDNO.1所示。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述LOC105376505在缺血性脑卒中患者中表达下调。4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术或免疫测定的方法检测LOC105376505基因的表达水平。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述核酸扩增技术选自聚合酶链式反应、逆转录聚合酶链式反应、转录介导的扩增、连接酶链式反应、链置换扩增和基于核酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：何文贞，陈少杏，陈思洽，蔡德，
申请(专利权)人：汕头大学医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：广东;44