描述了用于分离和选择称为NCS‑01的有效治疗神经变性的异质骨髓细胞群的方法。例如，显示NCS‑01细胞治疗由缺血引起的神经变性。体内研究证实所选择的NCS‑01细胞群治疗在暂时性或永久性完全动脉阻塞情况下的标准大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)动物模型中的神经变性。这些研究还公开了神经变性由缺血性中风引起时，施用所选择的NCS‑01细胞群与溶栓剂和/或机械性凝块除去方法的组合导致由急性发作神经变性引起的梗塞体积减少。所公开的细胞疗法有望对中风后存活的患者造成显著的临床影响。
【技术实现步骤摘要】
用于治疗神经变性的细胞疗法本申请是申请日为2013年02月06日、申请号为2013800753669、专利技术名称为“用于治疗神经变性的细胞疗法”的专利技术专利申请的分案申请。
本公开描述细胞组合物和用于治疗神经变性的方法。
技术介绍
神经变性是导致神经细胞死亡的病理状态。尽管神经变性的成因可能多种多样而且并不总能确定，但是许多神经病症都具有神经变性作为共同的病理状态。例如，阿尔兹海默症、帕金森症、亨廷顿症和肌萎缩侧索硬化症(ALS)都引起慢性神经变性，其特征在于神经细胞在若干年期间缓慢且逐渐死亡，而急性神经变性的特征在于由缺血(例如，中风)或创伤(例如，创伤性脑损伤)导致的，或者由例如因脊椎受伤或多发性硬化而引起的脱髓鞘或创伤造成的轴索切断(axonaltransection)导致的神经细胞死亡的突然发作。各种各样的由例如酗酒、药物成瘾、暴露于神经毒素和辐射所导致的神经细胞损伤也可引发神经变性。神经变性的迹象甚至在痴呆、癫痫、各种精神病症中都可发现，而且也是正常老化过程的一部份。无论根本原因是什么，越来越多证据表明，一旦引发神经变性，所有这些病症的结局始终相同——神经细胞的最终死亡。中风涉及由通向大脑或大脑内的血管的阻塞(缺血性中风)或破裂(出血)导致的急性神经变性(中枢神经系统神经细胞快速损耗并伴随功能丧失)。由于中风可以引起永久性神经损害、全身并发症和甚至死亡，因此中风通常构成医疗急诊。在美国和欧洲，中风是成人致残的主要原因，也是世界范围内的第二死因。在美国，每十五人中有超过一人死于中风，而且中风在所有死因中排名第三，仅次于心脏病和癌症(美国心脏协会，心脏疾病与中风统计资料–2009年更新版，美国德州达拉斯：美国心脏协会；2009；Rosamond等，心脏疾病与中风统计资料–2007年更新版：来自美国心脏协会统计委员会和中风统计小组委员会的报告，Circulation，2007；115：e69-e171)。每三次中风就有一个致死结果(等，Riskfactorsofstrokeincidenceandmortality，A12-yearfollow-upoftheOsloStudy，Stroke，199324(10；1484-0)。65岁以下的所有死亡中有约6％和65岁以上的所有死亡中有10％是由于中风(Donnan等，Stroke，Lancet，2008；317(9624)：1612-23)。因此统计数据证明了对于许多中风受害者来说，严重致残是不幸但却太过频繁发生的结果。实际上，中风是用于长期成人护理的住院患者医保理赔的第一原因。在美国和其他主要工业国，与中风治疗和康复相关的总成本现已超过每年4500万美元，并且毫无疑问地持续促成医保成本的总体增加。缺血性中风是最常见的中风形式，占所有中风的超过80％。缺血性中风由动脉堵塞引起，而动脉堵塞通常是因为血栓形成或者不太常见地是因为栓塞。发作通常是突发性的，并且通常接着发生局部神经功能缺损。约20％的患者在数天内死亡，特别是如果梗塞很大的话。另外10％的患者在初次中风的数周内死亡。不幸地是，存活者通常严重致残。取决于受影响的脑部面积，症状包括单侧面部或肢体虚弱和感觉障碍以和认知和语言障碍。受影响的脑部面积越大，越多的功能可能受损。一些功能改善可在数天内开始出现，并且常见在数月期间进一步恢复。然而，恢复的程度是不可预期的，并且通常是不完全的。根据美国中风协会，中风存活者中有15％至30％的人永久致残，20％的人在发作后需要三个月的机构护理(Harmsen等，Long-termriskfactorsforstroke:twenty-eightyearsoffollow-upof7457middle-agedmeninSweden，Stroke，2006；37(7)：1663-7)。缺血性中风导致核心病变(corelesion)和周围的半暗带(penumbra)，在核心病变内的神经细胞在数分钟内缺氧而死亡，周围的半暗带接收到一些血流因而接收到一些氧气，但仍少于正常情况。在缺血半暗带中，细胞死亡进行得较为缓慢，一般在数小时内死亡，并且由多变性缺氧症(variableanoxia)和缺血级联反应与所述核心病变内释放的谷氨酸盐产生的毒性物质引起。因此目前的治疗干预主要着重于缓和中风半暗带中的有害情况。然而，用于急性缺血性中风的疗法仍然有限。由于脑损伤的发生是流向脑部的血液减少的结果，目前的疗法致力于通过溶解凝块(血栓溶解)或者通过机械性地除去凝块(血栓切除术)来除去动脉堵塞。血流恢复越快，脑细胞死亡越少，可以避免永久性后遗症的机会越大。