本发明专利技术公开了一种缺血性脑卒中诊断标记物，该标记物是miRNA-4511。miRNA-4511在缺血性脑卒中患者中高表达，通过检测miRNA-4511的表达水平可用于诊断患者是否患有缺血性脑卒中或者患缺血性脑卒中的风险。在此基础上，miRNA-4511可以用于制备诊断缺血性脑卒中的产品。缺血性脑卒中诊断标记物的发现可以提高该疾病诊断的特异性、敏感性，实现疾病的早期诊断。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种缺血性脑卒中诊断标记物，具体的涉及一种 缺血性脑卒中miRNA标记物。
技术介绍
缺血性脑卒中是指突然发生的脑局部血液循环障碍导致脑组织缺血缺氧引起的 局灶性神经功能缺损综合征。缺血性脑卒中是世界范围内三大死亡疾病之一，也是成年人 首位致残原因。由于目前缺血性脑卒中的发病机制尚未完全阐明，且临床上理想的治疗手 段有限，使得不仅发病率高，致死率、致残率及复发率也较高，给个人和社会造成了巨大的 负担。 缺血性脑卒中是一种遗传和环境因素共同作用的复杂性疾病，随着人类基因组计 划的完成和分子遗传学的发展，miRNA的研究受到广泛重视，寻找疾病的miRNA标记物成为 当前研究的热点。近年来，越来越多研究认为，miRNA在缺血性脑卒中的发生发展过程中起 着重要的调节作用，因此miRNA与缺血性脑卒中发病风险的关系也备受关注。 microRNAs(miRNAs)是一类含量丰富的非蛋白编码小分子RNA，miRNAs主要是与 靶mRNA的3'-UTR区域结合，能够抑制mRNA的翻译或直接使mRNA降解，调节多种生物功 能。据估计，生物体内约有1/3的基因受miRNA的调控。 检测miRNA的表达水平可以为缺血性脑卒中的临床诊断提供参考，虽然已有报道 证明miRNA可以通过调控靶基因mRNA的表达，在缺血性脑卒中中起重要作用，但是其还没 有应用到临床上。由于缺血性脑卒中的高致死率、高致残率，使得实现缺血性脑卒中的早期 诊断尤为重要。但是，目前尚无快速简便的实验室血液检测方法用于缺血性脑卒中的筛查 和早期检测。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可用于诊断缺血性脑卒中 的miRNA标记物。相比传统的缺血性脑卒中的诊断方法，使用miRNA标记物来诊断缺血性 脑卒中具有及时性、灵敏性，从而使患者在疾病早期就能知晓疾病风险，从而采取相应的预 防和治疗措施。 为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案： 本专利技术提供了miRNA-4511在制备诊断缺血性脑卒中的产品中的应用，所述 miRNA-4511 选自以下组中的至少一种：miRNA-4511 初始miRNA、miRNA-4511 前体miRNA、 成熟miRNA-4511 ;所述miRNA-4511初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟 miRNA-4511 ;所述miRNA-4511前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA-4511。 进一步，所述miRNA-4511是成熟miRNA-4511，核苷酸序列如序列表中的SEQID NO. 1所示。 进一步，诊断缺血性脑卒中的产品包括芯片或试剂盒；其中，所述芯片包括固相载 体以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于所 述miRNA-4511的部分或全部序列；所述试剂盒包括用于检测所述miRNA-4511的表达水平 的试剂。 进一步，所述的试剂包括针对所述miRNA-4511的引物和/或探针。 本专利技术提供了一种诊断缺血性脑卒中的产品，所述产品能够通过检测miRNA-4511 的表达水平来诊断缺血性脑卒中。 进一步，上面所述的产品包括芯片或试剂盒。其中，所述芯片包括固相载体；以及 固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于上面所述 的miRNA-4511的部分或全部序列；所述试剂盒包括用于检测上面所述的miRNA-4511的表 达水平的试剂。 进一步，上面所述的寡核苷酸探针还可包括针对现有技术中已经报道的可用于诊 断缺血性脑卒中的miRNA的寡核苷酸探针。将多种miRNA的检测探针放置在同一芯片上通 过检测多种miRNA指标联合诊断缺血性脑卒中的情况也包含在本专利技术的保护范围之内。 