一种饲养层细胞、培养方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种饲养层细胞的培养方法，包括步骤：1)鸡骨髓间充质干细胞的获取；2)饲养层的制备。本发明专利技术打破了传统的以成纤维细胞作为饲养层的传统方法，避免了多次制备不同代次的成纤维细胞造成的不确定性与不稳定性；避免了异源细胞作为饲养层后产生的不利影响；所使用的细胞仍保持在早期胚胎期其扩增能力强和生存周期长；简化了实验操作步骤，节省了时间，降低实验成本。

Feeder layer cell, culture method and Application

The invention provides a method for culturing feeder layer cells, comprising the steps of: 1) obtaining chicken bone marrow mesenchymal stem cells; (2) preparation of feeder layers. The invention is to break the traditional fibroblast feeder layer as a traditional method, to avoid multiple different preparation and stability of fiber cell uncertainty caused by generation; to avoid the adverse effects of heterologous cells as feeder layer; the cell remains in the early embryo proliferation ability strong and long life cycle; simplify the experimental procedure, save time, reduce the cost.

【技术实现步骤摘要】
一种饲养层细胞、培养方法及应用
本专利技术涉及生物工程
，特别涉及一种饲养层细胞、培养方法及应用。
技术介绍
原始生殖细胞(PrimordialGermCells，PGCs)具备发育全能性,因数量较多,可作为组织工程的新来源。它也是研究基因组印迹与胚胎早期发育关系的最佳材料,还是研究生殖细胞发育分化的体外模型、生产治疗用重组蛋白的理想来源和研究转基因动物遗传操作的有效载体。鸡胚原始生殖细胞(ChickenPrimordialGermCells，cPGCs)应用研究广泛,相比较桑椹胚和囊胚体外培养获取干细胞优势明显；为基础研究提供了最原始的发育生物学模型；生产克隆动物,降低禽类的保种成本；生产药物蛋白,是生产治疗用重组蛋白极为理想的来源。目前cPGC无饲养层细胞的培养体系尚不完善，饲养层仍然是cPGC体外培养和大量扩增必不可少的因素，因此寻找能有效维持鸡原始生殖细胞未分化生长状态的饲养层细胞成为一个重要课题。在cPGCs的体外培养中所采用的饲养层主要有STO细胞株、鸡胚胎原代成纤维细胞(PCEF)、性腺基质细胞(SCs)、小鼠胚胎原代成纤维细胞(PMEF)等。成纤维细胞在体外培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种饲养层细胞的培养方法，包括以下步骤：1)鸡骨髓间充质干细胞的获取：取1至10天龄的鸡的股骨和胫骨，以KO‑DMEM培养基冲洗出骨内的骨髓细胞，过筛网制成单细胞悬液，将单细胞悬液放入离心管，以1000rpm/min离心5min，弃去上层脂肪等杂质后添加cBM‑MSC完全培养基进行培养；2)饲养层的制备：将鸡骨髓间充质干细胞用含有0.02％EDTA的0.25％浓度的胰蛋白酶进行消化，调整细胞密度为5×10

【技术特征摘要】
1.一种饲养层细胞的培养方法，包括以下步骤：1)鸡骨髓间充质干细胞的获取：取1至10天龄的鸡的股骨和胫骨，以KO-DMEM培养基冲洗出骨内的骨髓细胞，过筛网制成单细胞悬液，将单细胞悬液放入离心管，以1000rpm/min离心5min，弃去上层脂肪等杂质后添加cBM-MSC完全培养基进行培养；2)饲养层的制备：将鸡骨髓间充质干细胞用含有0.02％EDTA的0.25％浓度的胰蛋白酶进行消化，调整细胞密度为5×105个/mL，注入24孔板制成饲养层，待长成80％-90％汇合时，用丝裂霉素-C消化处理后进行离心，离心后再次调整细胞密度为5×105个/mL，随后接种于培养板中，置于培养箱中以37℃，5％CO2的环境条件培养至少24h。2.根据权利要求1所述的饲养层细胞的培养方法，其特征在于：所述cBM-M...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志胜，赵妹灿，李东升，张晓芳，郑桂纯，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44