本申请提供用于包埋的生物样本的预处理的不混溶两相系统，包括向预处理容器中放入在其表面上具有包埋的生物样本的至少一个支撑物，向预处理容器加入至少一种形成层的试剂，向预处理容器加入载体成分，使形成层的试剂形成在载体成分的顶部且含量为使至少一种形成层的试剂接触至少一部分的包埋的生物样本。包埋的生物样本的处理可以包括，在染色组织化学分析或其他工序之前，从包埋的生物样本中去除包埋介质、目标物修复以及酶封闭。系统还包括使预处理方法自动化的装置和程序。
Immiscible two-phase system for pretreatment of embedded biological samples
This application is provided for embedding biological samples pretreatment of immiscible two-phase system, including the pretreatment of container in at least one support has on the surface of the embedded biological samples, to pretreatment container adding at least one layer reagent to the pre process container carrier added components the formation of the reagent layer, is formed on top of carrier component and content for at least a contact reagent layer at least a portion of the embedding of biological samples. Treatment of embedded biological samples can include removal of entrapped media, target remediation, and enzyme sealing from entrapped biological samples prior to staining, histochemical analysis, or other procedures. The system also includes devices and programs that automate the preprocessing methods.
【技术实现步骤摘要】
用于预处理包埋的生物样本的不混溶两相系统
本公开涉及领域为生物样本的处理，具体为包埋的生物样本的预处理，例如在染色、组织化学分析或其他工序之前从包埋的生物样本中去除包埋介质。更具体地说，本专利技术涉及在工序中应用具有浸泡槽和表面薄层的两相系统，以从包埋的生物样本中除去包埋介质。本专利技术涉及一种高效和有成本效益的方法和组合物，以用于去除包埋的生物样本中的包埋介质。
技术介绍
样本处理，例如在免疫组织化学(“IHC”)应用中，以及在其他的化学和生物学分析中，可能涉及至少一个处理顺序或处理操作指南，作为至少一个样本的分析的一部分。通常情况下，这样的处理操作指南由需要分析的组织或个人(如附属于医院的病理学家或组织学家)来制定，还可以由待执行的特定分析的要求来限定。在样本分析的准备中，可以取得生物样本并以某种保存形式将其贴附在玻片或其他载体上。作为一个实例，样本诸如组织层或组织切片可以保存在甲醛中并包埋在石蜡或其他包埋介质中，用切片机进行切片。然后，组织切片可以贴附在玻片上。用石蜡保存的样本可以进行脱石蜡，通过脱石蜡过程除去包埋样本的石蜡。此外，目标物或样本可以进行目标物修复，该工序将目标物或样本修复到适合染色操作的状态。术语“染色”是指一种工序，即对样本的某些部分进行处理，以显示或突出样本的特征。作为染色的结果，在可见光范围内或在其他电磁波范围内，如紫外线范围内，试图显现的特性可以获得不同的颜色。在某些情况下，染色可以引起可检测到的特性变化，如样本的荧光、磁性、电性或放射性特性的变化。样本的染色包括一系列的处理步骤，称为处理的操作指南。典型的处理操作指南可以包括洗涤、试剂与样本特定部分的结合、试剂的任何活化，并且每个处理步骤可以包括多个单独的处理。诊断应用，例如免疫组织化学(IHC)、原位杂交(ISH)和特殊染色，可能涉及例如脱石蜡、目标物修复和染色等步骤的处理顺序或处理操作指南。在某些应用中，这些步骤可以手动进行，可能创建出时间密集型的操作指南，并需要人员积极参与到样本处理中。即使在自动执行时，在这类应用中也存在不足。已经做出尝试来使样本处理自动化，以满足对于便利的样本处理和更少的手动繁琐操作的需求。为保存生物样本以供其他分析，已使用不同类型的包埋介质。“包埋介质”可以是任何组合物，该组合物在室温下是固体，并于组织学中用于包埋或以其他方式支撑组织学或其他分析用的生物样本，组织学或其他分析为例如免疫组织化学、原位杂交、特殊染色和传统的染料染色。包埋介质的实例包括，但不限于，蜡、石蜡、paramat、paraplats、peelaway石蜡、组织冷冻介质、人体冷冻凝胶(cryonicgel)、OCTTM(“最佳切割温度”)包埋化合物、PolyfinTM、聚酯蜡。“蜡”可以是用于包埋组织化学或其他化学和生物学分析用的生物样本的组合物。