用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的引物组合物、试剂盒及方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的引物组合物、试剂盒及方法和应用，涉及生物检测技术领域，本发明专利技术提供的用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的引物组合物，包括用于扩增突变位点的引物，能够有效检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变，具有灵敏度高、特异性强的优点。本发明专利技术提供的用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的试剂盒，包含上述的引物组合物和用于捕获RNA的探针，能够将不同位置的三个突变进行同时检测，降低检测成本，提高检测效率。本发明专利技术提供的检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的方法，使用先PCR后捕获的方法，提高检测位点的检测率。

Primer composition, kit, method and application for detecting gene susceptible mutations affecting the absorptive capacity of trace elements

The present invention provides a primer composition, a reagent for detecting the effect of trace element absorption ability of genetically susceptible mutant kit and method and application, which relates to the technical field of biological detection, susceptible mutant primer composition provided by the invention is used to detect the effect of trace element absorption ability of genes, including amplification primers for mutation, can the effective detection effect of trace element absorption ability of susceptible gene mutations, with high sensitivity and strong specificity. The susceptible mutant kit provided by the invention is used to detect the effect of trace element absorption ability of the gene, including composition of the above primers and probes for RNA capture, can be the three mutation detection at the same time in different locations, reduce testing costs, improve the efficiency of detection. The invention provides a method for detecting a gene mutation susceptible to the absorption ability of a microelement, and uses a method of capturing PCR first and then improving the detection rate of a detection site.

