缺血性脑卒中的lncRNA标志物制造技术

本发明专利技术公开了缺血性脑卒中的lncRNA标志物，所述lncRNA标志物为LINC00189和LOC105376014，其中LINC00189在缺血性脑卒中患者中表达上调，LOC105376014在缺血性脑卒中患者中表达下调。本发明专利技术所提供的lncRNA标志物，可以用于缺血性脑卒中的早期诊断，具有较高的灵敏度和特异性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，涉及缺血性脑卒中的lncRNA标志物。
技术介绍
脑卒中作为全球的重大公共卫生问题，是一种突然起病的脑血液循环障碍性疾病，也是危害人类健康的主要疾病之一。脑卒中已成为世界范围内的第二大致死原因和致残的首要原因。卒中所导致死亡的人群中，超过三分之二集中于发展中国家。有资料显示，我国约2.3亿人患心血管病，脑卒中患者超过700万。一项包含169,871位40岁及以上的成年人的前瞻性队列研宄结果显示，脑卒中位居男性的第3位死因和女性的第2位死因，男性脑卒中死亡率为310.5/100,000人年，占总死亡的21.6％，女性卒中死亡率为242.3/100,000人年，占总死亡的20.8％。脑卒中的高发病率、高复发率、高致残率和高致死率，给患者家庭和社会造成了沉重的负担。有资料显示，我国每年用于治疗脑卒中的费用高达数百亿元人民币，脑卒中已经成为我国重要的疾病负担和重大的公共卫生问题。缺血性脑卒中又称为脑梗死，它是由各种原因所致的局部脑组织区域血液供应障碍，导致脑组织缺血缺氧性病变坏死，进而产生临床上对应的神经功能缺失表现。缺血性卒中是卒中的主要类型，约占卒中总发病的60％～80％。目前已经公认，脑卒中是一种受环境因素、遗传因素等共同作用的复杂疾病，了解脑卒中的发病机制与遗传因素的关系对脑卒中的早期诊断和预防具有重要的意义。随着微阵列技术和核酸测序技术的飞速发展，科学家发现人类基因组中仅有2％的序列编码产生蛋白质，蛋白编码基因数目不足3万个，而其余的近98％的基因组序列却转录产生了大量且种类繁多的非编码RNA，这些ncRNA是机体内错综复杂的调控网络的重要组成部分。长链非编码RNA(longnoncodingRNA,lncRNA)是一类能在多种生物学过程中发挥调控作用的大分子ncRNA。其分布广泛，长度一般多于200个碱基，由于缺少有效开放阅读框(ORF)而无或很少有编码蛋白的能力。作为分子生物学中的一个全新领域，lncRNA是以RNA的形式在多个层面上发挥调控基因表达的作用，主要是在表观遗传调控、转录调控以及转录后调控三个层面进行调控。作为哺乳动物转录组的重要组成部分，lncRNA的功能目前还有待深入研究。最初lncRNA被认为是RNA聚合酶II转录的副产物，是基因组转录的“噪音”、“暗物质”，不具有生物功能。但近年来的研究结果显示，lncRNA在细胞正常生理活性中的重要作用以及参与到多种肿瘤和其他疾病的发生发展。lncRNA不仅参与到核内运输、转录调控、蛋白降解、基因组印记及X染色体沉默等细胞生理活动中，还与乳腺癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、淋巴性白血病等疾病的发病机制有关。lncRNA可通过基因印记、染色质重构、剪切调控、mRNA降解和翻译调控等机制来实施其功能。虽然lncRNA相关研究近年来取得了进展，但其功能及作用机制仍有待进一步探索。研究lncRNA主要方法和工具包括芯片、RNA测序、实时定量PCR、Northernblotting、原位杂交、RNAi、RIP和生物信息学预测等。研究技术的开发和利用对于生物学机制的研究是非常关键的。lncRNA广泛存在于多种组织中，其表达具有组织特异性和时空特异性。同时，lncRNA在肿瘤和其他疾病中也具有特异性的表达模式。目前针对lncRNA在脑疾病领域中的研究仍处在起步阶段，探寻lncRNA在缺血性脑卒中中的作用具有重要意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一，提供一种早期缺血性脑卒中的诊断产品，使患者在早期就得以预防，进而提高生存率和生活质量。本专利技术的目的之二，提供一种缺血性脑卒中的诊断方法，通过检测lncRNA的表达水平来诊断患者是否患有缺血性脑卒中。本专利技术的目的之三，提供一种分子标志物，作为临床应用的检测指标。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了一种缺血性脑卒中诊断用lncRNA标志物，所述lncRNA包括LINC00189。本专利技术中，LINC00189指基因或从该基因转录的mRNA，在人类中，位于21号染色体长臂2区1带3亚带。