进一步，所述固相载体包括所述固相载体可采用基因芯片领域的各种常用材料， 例如但不限于尼龙膜，经活性基团（如醛基、氨基等）修饰的玻片或硅片、未修饰的玻片、塑 料片等。 所述的miRNA芯片的制备可采用本领域已知的生物芯片的常规制造方法，例如， 如果固相载体采用的是修饰玻片或硅片，探针的5'端含有氨基修饰的聚dT串，可将寡 核苷酸探针配制成溶液，然后采用点样仪将其点在修饰玻片或硅片上，排列成预定的序 列或阵列，然后通过放置过夜来固定，就可得到本专利技术的miRNA芯片。如果核酸不含氨 基修饰，则其制备方法也可参照：王申五主编的《基因诊断技术-非放射性操作手册》； J.L.erisi,V.R.Iyer,P. 0.BROWN.Exploringthemetabolicandgeneticcontrolof geneexpressiononagenomicscale.Science，1997 ;278 :680和马立人，蒋中华主编·生 物芯片.北京：化学工业出版社，2000,1-130。 进一步，所述试剂盒包括SYBRGreen聚合酶链式反应体系、用于扩增miRNA-4511 和内参的引物对；所述SYBRGreen聚合酶链式反应体系包含：PCR缓冲液、dNTPs、SYBR Green荧光染料。 进一步，所述扩增miRNA-4511的引物对序列如下：正向引物序列为 5' -GAAGAACTGTTGCATTTGCCCT-3'，反向引物序列为 5' -GTGCAGGGTCCGAGGT-3' ；所述内参为 U6snRNA，扩增内参的引物对序列如下：正向引物序列为5' -CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，反向 引物序列为 5' -AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。 进一步，所述试剂盒还包括M-MLV逆转录体系、用于反转录miRNA-4511和内参的 反转录引物，所述M-MLV逆转录体系包括逆转录反应液、M-MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、 dNTPs〇 进一步，所述的miRNA-4511 反转录引物序列为：5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGG TATTCGCACTGGATACGACAGGGCA- 3';所述的内参为U6snRNA，所述U6snRNA内参的反转录引物为：5'-AAAATATGGAAC GCTTCACGAATTTG-3'。 进一步，可以将多种miRNA的检测引物和/或探针放置在同一试剂盒中通过检测 多种miRNA指标联合诊断缺血性脑卒中的情况也包含在本专利技术的保护范围之内。 应当知道，本专利技术的miRNA-4511包括组成型核酸分子的功能等同物，即变体，其 显示完整miRNA-4511核酸分子相同的功能，它们可能通过核苷酸残基的缺失、置换或者插 入而突变。 本领域人员熟知，为了保证miRNA的稳定性，可以在miRNA的一端或者两端增加保 护性碱基，如TT，也可对miRNA碱基进行修饰，但是不影响miRNA的功能。因此，本领域技术 人员熟知，在不影响miRNA-4511功能的条件下，对miRNA-4511进行碱基修饰或者在两端增 加碱基获得的序列同样包含在本专利技术的保护范围之内。 在本专利技术的一些具体的实施方式中，所述miRNA-4511是成熟miRNA-4511。 虽然在某些【具体实施方式】中所使用的是成熟miRNA-4511，但是本领域技术人员可 以预期，初始miR本文档来自技高网...
【技术保护点】
miRNA‑4511在制备诊断缺血性脑卒中的产品中的应用，其特征在于，所述miRNA‑4511选自以下组中的至少一种：miRNA‑4511初始miRNA、miRNA‑4511前体miRNA、成熟miRNA‑4511；所述miRNA‑4511初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA‑4511；所述miRNA‑4511前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA‑4511。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，边洋，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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