【技术实现步骤摘要】
用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的引物组合物、试剂盒及方法和应用
本专利技术涉及生物检测
，尤其是涉及一种用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的引物组合物、试剂盒及方法和应用。
技术介绍
微量元素在体内含量很少，它通过参与体内的新陈代谢、生理、生化反应、能量转换等过程，在机体的生命活动中发挥重要作用。微量元素不能在体内自身合成，必须从食物和饮水中摄取，并且膳食中的其他成分能影响到微量元素的吸收代谢。VDR基因编码维生素D受体蛋白2，是维生素D调节反馈系统中重要蛋白。维生素D在体内能够调节促进身体对钙、磷元素的吸收，维持钙、磷的正常代谢，生物学原理是维生素D在身体内通过转化，形成其在体内最有效的1，25-二羟胆钙化(甾)醇形式，1，25-二羟胆钙化(甾)醇能够通过与维生素D受体蛋白(VDR)的作用打开细胞表面的钙元素吸收离子通道，从而促进细胞对钙的吸收。铁是人体必需微量元素之一，具有广泛的生理作用。正常生理状态下，5％-10％的铁来源于肠道吸收，90％-95％的铁来源于脾脏巨噬细胞从衰老红细胞中回收后释放的铁。血红蛋白和铁蛋白含量是临床上反映体内铁贮存状况的常用指标。体内铁减少会导致贫血；铁增多除了会引起以脏器铁蓄积为主要病理改变的血色病外，还会增加2型糖尿病的罹患风险。肝脏分泌的铁调素hepcidin通过调节肠铁吸收和巨噬细胞铁的释放来维持铁代谢平衡。TMPRSS6基因编码的膜结合丝氨酸蛋白酶Matriptase-2能够降解细胞膜上的调控蛋白HJV，进而下调BMPs-SMAD信号通路，抑制hepcidin表达。人体内锌的来源主要是通过膳食获得，一些基因的突变能够影响我们对食物中锌的代谢能力，SLC30A8基因上面一个位点的突变，能够降低我们锌元素的转运能力，这个基因上面有突变的人群，每日需要适量多摄入锌元素才能满足身体需要。SLC30A8基因编码锌转运蛋白8(ZnT8)，主要在胰岛β细胞中表达，负责把锌元素从细胞胞质转运到细胞囊泡中，在胰岛细胞中，ZnT8蛋白主要存在于胰岛素分泌颗粒中，对胰岛素的结晶、储存和分泌都是必不可少的。目前，对于多种微量元素的检测由于所用的引物不同，PCR条件不同，使得对不同种微量元素的检测只能分别进行，费时费力，成本过高且检测效率偏低。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的引物组合物，本专利技术的第二个目的在于提供上述引物组合物在检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变中的应用，本专利技术的第三个目的在于提供一种用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的试剂盒，本专利技术的第四个目的载体提供上述试剂盒在检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变中的应用，本专利技术的第五个目的在于提供一种检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的方法，以缓解现有技术中存在的对于多种微量元素的检测只能分别进行，费时费力，成本过高且检测效率偏低的技术问题。本专利技术提供了一种用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的引物组合物，所述引物组合物包括如下(a)-(c)：(a)用于扩增rs2228570位点的上游引物和下游引物，所述上游引物具有如SEQIDNO.1所示序列，所述下游引物具有如SEQIDNO.2所示序列；(b)用于扩增rs855791位点的上游引物和下游引物，所述上游引物具有如SEQIDNO.3所示序列，所述下游引物具有如SEQIDNO.4所示序列；(c)用于扩增rs13266634位点的上游引物和下游引物，所述上游引物具有如SEQIDNO.5所示序列，所述下游引物具有如SEQIDNO.6所示序列。进一步地，所述用于扩增rs2228570位点的上游引物、用于扩增rs855791位点的上游引物和用于扩增rs13266634位点的上游引物的5’端均经过磷酸化修饰。本专利技术还提供了上述的引物组合物在检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变中的应用。本专利技术还提供了一种用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的试剂盒，所述试剂盒包括上述的引物组合物和用于捕获RNA的探针。进一步地，所述用于捕获RNA的探针具有如SEQIDNO.7所示序列。本专利技术还提供了上述的试剂盒在检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变中的应用。另外，本专利技术还提供了一种检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的方法，所述方法包括：使用上述的引物组合物分别对待测样本DNA进行PCR扩增，得到第一扩增产物，并使用上述的试剂盒中的探针捕获所述第一扩增产物的目标片段，将所述目标片段进行连接，得到连续DNA片段，使用上述的引物组合物中至少一个上游引物和下游引物扩增所述连续DNA片段并得到第二扩增产物，将所述第二扩增产物进行测序处理，检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变。进一步地，还包括将所述第一扩增产物进行纯化。进一步地，所述待测样本DNA来源于组织、血液或口腔上皮细胞中的一种或多种。进一步地，所述微量元素为维生素D、铁和锌。本专利技术提供的用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的引物组合物，包括用于扩增rs2228570位点的引物、用于扩增rs855791位点的引物和用于扩增rs13266634位点的引物，能够有效检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变，具有灵敏度高、特异性强的优点。本专利技术提供的用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的试剂盒，包含上述的引物组合物和用于捕获RNA的探针，能够将不同位置的三个突变进行同时检测，降低检测成本，提高检测效率。本专利技术提供的检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的方法，应用了本专利技术提供的试剂盒，使用先PCR后捕获的方法，提高检测位点的检测率。附图说明图1为本专利技术实施例3步骤(1)中提供的应用本专利技术提供的引物组合物对待测样本DNA进行PCR的结果图；图2为本专利技术实施例3步骤(6)中提供的使用引物rs2228570F和rs13266634R对连接后的连续DNA片段进行PCR的结果图；图3为本专利技术实施例3步骤(7)中提供的PCR产物测序结果峰图。具体实施方式下面将结合附图对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供了一种用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的引物组合物，包括如下(a)-(c)：(a)用于扩增rs2228570位点的上游引物和下游引物：上游引物的核苷酸序列为：5’-PO4-GGAAGTGCTGGCCGCCAT-3’(SEQIDNO.1)；下游引物的核苷酸序列为：5’-CACTGACTCTGGCTCTGACCGT-3’(SEQIDNO.2)；(b)用于扩增rs855791位点的上游引物和下游引物：上游引物的核苷酸序列为：5’-PO4-CTCACTTCTGCCCTTGACCA-3’(SEQIDNO.3)；下游引物的核苷酸序列为：5’-CACAGCATGCGTGGCGTCAC-3’(SEQIDNO.4)；(c)用于扩增rs13266634位点的上游引物和下游引物：上游引物的核苷酸序列为：5’-PO4-CCCTGTGCTTCTTTATC本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括如下(a)‑(c)：(a)用于扩增rs2228570位点的上游引物和下游引物，所述上游引物具有如SEQ ID NO.1所示序列，所述下游引物具有如SEQ ID NO.2所示序列；(b)用于扩增rs855791位点的上游引物和下游引物，所述上游引物具有如SEQ ID NO.3所示序列，所述下游引物具有如SEQ ID NO.4所示序列；(c)用于扩增rs13266634位点的上游引物和下游引物，所述上游引物具有如SEQ ID NO.5所示序列，所述下游引物具有如SEQ ID NO.6所示序列。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括如下(a)-(c)：(a)用于扩增rs2228570位点的上游引物和下游引物，所述上游引物具有如SEQIDNO.1所示序列，所述下游引物具有如SEQIDNO.2所示序列；(b)用于扩增rs855791位点的上游引物和下游引物，所述上游引物具有如SEQIDNO.3所示序列，所述下游引物具有如SEQIDNO.4所示序列；(c)用于扩增rs13266634位点的上游引物和下游引物，所述上游引物具有如SEQIDNO.5所示序列，所述下游引物具有如SEQIDNO.6所示序列。2.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，所述用于扩增rs2228570位点的上游引物、用于扩增rs855791位点的上游引物和用于扩增rs13266634位点的上游引物的5’端均经过磷酸化修饰。3.如权利要求1或2所述的引物组合物在检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变中的应用。4.一种用于检测影响微量元素吸收能力的基因易感突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物组合物和用于捕获RNA的探针。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：李洲，范嘉庚，李鹏飞，
申请(专利权)人：杭州祥音生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33