本发明专利技术公开了ALKBH2基因在缺血性脑卒中诊断中的应用，ALKBH2基因在缺血性脑卒中呈低表达，通过检测ALKBH2基因的表达水平可以判断患者是否患有缺血性脑卒中或者患缺血性脑卒中的概率。本发明专利技术大大提高了缺血性脑卒中诊断的敏感性和特异性，提供了一种早期诊断缺血性脑卒中的手段。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，具体地涉及ALKBH2基因在缺血性脑卒中诊断中的用 途。
技术介绍
缺血性脑卒中是指突然发生的脑局部血液循环障碍导致脑组织缺血缺氧引起的 局灶性神经功能缺损综合征。有四种类型的脑缺血：短暂性脑缺血发作、可逆性神经功能障 碍、进展性卒中、完全性卒中。缺血性脑卒中是世界范围内三大死亡疾病之一，也是成年人 首位致残原因。由于目前缺血性脑卒中的发病机制尚未完全清楚，且临床上用于治疗缺血 性脑卒中的手段有限，使得该病不仅发病率高，致死率、致残率及复发率也较高。 缺血性脑卒中是一种遗传和环境因素共同作用的复杂性疾病，随着人类基因组计 划的完成和分子遗传学的发展，基因的研究受到广泛重视，寻找疾病的基因标记物成为当 前研究的热点。今年来，越来越多研究认为，基因在缺血性脑卒中的发生发展过程中起着重 要的调控作用，因此基因与缺血性脑卒中发病风险的关系也备受关注。 目前临床上用于缺血性脑卒中诊断的方法包括：头颅CT及MRI扫描、脑血管检查 (数字减影血管造影DSA、CT或MR血管成像）、经颅多普勒检查。但是上述方法的使用不能 提供一种特异和敏感的诊断，尽管现在报道了一些与缺血性脑卒中相关的基因，但是并没 有应用到临床上，因此发现一种特异性的缺血性脑卒中标记物应用于临床诊断具有重要的 意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可用于缺血性脑卒中早期 诊断的分子标志物-ALKBH2基因。相比传统的缺血性脑卒中的诊断方法，使用基因标志物 来诊断缺血性脑卒中具有及时性、特异性和灵敏性，使患者在疾病早期就能知晓风险，针对 风险高低，采取相应的预防和治疗措施。 为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了一种ALKBH2基因及其表达产物在制备诊断缺血性脑卒中的产品中 的应用。 进一步，上面所提到的诊断产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位 杂交或芯片检测ALKBH2基因及其表达产物的表达水平以诊断缺血性脑卒中的产品。 进一步，所述用RT-PCR诊断缺血性脑卒中的产品至少包括一对特异扩增ALKBH2 基因的引物；所述用实时定量PCR诊断缺血性脑卒中的产品至少包括一对特异扩增ALKBH2 基因的引物；所述用免疫检测诊断缺血性脑卒中的产品包括：与ALKBH2蛋白特异性结合的 抗体；所述用原位杂交诊断缺血性脑卒中的产品包括：与ALKBH2基因的核酸序列杂交的探 针；所述用芯片诊断缺血性脑卒中的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括 与ALKBH2蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与ALKBH2基因的核酸序列杂交的探针。 进一步，所述诊断产品包括芯片和/或试剂盒；其中所述芯片包括基因芯片、蛋白 质芯片；所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒。所述基因检测试剂盒包 括SYBRGreen聚合酶链式反应体系、用于扩增ALKBH2基因和管家基因的引物对；所述SYBR Green聚合酶链式反应体系包含：PCR缓冲液、dNTPs、SYBRGreen荧光染料。 本专利技术提供了一种诊断缺血性脑卒中的产品，所述的产品能够通过检测ALKBH2 基因的表达水平来诊断缺血性脑卒中。 进一步，上面所述的产品包括芯片、或试剂盒。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白 质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷 酸探针包括用于检测ALKBH2基因转录水平的针对ALKBH2基因的寡核苷酸探针；所述蛋白 质芯片包括固相载体以及固定在固相载体上的ALKBH2蛋白的特异性抗体；所述试剂盒包 括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测ALKBH2基 因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括ALKBH2蛋白的特异性抗体。其中，所述 基因芯片可用于检测包括ALKBH2基因在内的多个基因（例如，与缺血性脑卒中相关的多个 基因）的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括ALKBH2蛋白在内的多个蛋白质（例 如与缺血性脑卒中相关的多个蛋白质）的表达水平。通过将多个与缺血性脑卒中的标志物 同时检测，可大大提高缺血性脑卒中诊断的准确率。 进一步，上面所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯 片方法检测ALKBH2基因表达水平过程中所需的试剂。优选地，所述试剂包括针对ALKBH2 基因的引物和/或探针。 进一步，所述基因检测试剂盒包含SYBRGreen聚合酶链式反应体系、用于扩增 ALKBH2基因和管家基因的引物对；所述SYBRGreen聚合酶链式反应体系包含：PCR缓冲液、 dNTPs、SYBRGreen荧光染料。所述扩增ALKBH2基因的引物对序列如下：正向引物序列为 5' -TGGACAGACCTTCAACTT-3' ；反向引物序列为 5' -TTCATCATCTCGGTGCTC-3' ；所述管家基因 为GAPDH，扩增GAPDH的引物序列对如下：正向引物序列为5' -CTCTGGTAAAGTGGATATTGT-3' ； 反向引物序列为 5' -GGTGGAATCATATTGGAACA-3'。 进一步，所述基因检测试剂盒还包含M-MLV逆转录体系，所述逆转录体系包括T重 复寡核苷酸OligodT、逆转录反应液、M-MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、dNTPs。所述基因检 测试剂盒可用于检测包括ALKBH2基因在内的多个基因（例如，与缺血性脑卒中相关的多个 基因）的表达水平。 本专利技术中与ALKBH2基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、 PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特 异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同 样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同 的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基 对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所 述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。 本专利技术中所述ALKBH2蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述 ALKBH2蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰，例如，嵌合抗体、 80?￥、？813、？(313'）2、？￥等。只要所述片段能够保留与4〇^!12蛋白的结合能力即可。用于 检测蛋白质水平的抗体的制备是本领域技术人员公知的，并且本专利技术可以使用任何方法来 制备所述抗体，如所述的片段可以通过化学法从头合成或利用重组DNA技术合成。 在本专利技术的上下文中，"ALKBH2基因"包括人ALKBH2基因以及人ALKBH2基因的任 何功能等同物的多核苷酸。ALKBH2基因包括与目前国际公共核酸序列数据库GeneBank中 ALKBH2基因（NC_000012. 12)DNA序列具有70%以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA 序列； 优选地，ALKBH2基因的编码序列包括以下任一种DNA分子： (1)序列表中SEQIDNO. 1所示的DNA序列； (2)在本文档来自技高网...
【技术保护点】
ALKBH2基因及其表达产物在制备诊断缺血性脑卒中的产品中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，邵小健，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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