一种靶向制造技术

本发明专利技术公开了一种靶向

【技术实现步骤摘要】
ID NO
：3所示的
FR1、SEQ ID NO
：5所示的
FR2、SEQ ID NO
：7所示的
FR3、SEQ ID NO
：9所示的
FR4。
[0010]进一步的，所述纳米抗体为靶向
CD146
胞外段的纳米抗体，氨基酸序列如
SEQ ID NO
：1所示，将其命名为
112
‑
2。
[0011]本专利技术还提供了上述编码基因，如
SEQ ID NO
：2所示
。
[0012]本专利技术还提供了上述编码基因的表达盒
。
[0013]本专利技术还提供了上述编码基因的表达载体
。
[0014]本专利技术还提供了上述编码基因的宿主细胞
。
[0015]本专利技术还提供了含有上述纳米抗体的抗体偶联物
。
[0016]具体的，该抗体偶联物含有：
(a)CD146
纳米抗体
112
‑2的
VHH
链
、CD146
纳米抗体
112
‑2；和
(b)
选自下组的偶联部分：药物
、
放射性核素
、
可检测标记物
、
细胞因子
、
毒素
、
或酶等
。
[0017]本专利技术还提供了上述纳米抗体
、
编码基因
、
>表达盒
、
表达载体
、
宿主细胞
、
抗体偶联物的应用，用于制备检测或治疗癌症的药物
。
[0018]本专利技术还公开了
CD146
纳米抗体
112
‑2在
CD146
阳性肿瘤细胞中的治疗应用潜能
(
例如
CD146
高表达的乳腺癌细胞
)。
本专利技术所提供的纳米抗体
112
‑2对
CD146
受体有较高的亲和力和较好的特异性
。
同时，本专利技术还公开了纳米抗体
112
‑2特异性降解
CD146
受体蛋白的作用，这种特异性降解
CD146
的作用是目前已有
CD146
抗体所不具备的，具有较强的应用前景
。
[0019]进一步的，上述癌症包括乳腺癌在内的所有癌症
。
[0020]本专利技术公开了纳米抗体在乳腺癌细胞中的治疗应用，乳腺癌细胞指的是三阴性乳腺癌细胞系
(
例如
MDA
‑
MB
‑
231)
，尤其是
CD146
高表达的三阴性乳腺癌细胞系
。
[0021]本专利技术还提供了上述纳米抗体
、
编码基因
、
表达盒
、
表达载体
、
宿主细胞
、
抗体偶联物的应用，用于降解
CD146
蛋白
。
[0022]本专利技术公开了纳米抗体
112
‑2对
CD146
蛋白的降解作用，这种降解作用是目前已有
CD146
抗体所不具备的，具有较强的应用前景
。
同时，纳米抗体
112
‑2的靶向降解
CD146
功能，还具有较广泛的非临床治疗应用
。
利用其可特异性降解
CD146
的特性，可在干扰细胞正常
CD146
蛋白的表达情况，发挥类似于小分子抑制剂的作用，为探索
CD146
的功能研究提供一种基因敲除以外的稳定干扰
CD146
表达的新手段
。
[0023]本专利技术还提供了上述抗体偶联物的另一种应用，用于靶向
CD146
蛋白，并发挥偶联物的作用，如治疗效果或其他作用
。
[0024]通过抗体偶联物
(a)
部分的抗体特异性识别
CD146
蛋白，再将偶联
(b)
部分的药物
、
放射性核素
、
可检测标记物
、
细胞因子
、
毒素
、
或酶等精准地作用于
CD146
蛋白，达到精准作用的目的
。
[0025]实施本专利技术，具有如下有益效果：
[0026]本专利技术以
CD146
蛋白为研究对象，经过长期的实验与深入的研究，发现一个全新的纳米抗体
112
‑
2。
经过纳米抗体
112
‑2处理后的三阴性乳腺癌细胞，其迁移能力明显受抑制
。
作用3‑
6h
后，
CD146
蛋白减少，并产生一个约
80kDa
的蛋白片段，该片段能被识别
CD146
胞内段的检测性抗体所识别，提示
CD146
蛋白发生水解，产生了包含胞内段的约
80kDa
的片段
。
以
上现象随着
112
‑2的作用时间延长而逐渐明显
。
以上结果提示，纳米抗体
112
‑2能够诱导
CD146
蛋白发生水解或者降解，具有潜在的临床应用前景
。
附图说明
[0027]图1为本专利技术质粒片段的区域示意图
。
[0028]图2为本专利技术化学发光法检测结果示意图
。
[0029]图3为本专利技术迁移抑制作用结果示意图
。
[0030]图4为本专利技术降解作用结果示意图
。
[0031]图5为本专利技术偶联其他标签后的纯化示意图
。
[0032]图6为本专利技术中偶联抗体的特异性验证结果示意图
。
[0033]图7为本专利技术中偶联抗体的降解作用结果示意图
。
具体实施方式
[0034]为使本专利技术实施例的目的
、
技术方案和优点更加清楚，下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参考说明文字能够据以实施
。
实施例中使用的各个试剂等均通过常规商业途径购买获得
。
[0035]实施例1：
CD146
纳米抗体
112
‑2的制备和筛选
[0036]1)
选用
200ug CD146
胞外段重组蛋白与等体积的弗氏完全佐剂混合，将混合液注射至羊驼体内，每周1次，持续4周；
[0037]2)4
周的免本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种靶向
CD146
蛋白的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括互补决定区
CDR
，所述互补决定区
CDR
包括氨基酸序列如
SEQ ID NO
：4所示的
CDR1、SEQ ID NO
：6所示的
CDR2、SEQ ID NO
：8所示的
CDR3。2.
如权利要求1所述靶向
CD146
蛋白的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体还包括框架区
FR
，所述框架区
FR
包括氨基酸序列如
SEQ ID NO
：3所示的
FR1、SEQ ID NO
：5所示的
FR2、SEQ ID NO
：7所示的
FR3、SEQ ID NO
：9所示的
FR4。3.
如权利要求1所述靶向
CD146
蛋白的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：1所示
。4.
一种如权利要求3所述靶向
CD146
蛋白的纳米抗体的编码基因，其特征在于，如
...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁元科，林豪雨，曾德，黄锴源，孙何兴，周晓玲，
申请(专利权)人：汕头大学医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：