一种用于监测人体卡瑞利珠单抗血药浓度的高灵敏度LC-MS/MS检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于监测人体卡瑞利珠单抗血药浓度的高灵敏度LC‑MS/MS检测方法，其包括如下步骤，使用蛋白纯化磁珠捕获和富集样品中的卡瑞利珠单抗，并以英夫利西单抗作为内标，洗脱磁珠上的卡瑞利珠单抗后再进行变性和酶解，采用液相色谱串联质谱法进行检测，其中液相色谱条件包括：流动相A采用甲酸水溶液，流动相B采用含甲酸的乙腈溶液，使用梯度洗脱，洗脱过程中流动相A与流动相B在85～5：15～95的体积比范围内变化。本发明专利技术所建立的监测方法具有特异性好、灵敏度高、血浆用量少且前处理过程简单等诸多优点，可为临床监测患者注射卡瑞利珠单抗后的血药浓度提供一种可靠方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于血液检测，具体涉及一种用于监测人体卡瑞利珠单抗血药浓度的检测方法。

技术介绍

1、随着生物制剂的迅猛发展，单克隆抗体药物以其低毒高效的优点占据了临床治疗的重要地位，已广泛应用于肿瘤、自身免疫性疾病、感染等疾病的靶向治疗，但值得注意的是单抗药物在体内的药代动力学和药效动力学过程非常复杂，临床疗效、毒副作用个体差异大，因此亟需开展单抗药物的治疗药物监测(therapeutic drug monitoring,tdm)，以保证患者最大程度的获益。

2、卡瑞利珠单抗(camrelizumab，商品名艾瑞卡)是江苏恒瑞医药自主研发的第一个在中国获批的用于晚期肝癌治疗的pd1免疫抑制剂。2023年《柳叶刀》刊发了卡瑞利珠单抗联合阿帕替尼的全球多中心iii期临床研究，表明一线治疗晚期肝癌具有显著的生存获益和可耐受的安全性，中位总生存期达到22.1个月。作为国内自主研发的创新药，卡瑞利珠单抗在多种恶性肿瘤中显示出显著的疗效，随着临床应用日益增多，免疫治疗失败和出现不良反应的情况也逐渐增多，因此开发一种快速、高灵敏度、准确的检测方法来监测血液中卡瑞本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于监测人体卡瑞利珠单抗血药浓度的高灵敏度LC-MS/MS检测方法，其特征在于包括如下步骤，使用蛋白纯化磁珠捕获和富集样品中的卡瑞利珠单抗，并以英夫利西单抗作为内标，洗脱磁珠上卡瑞利珠单抗后再进行变性和酶解，采用液相色谱串联质谱法进行检测，其中液相色谱条件包括：流动相A采用甲酸水溶液，流动相B采用含甲酸的乙腈溶液，使用梯度洗脱，洗脱过程中流动相A与流动相B在85～5：15～95的体积比范围内变化。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述蛋白纯化磁珠为protein G偶联磁珠；所述样品为人血浆或血清。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于先将样品...

【技术特征摘要】

1.一种用于监测人体卡瑞利珠单抗血药浓度的高灵敏度lc-ms/ms检测方法，其特征在于包括如下步骤，使用蛋白纯化磁珠捕获和富集样品中的卡瑞利珠单抗，并以英夫利西单抗作为内标，洗脱磁珠上卡瑞利珠单抗后再进行变性和酶解，采用液相色谱串联质谱法进行检测，其中液相色谱条件包括：流动相a采用甲酸水溶液，流动相b采用含甲酸的乙腈溶液，使用梯度洗脱，洗脱过程中流动相a与流动相b在85～5：15～95的体积比范围内变化。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述蛋白纯化磁珠为protein g偶联磁珠；所述样品为人血浆或血清。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于先将样品和内标工作液加入protein g偶联磁珠中进行孵育，洗去未结合蛋白和干扰物后，洗脱磁珠上的卡瑞利珠单抗，再进行变性和酶解，得到的酶解液进行液相色谱串联质谱法检测。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述内标工作液中英夫利西单抗的浓度为50～150μg/ml，其溶液为pbs缓冲液；使用牛血清白蛋白溶液和pbs缓冲液洗去未结合蛋白和干扰物；使用甲酸溶液洗脱磁珠上的卡瑞利珠单抗；使用nh4hco3溶液在高温下进行蛋白质变性，使用胰蛋白酶进行酶解，使用甲酸溶液中止酶解反应。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于样品的用量为10～30μl，protein g偶联磁珠悬浮液的使用量为10～30μl，内标工作液的使用量为10～30μl；所述牛血清白蛋白溶液的浓度为0.05～0.2％；洗脱用甲酸溶液的浓度为0.1～0.5％；所述nh4hco3溶液的浓度为0.5～1.5mol/l，蛋白质变性温度为90～98℃，变性时间为5～15...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚红，戴锦娜，赵敏，韩晓旭，王星琪，
申请(专利权)人：中国医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：