该基因具有三个注释转录本(或剪接变体)：长989bp的LINC00189-001(Ensembl中的转录本ID为ENST00000420364.1)、长783bp的LINC00189-003(Ensembl中的转录本ID为ENST00000447125.5)和长308bp的LINC00189-002(Ensembl中的转录本ID为ENST00000431661.1)。在具体的实施方案中，LINC00189基因产物指长转录物。进一步，所述LINC00189的序列如SEQIDNO.1所示。进一步，所述lncRNA标志物还包括LOC105376014，该lncRNA位于9号染色体短臂2区1带上，包括两个转录本，长度为1335bp的XR_929550.2.1和长度为938bp的XR_001746646.1.1。在本专利技术的具体实施方式中，LOC105376014指长转录物，序列如SEQIDNO.2所示。本专利技术提供了上述的lncRNA生物标志物在制备或筛选缺血性脑卒中诊断产品中的应用。进一步，所述产品包括：通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术或免疫测定的方法检测上面所述的lncRNA的表达水平。在本专利技术中，LINC00189在缺血性脑卒中患者中表达上调，LOC105376014在缺血性脑卒中患者中表达下调。进一步，所述核酸扩增技术选自聚合酶链式反应、逆转录聚合酶链式反应、转录介导的扩增、连接酶链式反应、链置换扩增和基于核酸序列的扩增。本专利技术提供了一种产品，所述产品包括芯片、制剂或试剂盒，其能够测定样本中如上所述的lncRNA的表达水平。进一步，所述芯片包括：固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针特异性地对应于上面所述的lncRNA的部分或全部序列。其中，固相载体包括(但不限于)玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜或聚苯乙烯膜。进一步，所述试剂盒包括检测上述的lncRNA的特异性的探针、基因芯片，或PCR引物。进一步，检测LINC00189特异性的PCR引物序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示；检测LOC105376014特异性的PCR引物序列如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示。进一步，所述述试剂盒还可包括dNTP、随机引物、还原剂、RNase抑制剂、反转录酶、MgCl2和PCR缓冲液等中的一种或多种的组合，此外，所述试剂盒还可以含有标准品和/或对照品；在本专利技术的一个优选例中，选用了GAPDH作为内参。进一步，上述试剂盒优选的还包含其它一些辅助试剂，所述的辅助试剂是定量PCR扩增试剂盒中常规使用的一些试剂，这些试剂的特性以及它们的配制方法均是本领域技术人员所熟知的；所述的试剂例如(但不限于)：阴性对照品、阳性对照品；还可以包括荧光定量PCR反应板、PCR反应板封口膜等。本专利技术提供了上述产品在制备诊断缺血性脑卒中的工具中的应用。本专利技术提供了一种诊断缺血性脑卒中的产品，所述产品能够通过检测样本中LINC00189的表达水平来诊断缺血性脑卒中。所述“样本”包括细胞、组织、脏器、、脑脊液、体液(血液、淋巴液等)、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种缺血性脑卒中诊断用lncRNA标志物，其特征在于，所述lncRNA包括LINC00189。

【技术特征摘要】
1.一种缺血性脑卒中诊断用lncRNA标志物，其特征在于，所述lncRNA包括LINC00189。2.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述LINC00189的序列如SEQIDNO.1所示。3.根据权利要求1所述的缺血性脑卒中诊断用lncRNA标志物，其特征在于，所述lncRNA还包括LOC105376014。4.权利要求1-3任一项所述的lncRNA生物标志物在制备或筛选缺血性脑卒中诊断产品中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术或免疫测定的方法检测权利要求1-3任一项所述lncRNA的表达水平。6.一种产品，所述产品包括芯片、制剂或试剂盒，其特征在于，所述产品能够测定样本中如权利要求1-3任...

【专利技术属性】
技术研发人员：何文贞，魏敦灿，汤丹灵，蔡德，
申请(专利权)人：汕头大学医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：广东;44