一种人间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法、使用方法技术

本发明专利技术提出了一种人间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法、使用方法，用以解决外泌体的分离回收数量少、质量差、效率低的问题，一种人间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法，包括以下步骤：1)人间充质干细胞的培养、纯化及传代；2)诱导人间充质干细胞大量合成和分泌有功能的外泌体；3)超滤浓缩人间充质干细胞外泌体，制得浓缩培养液并进行冷藏；4)将冷藏后的所述浓缩培养液制备成冻干粉，向所述冻干粉中添加复合液进行保存，本发明专利技术可以有效地诱导间充质干细胞最大限度的合成和分泌外泌体，有助于大规模地获取这些活性成分，便于直接地用于大健康的方方面面，如疾病的诊治和人体的美容整形。

Preparation method and application method of lyophilized powder of human mesenchymal stem cell extracellular substance

The invention provides a human mesenchymal stem cell exosomes freeze-dried powder preparation method, use method, used to solve the separation and recovery of exosome quantity and poor quality and low efficiency problems, a method of preparation of human mesenchymal stem cells in exosomes freeze-dried powder, including the following steps the method comprises the following steps: 1) human mesenchymal stem cells cultured and purified and passaged; 2) induced by human mesenchymal stem cells and the synthesis of a large number of secreted exosomes function; 3) ultrafiltration of human mesenchymal stem cells in exosomes, prepared concentrated culture and liquid storage; 4) will be frozen after the the concentrated culture medium prepared into freeze-dried powder, adding compound liquid powder is saved to the freeze, the invention can effectively induce mesenchymal stem cell synthesis and secretion of maximum exosomes, contribute to the large-scale acquisition of these active components, easy to directly for health All aspects of Kang, such as the diagnosis and treatment of diseases and cosmetic surgery of the human body.

【技术实现步骤摘要】
一种人间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法、使用方法
本专利技术涉及干细胞
，特别是指一种人间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法、使用方法。
技术介绍
间充质干细胞是一群中胚层来源的具有多向分化潜能的多能干细胞，大量研究已经证明间充质干细胞存在于几乎所有的组织和器官，如骨髓、肝脏、脾脏、肺肾、胃肠、骨骼肌、外周血、脂肪、韧带、胎盘、脐带、脐血、牙髓和皮肤等组织中。人脐带间充质干细胞是一类来源于新生儿脐带，具有自我更新和多向分化潜能的干细胞，这类细胞与其他来源的间充质干细胞相比，具有来源丰富，易于采集和运输，增殖能力强，本身无异体排斥反应、不涉及伦理问题等诸多优点，近年来逐渐成为倍受人们关注的成体干细胞。目前研究显示，人脐带间充质干细胞可作为多种疾病治疗的细胞来源，修复多种原因引起的组织损伤，激活体内的休眠细胞，更新和替代衰老和死亡的细胞，但是长期移植入体内后，由于增殖分化和异体抗原的出现，或发生不良分化致瘤的缺点，限制了其在临床广泛应用。近来研究发现间充质干细胞除了上述细胞学的特征外，还能向细胞外分泌一些不同大小的囊泡，如小囊泡(80-1000nm)和外泌体(30-150nm)等。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)人间充质干细胞的培养、纯化及传代；2)诱导人间充质干细胞大量合成和分泌有功能的外泌体；3)超滤浓缩人间充质干细胞外泌体，制得浓缩培养液并进行冷藏；4)将冷藏后的所述浓缩培养液制备成冻干粉，向所述冻干粉中添加复合液进行保存。

【技术特征摘要】
1.一种人间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)人间充质干细胞的培养、纯化及传代；2)诱导人间充质干细胞大量合成和分泌有功能的外泌体；3)超滤浓缩人间充质干细胞外泌体，制得浓缩培养液并进行冷藏；4)将冷藏后的所述浓缩培养液制备成冻干粉，向所述冻干粉中添加复合液进行保存。2.如权利要求1所述的一种人间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤2)的具体操作方法：选择增殖能力强的第3～5代人间充质干细胞，置于含氧量为21％的37℃培养箱中，用含有5％FBS的DMEM/F12培养基进行培养，直到细胞汇合度为60～70％时，改用促进外泌体合成和分泌的培养条件进行培养3～5天，后收集上清液。3.如权利要求2所述的一种人间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述促进外泌体合成和分泌的培养条件：无血清的饥饿培养基，同时向所述饥饿培养基中添加促进因子，且所述饥饿培养基中含氧量为1％～5％，pH值为6.5～7。4.如权利要求3所述的一种人间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述促进因子为：1-100ng/ml伽马干扰素，1-10mg/ml多聚赖氨酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄兵，殷勤伟，
申请(专利权)人：黄兵，
类型：发明
国别省市：北京,11