蜡在室温下是固体；通常由高级烃类的复合混合物组成，高级烃类通常包括高级脂肪酸和高级二醇的酯；可以是矿物质，天然或合成来源；比脂更硬和更易碎；溶于油和脂，并可以任选地包含增强其样本包埋性的添加剂。石蜡是组织化学领域中最常用的矿物蜡的实例。石蜡是疏水性物质，通常通过石油的蒸馏来制备，且主要是固体饱和烃的混合物。石蜡(蜡)通常由高级聚烯烃组成，且通常包含聚合物，或加入有二甲基亚砜(“DMSO”)。多年来石蜡被用作制备生物样本的包埋介质，这些生物样本用于在切片机中切片，以制备组织学检查的样本切片。本公开中所用的“组织化学”，一般是指如下技术和方法：免疫组织化学、细胞化学、组织病理学、特殊染色、显微技术以及分子探针在例如原位杂交中的使用。如在本公开中所用的术语“脱石蜡”包括石蜡或其他在本申请中所描述的包埋介质的去除。在染色前，通常需要脱石蜡，以便在随后的染色过程中接触到抗体或探针所针对的目标物。用于脱石蜡的溶剂为，例如二甲苯、二甲苯取代物和甲苯。通常在脱石蜡中使用的溶剂可能是有毒的、易燃的、并造成环境危害。传统的手工脱石蜡过程包括，例如将包埋的样本浸入二甲苯(FisherScientific,Cat.#X5-4)浴、甲苯浴或(NationalDiagnosticsInc.,Cat.#HS-200)浴中直至包埋介质溶解的步骤。脱石蜡后的样本随后进行洗涤和再水化，以除去溶剂，并使用醇浓度逐渐降低的一系列醇溶液(通常作为浸泡样本的浴)使样本再水化。例如，样本可以再水化，通过将其浸泡在95％乙醇的第一浴中两次，浸渍在70％乙醇的第二浴中两次，以及浸入水性缓冲液的第三浴。燃料的闪点是其能够与空气形成可燃性混合物的最低温度。在此温度，当移除点火源时，蒸汽可停止燃烧。稍高的温度，燃点，被定义为当蒸汽被点燃后持续燃烧的温度。如上所述，二甲苯是易燃、易挥发和有毒的有机溶剂；二甲苯具有约137℃的低沸点，和约29℃的低闪点，1至6％的爆炸下限。相似地，醇，尤其是乙醇，是易燃的，并具有约78℃的低沸点，约17℃的低闪点，3.5至15％的爆炸下限，因此容易形成爆炸性空气混合物中的一部分。然而，稀释的醇溶液，如10％或20％的乙醇水溶液，能够比传统上使用的乙醇溶液(70至95％的乙醇水溶液)具有显著更高的闪点和沸点。由于二甲苯和醇的危险特性，开发更安全的脱石蜡方法将是有利的。已做出努力来用毒性更小和更少挥发的溶剂来代替脱石蜡过程中的二甲苯。例如，萜烯油和异烷烃，已被证明产生与二甲苯相当的脱石蜡作用。然而，即使在使用这些替代溶剂时，仍然需要一系列的醇洗涤，也被称为再水化过程，在水洗涤前除去溶剂，以实现与大部分类型的染色的相容性，例如免疫组织化学染色。BioGenexLaboratories的美国专利6,632,598、美国专利申请公开2003/0175852A1和国际专利申请WO02/23156A1记载了用于从蜡包埋生物样本中除去蜡的的组合物和方法，其中可以消除二甲苯的使用，且在随后的洗涤步骤中减少或消除醇的使用。其中记载的的组合物包含溶解石蜡的有机溶剂、极性有机溶剂和表面活性剂。溶解石蜡的有机溶剂的实例包括芳香烃、脂肪烃、萜烯、其他油类和石油馏出物。极性有机溶剂包括，例如酮和低级醇。醇可以是，例如，乙醇、乙二醇、异丙醇、丙二醇及其混合物。BioGenexLaboratories公开的组合物和方法的缺点是，即使可以减少或消除脱石蜡后的醇浴的使用，所公开的脱石蜡组合物的极性有机溶剂包含醇。因此，所公开的脱石蜡组合物具有与使用醇浴或进行洗涤的脱石蜡方法相同的缺点。Camiener的美国专利5,344,637记载了使用有机含环化合物来替代和二甲苯作为溶剂的方法。该溶剂用于取代在被固定的生物材料中的醇或其他脱水剂，并从蜡包埋的生物材料中除去蜡。该溶剂包含5wt％至100wt％的化合物，所述化合物选自饱和的有机含环化合物的未取代和取代衍生物(单独的或存在于氢化芳香族石油馏出物中)、及其组合。溶剂经CBGBiotech出售，商标为Formula83TM。Formula83TM的缺点是其119至145℃的相对低的沸点，及其普通可燃性。伴随着仅为7℃的低闪点，和仅为1.3vol％的爆炸下限(LEL)(即在7℃之上的温度)，Formula83TM可以与空气形成可燃混合物，从而造成危险状况。此外，Formula83TM是有机溶剂本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于包埋的生物样本的自动化预处理的装置，所述装置包含：支撑支架，以及预处理容器，所述预处理容器包含溢出通道和溢出排水管、经底部向容器提供液体的入口、用于测量温度的传感器。
【技术特征摘要】
2011.02.28 US 61/447,3641.一种用于包埋的生物样本的自动化预处理的装置，所述装置包含：支撑支架，以及预处理容器，所述预处理容器包含溢出通道和溢出排水管、经底部向容器提供液体的入口、用于测量温度的传感器。2.根据权利要求1所述的装置，还包含双向口。3.根据权利要求1或2所述的装置，还包含用于推动空气进入容器的风扇。4.根据权利要求2所述的装置，还包含加热元件。5.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·H·马蒂森，S·尼尔森，
申请(专利权)人：丹麦达科有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK
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