一种大鲵虹彩病毒MCP抗原的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种大鲵虹彩病毒MCP抗原的制备方法及其应用。本发明专利技术在大鲵虹彩病毒MCP蛋白天然表达基因基础上，依据杆状病毒表达系统对密码子的偏爱性进行了基因修饰，并通过优化表达条件显著提升了重组表达基因在杆状病毒表达系统中的表达效率。在此基础上，本发明专利技术应用免疫磁珠法对表达的目的蛋白进行纯化，该纯化方法具有很高的纯度和收率。本发明专利技术还公开了一种检测大鲵虹彩病毒抗体的ELISA检测试剂盒。

A preparation method of giant salamander iridovirus MCP antigen and its application

The invention discloses a preparation method of giant salamander iridovirus MCP antigen and its application. The natural expression of the proteins of the invention in the giant salamander iridovirus MCP gene based on baculovirus expression system based on preference of codon of gene modification, and by optimizing the expression conditions significantly enhance the expression efficiency of recombinant expression gene expression system in baculovirus. On the basis of this method, the expressed target protein was purified by immunomagnetic beads, and the purification method had high purity and yield. The invention also discloses a box ELISA kit for detecting antibody of giant salamander iridovirus.

【技术实现步骤摘要】
一种大鲵虹彩病毒MCP抗原的制备方法及其应用
本专利技术涉及生物领域，具体涉及一种大鲵虹彩病毒MCP抗原的制备方法及其应用。
技术介绍
中国大鲵(Chinesegiantsalamander，Andriasdavidianus)是现存个体最大的两栖动物，俗名“娃娃鱼”，是我国的珍贵特产，属于国家二级保护动物。近年来在我国的陕西、湖北、湖南、浙江、贵州等省份的大鲵主养区暴发了大鲵虹彩病毒病(Chinesegiantsalamanderiridovirusdisease，CGSIVD)，该病可感染各种规格的养殖大鲵，死亡率高达90％以上，给大鲵养殖业造成了巨大的经济损失。大鲵虹彩病毒病的病原为大鲵虹彩病毒(Chinesegiantsalamanderiridovirus，CGSIV)，是虹彩病毒科(Iridoviridae)，蛙病毒属(Ranavirus)的成员。虹彩病毒(Iridoviruses)是一类病毒粒子较大，呈二十面体状的双链DNA病毒。虹彩病毒科(Iridoviridae)分为五个属：绿虹彩病毒属(Chloriridovirus)，虹彩病毒属(Iridovirus)，淋巴囊肿本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大鲵虹彩病毒MCP抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、以CGSIV‑LY分离株MCP基因序列(GenBank No.KF023635)为原始模板，根据杆状病毒表达系统密码子的偏爱性人工合成CGSIV MCP基因的序列，修饰后的基因序列如SEQ ID NO.2所示；根据人工修饰合成的MCP基因序列和杆状病毒穿梭载体pFastBac1所含的酶切位点，设计特异扩增引物，分别引入EcoR I、Hind III酶切位点，PCR扩增人工修饰MCP基因；引物序列如下：P1：5′‑CCG

【技术特征摘要】
1.一种大鲵虹彩病毒MCP抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、以CGSIV-LY分离株MCP基因序列(GenBankNo.KF023635)为原始模板，根据杆状病毒表达系统密码子的偏爱性人工合成CGSIVMCP基因的序列，修饰后的基因序列如SEQIDNO.2所示；根据人工修饰合成的MCP基因序列和杆状病毒穿梭载体pFastBac1所含的酶切位点，设计特异扩增引物，分别引入EcoRI、HindIII酶切位点，PCR扩增人工修饰MCP基因；引物序列如下：P1：5′-CCGGAATTCATGTCTTCTGTAACTGG-3′(EcoRI)；P2：5′-CCCAAGCTTTTACAAGATTGGGAATCC-3′(HindIII)；总体积为50μL的反应体系为：0.5μL的T5U/μL的TaKaRaExTaq，5.0μL10×ExTaqBuffer(Mg2+Plus)，0.25nmol/LdNTPs4.0μL，引物50pmol/L各1.0μL，DNA模板1μL，ddH2O补充至50μL；反应条件为：95℃3min，95℃45s，60℃45s，72℃1min，30个循环，72℃充分延伸10min；10g/L的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，胶回收PCR产物；S2、将回收的人工修饰的MCP基因连接到pMD-18T载体，反应体系(总体积为10μL)：1μLpMD-18T载体、2μL回收的核酸片段、5μLddH20、1μL10×LigaseBuffer、1μLT4DNALigase。充分混匀后，16℃低温水浴槽中连接过夜。转化大肠杆菌感受态细胞后过夜培养；菌落PCR方法检测目的片段是否连接到载体pMD-18T上；S3用质粒DNA小量提取试剂盒提取质粒，分别用EcoRI和HindIII限制性内切酶双酶切pFastBac1载体和重组质粒，回收纯化后用T4DNA连接酶连接，再转化至E.coliDH5α感受态细...

【专利技术属性】
技术研发人员：周小愿，张星朗，韩亚慧，贾秋红，高宏伟，
申请(专利权)人：陕西省水产研究所，
类型：发明
国别省市：陕西,61