核酸扩增反应方法、核酸扩增反应装置以及核酸扩增反应用试剂制造方法及图纸
Nucleic acid amplification reaction method, nucleic acid amplification reaction device, and nucleic acid amplification reverse application reagent
The invention provides a nucleic acid amplification reaction method capable of detecting nucleic acid amplification with high sensitivity even if the PCR is high-speed. The thermal cycle process of nucleic acid amplification reaction method comprises the reaction liquid used to contain nucleic acid amplification of nucleic acid amplification reagents applied for the amplification of nucleic acid, in the thermal cycle, the heating time and the annealing reaction elongation reaction for more than one second less than 10 seconds, the nucleic acid amplification reagent contains forward primer and reverse primer, polymerase and fluorescent label probe, concentration of the forward primer is 0.4 M above 3.2 M, concentration of the reverse primer is 0.4 M above 3.2 M, the concentration of 0.5U 4U polymerase in the following, the fluorescent marker probe concentration is 0.15 M above 1.2 M.
【技术实现步骤摘要】
核酸扩增反应方法、核酸扩增反应装置以及核酸扩增反应用试剂
本专利技术涉及核酸扩增反应方法、核酸扩增反应装置以及核酸扩增反应用试剂。
技术介绍
近年来，随着基因的利用技术的发展，基因诊断、基因治疗等利用了基因的医疗备受注目，除此之外在农业、畜牧业领域中，在品种辨别、品种改良中使用了基因的方法也被较多地开发。作为用于利用基因的技术，PCR(PolymeraseChainReaction：聚合酶链反应)法等技术广泛普及。今天，PCR法在生物体物质的信息解析中成为必不可缺的技术。PCR法是对包含成为扩增的对象的核酸(靶核酸)以及试剂的溶液(反应液)实施热循环，从而使靶核酸扩增的方法。热循环是使两个阶段以上的温度周期性地施加于反应液的处理。在PCR法中，通常实施两个阶段或者三个阶段的热循环的方法。例如，在专利文献1中记载了一种核酸扩增反应装置，其使填充有反应液(液滴)以及不与反应液混和且比重小于反应液的液体(油等)的反应容器绕旋转轴旋转，凭借比重差使反应液移动并进行热循环。在专利文献1中，为了检测核酸扩增，而使用荧光标志探针。专利文献1：日本特开2012-115208号公报...
【技术保护点】
一种核酸扩增反应方法，其中，包含向包含核酸的扩增所使用的核酸扩增反应试剂的反应液施加用于使所述核酸扩增的热循环的工序，在所述热循环中，退火反应以及伸长反应用的加热时间为1秒以上10秒以下，所述核酸扩增反应试剂包含正向引物、反向引物、聚合酶以及荧光标志探针，包含于所述反应液的所述正向引物的浓度为0.4μM以上3.2μM以下，包含于所述反应液的所述反向引物的浓度为0.4μM以上3.2μM以下，包含于所述反应液的所述聚合酶的量为0.5U以上4U以下，包含于所述反应液的所述荧光标志探针的浓度为0.15μM以上1.2μM以下。
【技术特征摘要】
2016.03.28 JP 2016-0644681.一种核酸扩增反应方法，其中，包含向包含核酸的扩增所使用的核酸扩增反应试剂的反应液施加用于使所述核酸扩增的热循环的工序，在所述热循环中，退火反应以及伸长反应用的加热时间为1秒以上10秒以下，所述核酸扩增反应试剂包含正向引物、反向引物、聚合酶以及荧光标志探针，包含于所述反应液的所述正向引物的浓度为0.4μM以上3.2μM以下，包含于所述反应液的所述反向引物的浓度为0.4μM以上3.2μM以下，包含于所述反应液的所述聚合酶的量为0.5U以上4U以下，包含于所述反应液的所述荧光标志探针的浓度为0.15μM以上1.2μM以下。2.根据权利要求1所述的核酸扩增反应方法，其中，所述核酸扩增反应试剂包含dNTP，包含于所述反应液的所述dNTP的浓度为0.125mM以上1mM以下。3.根据权利要求2所述的核酸扩增反应方法，其中，所述正向引物的浓度为0.8μM以上3.2μM以下，所述反向引物的浓度为0.8μM以上3.2μM以下，所述聚合酶的量为1U以上4U以下，所述荧光标志探针的浓度为0.3μM以上1.2μM以下，所述dNTP的浓度为0.25mM以上1mM以下。4.根据权利要求3所述的核酸扩增反应方法，其中，所述正向引物的浓度为1.6μM以上3.2μM以下，所述反向引物的浓度为1.6μM以上3.2μM以下，所述聚合酶的量为2U以上4U以下，所述荧光标志探针的浓度为0.6μM以上1.2μM以下，所述dNTP的浓度为0.5mM以上1mM以下。5.根据权利要求4所述的核酸扩增反应方法，其中，所述正向引物的浓度为2.4μM以上3.2μM以下，所述反向引物的浓度为2.4μ...
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