一种磁分离RCA合成DNA酶检测金黄色葡萄球菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种磁分离RCA合成DNA酶检测金黄色葡萄球菌的方法，属于食品安全技术领域。本发明专利技术方法，将金黄色葡萄球菌的16S rDNA为一段特异性检测的目标DNA片段，使用特异性探针修饰的磁纳米粒子来结合和分离金葡菌的16S rDNA，不仅利用磁纳米粒子的磁性分离作用，还利用探针和金葡菌16S rDNA间特异性的互补配对作用，从而快速地从复杂组分中分离金葡菌16S rDNA，并有效结合滚环扩增技术合成的DNA酶催化H2O2‑鲁米诺反应系统来实现信号的双重放大和检测。本发明专利技术方法，提高了检测的准确性、特异性、灵敏度，对金黄色葡萄球菌的检测限达到4.2×10

Method for detecting Staphylococcus aureus by magnetic separation RCA synthesized DNA enzyme

The invention discloses a method for detecting Staphylococcus aureus by magnetic separation RCA synthetic DNA enzyme, belonging to the technical field of food safety. The method of the invention, the 16S of Staphylococcus aureus rDNA for a specific detection of target DNA fragments, using magnetic nanoparticles modified with specific probes and isolated S.aureus 16S rDNA, not only the use of magnetic separation of magnetic nanoparticles, using complementary probe and Staphylococcus aureus 16S rDNA specific pairing, which quickly isolated S.aureus 16S rDNA from complex components, and effective combination of rolling circle amplification technique for the synthesis of DNA catalyzed H2O2 reaction of luminol dual amplification and detection system to achieve the signal. The method of the invention improves the accuracy, specificity and sensitivity of detection, and the detection limit of Staphylococcus aureus reaches 4.2 * 10

【技术实现步骤摘要】
一种磁分离RCA合成DNA酶检测金黄色葡萄球菌的方法
本专利技术涉及一种磁分离RCA合成DNA酶检测金黄色葡萄球菌的方法，属于食品安全

技术介绍
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)大量存在于自然界中，是一种典型的球型革兰氏阳性菌。金葡菌对生长环境要求不严，肉类、鱼类、乳制品等绝大多数食品都可为其提供良好的生长条件，在适宜的温度下，可产生耐高温的肠毒素从而引发食物中毒。我国每年发生大量由金葡菌引起的食物中毒事件，其主要表现症状为呕吐和腹泻。因此，对金葡菌作出快速、精确的检测十分重要。传统检测金葡菌的方法为根据国标法对其进行分离培养和生化鉴别，存在检测耗时、操作繁琐、检测限高等缺点，无法达到现今食品中微生物安全性的要求。随着生物技术的快速发展，许多新型快速检测技术得到了广泛的研究和应用，如PCR技术、免疫学技术、生物传感器和基因芯片技术等。滚环扩增技术(Rollingcircleamplification，RCA)是近几年发展起来的一种等温条件下的DNA复制技术，以短寡核苷酸链为引物，线性单链DNA序列形成环状模板，运用具有链置换作用的DNA聚合酶使引物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)先将捕获探针与亲和素修饰的磁纳米粒子混匀、孵育，使捕获探针修饰到磁纳米粒子表面，得到捕获探针功能化的磁纳米粒子；所述捕获探针功能化的磁纳米粒子能够结合金黄色葡萄球菌的目标DNA序列；(2)将捕获探针功能化的磁纳米粒子与含目标DNA序列的待测液孵育，然后加入信号探针，使目标DNA序列与捕获探针、信号探针生成夹心结构；所述信号探针上包含滚环扩增引物；(3)加入滚环扩增模板，然后滚环扩增引物与相应包含DNA酶互补序列的模板互补配对引发滚环扩增反应合成DNA酶；(4)利用DNA酶进行催化H2O2‑鲁米诺化学发光反应系统，根据相对发光...

【技术特征摘要】
1.一种检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)先将捕获探针与亲和素修饰的磁纳米粒子混匀、孵育，使捕获探针修饰到磁纳米粒子表面，得到捕获探针功能化的磁纳米粒子；所述捕获探针功能化的磁纳米粒子能够结合金黄色葡萄球菌的目标DNA序列；(2)将捕获探针功能化的磁纳米粒子与含目标DNA序列的待测液孵育，然后加入信号探针，使目标DNA序列与捕获探针、信号探针生成夹心结构；所述信号探针上包含滚环扩增引物；(3)加入滚环扩增模板，然后滚环扩增引物与相应包含DNA酶互补序列的模板互补配对引发滚环扩增反应合成DNA酶；(4)利用DNA酶进行催化H2O2-鲁米诺化学发光反应系统，根据相对发光值的变化来定量检测金黄色葡萄球菌。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括先配制一定含有不同浓度的目标DNA序列的标准样品，建立不同浓度的目标DNA序列与相对发光值的标准曲线，当检测待测样品时，将利用待测样品得到的相对发光值代入到标准曲线中，即得到待测样品中的目标DNA序列的浓度。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈晓芳，李双双，庞月红，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32