目前，只有两种疗法在美国经FDA批准用于中风：●重组组织纤溶酶原活化剂(rt-PA；Genentech)，溶解动脉凝块的药物；和●梅西恢复系统(MerciRetrievalSystem)(ConcentricMedicalInc.)和Penumbra系统(PenumbraInc.)，机械性去除血栓的装置。上述所有治疗方法都具有主要限制。为求有效，使用溶栓剂的疗法必须在症状发作的3到4.5小时内进行，这表示仅有约3％的患有急性缺血性中风的患者接受有效的rt-PA治疗。此外，溶栓疗法具有实质上增加的脑出血风险，这进一步限制了其在一些个体中的使用。基于上述理由，本领域中对于缓和和/或预防神经变性，特别是由缺血引起的神经变性的安全且有效的疗法存在尚未得到满足而又迫切的需求。专利技术简述因此，在一个实施方式中，本专利技术提供一种通过以下方法制备的异质性骨髓(BM)细胞亚群，该方法包括：a)从未处理的骨髓获得骨髓细胞群；b)将骨髓细胞群以低密度接种在塑料表面上；c)洗涤接种的细胞群以除去未附着的细胞；d)在含血清的培养基中将附着的细胞群培养至接近汇合；e)将培养的细胞群连续传代不超过约七次连续传代，其中，在每次传代时，以低密度接种培养的细胞；和f)获得异质性骨髓细胞亚群，其中有效量的异质性骨髓细胞亚群有效治疗神经变性。在一个方面，有效量的异质性骨髓细胞亚群有效治疗由缺血引起的神经变性。在一个方面，异质性骨髓细胞亚群在含血清的培养基中培养。在一个方面，骨髓细胞群以约102-106个细胞/cm2的密度接种。在一个方面，在传代时，培养的细胞以约750个细胞/cm2或更小的密度接种。未处理的骨髓可以从没有使用任何调控细胞分裂的试剂预治疗的受试者获得，所述试剂例如是用于化疗的抗肿瘤药物，包括抗代谢药物，如5-氟尿嘧啶。在一个方面，异质性骨髓细胞亚群不能通过密度分离法如FicollTM或PercollTM梯度或者通过ACK(铵-氯化物-钾)裂解液来分离。在本专利技术的进一步的方面，异质性骨髓细胞亚群进一步在由缺血引起的神经变性的实验模型中测试，其中仅选择显示治疗神经变性的能力的那些细胞群。该由缺血引起的神经变性的实验模型可以是氧/葡萄糖剥夺(OGD)细胞培养模型或中风动物模型。在一个方面，该实验模型可以是氧/葡萄糖剥夺(OGD)细胞培养模型和随后的中风动物模型。在另一个方面，在注射至血流中后，异质性亚群中的细胞迁移至神经变性位置。在一个方面，由缺血引起的神经变性是缺血性中风。在另一个实施方式中，本专利技术还提供一种治疗由缺血引起的神经变性的方法，包括将上述异质性本文档来自技高网...
【技术保护点】
异质性骨髓细胞亚群在制备用于治疗由缺血引起的神经变性的药物中的用途，其中所述异质性骨髓细胞亚群通过包括以下步骤的方法制备：a)从未处理的人骨髓获得骨髓细胞群；b)将所述骨髓细胞群以10
【技术特征摘要】
1.异质性骨髓细胞亚群在制备用于治疗由缺血引起的神经变性的药物中的用途，其中所述异质性骨髓细胞亚群通过包括以下步骤的方法制备：a)从未处理的人骨髓获得骨髓细胞群；b)将所述骨髓细胞群以105个细胞/cm2至106个细胞/cm2的低密度接种在塑料表面上；c)洗涤接种的细胞群以除去未附着的细胞；d)在含血清的培养基中将来自洗涤的细胞群的附着的细胞培养至汇合；e)将培养的细胞在所述含血清的培养基中连续传代不超过七次，其中，在每次传代时，以750个细胞/cm2的低密度接种所述培养的细胞；和f)获得所述异质性骨髓细胞亚群；其中所述药物适于被注射至患有由缺血引起的神经变性的哺乳动物的血流中，并且其中注射所述药物减少所述由缺血引起的神经变性引起的神经功能缺损。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述由缺血引起的神经变性由缺血性中风引起。3.根据权利要求2所述的用途，其中注射所述药物与用于增加通过阻塞血管的血流的附加治疗组合使用，其中注射所述药物与所述附加治疗的组合导致比单独的所述附加治疗或者注射所述药物但不使用所述附加治疗后的神经功能缺损的更大减少。4.根据权利要求3所述的用途，其中所述用于增加通过阻塞血管的血流的附加治疗与注射所述药物同时进行。5.根据权利要求3所述的用途，其中在注射所述药物前，进行所述用于增加通过阻塞血管的血流的附加治疗。6.根据权利要求3所述的用途，其中所述血管被血块阻塞。7.根据权利要求6所述的用途，其中所述血块由动脉粥样硬化斑块破裂产生。8.根据权利要求3所述的用途，其中所述用于增加通过阻塞血管的血流的附加治疗包括施用溶栓剂。9.根据权利要求8所述的用途，其中所述溶栓剂是选自链激酶、尿激酶和重组组织纤溶酶原活化剂中的至少一个。10.根据权利要求9所述的用途，其中所述重组组织纤溶酶原活化剂是阿替普酶、瑞替普酶、去氨普酶或替奈普酶。11.根据权利要求3所述的用途，其中所述用于增加通过阻塞血管的血流的附加治疗包括从所述阻塞血管机械性除去血块。12.根据权利要求3所述的用途，其中所述用于增加通过阻塞血管的血流的附加治疗还包括使用过滤器捕捉所述血块。13.根据权利要求3所述的用途，其中所述用于增加通过...
【专利技术属性】
技术研发人员：托马斯·N·蔡斯，佐佐木经世，古贺三奈子，
申请(专利权)人：NC医学研究公司，
类型：发明
国别省市：日本,JP
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