稳定表达抗TNF‑α单克隆抗体细胞表达体系制造技术

本发明专利技术涉及一种稳定表达抗TNF‑α单克隆抗体的细胞表达体系及构建方法和应用，依照细胞密码子偏爱性将抗TNF‑α单克隆抗体的轻、重链编码基因进行优化，构建了以Bak1基因等做为靶标的抗TNFα人鼠嵌合单克隆抗体同源重组载体，同时针对Bak1等靶标基因外显子区域构建具有特异性切割作用的CRISPR/Case9载体，釆用脂质体转染的方式将两种载体共同导入中华仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞，筛选获得稳定表达抗TNF‑α单克隆抗体的阳性细胞株。本发明专利技术可用于抗TNF‑α单克隆抗体的高效生产，该抗体可用于类风湿性关节炎、强直性脊柱炎等疾病的治疗。

Stable expression of anti TNF alpha monoclonal antibody cell expression system

The invention relates to a stable expression of alpha monoclonal antibody against TNF cell expression system and construction method and application, optimized with light and heavy chain genes encoding codon preference will anti TNF alpha monoclonal antibody, was constructed using Bak1 gene as anti TNF alpha chimeric monoclonal antibody homologous recombination at the same time for the target vector, Bak1 target gene exon CRISPR/Case9 vector was constructed with specific cutting function, using Lipofectamine way two kinds of common carrier into Chinese hamster ovary cells (CHO cells), positive cells selected for stable expression of anti TNF alpha monoclonal antibody. The invention can be used for the efficient production of a monoclonal antibody against TNF, the antibody can be used for the treatment of disease, rheumatoid arthritis, ankylosing spondylitis.

【技术实现步骤摘要】
稳定表达抗TNF-α单克隆抗体细胞表达体系
本专利技术属于生物医药领域，是一种稳定表达抗TNF-α单克隆抗体细胞表达体系的构建及表达。
技术介绍
类风湿性关节炎(Rheumatoidarthritis，RA)是一种原因不明的慢性全身免疫性炎症疾病，可引起全身的关节肿胀疼痛及功能障碍，是主要的致残性疾病之一，严重影响患者的生活质量。RA是一种世界范围的常见病，我国的患病率为0.3-0.4％，任何年龄均可发病，多见于30-50岁的女性。目前治疗RA的药物主要包括非甾体类抗炎药(Nonsteroidalantiinflammatorydrugs，NSAIDs)、改善病情抗风湿药(Disease-modifyinganti-rheumaticdrugs，NMARDs)、肾上腺皮质激素、中药制剂及生物制剂等，由于RA的病因复杂，涉及细胞因子及免疫等作用，化学药物及中药制剂的治疗均对靶点缺乏针对性，而随着生物技术的飞速发展，特异性针对细胞因子作用的单克隆抗体等生物制剂已成为目前针对性最强，疗效最好的RA治疗药物，被视为根治RA的希望。其中，抗TNF-α单克隆抗体infliximab(商品名REM本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定表达抗TNF‑α单克隆抗体细胞株，其特征在于：依照细胞密码子偏爱性优化的轻链、重链编码基因进行密码子，构建轻链、重链共表达的真核表达质粒，利用CRISPR‑Cas9技术实现抗体基因在宿主基因组的稳定定点整合，获得稳定表达抗TNF‑α单克隆抗体的阳性细胞株。

【技术特征摘要】
1.一种稳定表达抗TNF-α单克隆抗体细胞株，其特征在于：依照细胞密码子偏爱性优化的轻链、重链编码基因进行密码子，构建轻链、重链共表达的真核表达质粒，利用CRISPR-Cas9技术实现抗体基因在宿主基因组的稳定定点整合，获得稳定表达抗TNF-α单克隆抗体的阳性细胞株。2.根据权利要求1所述的稳定表达抗TNF-α单克隆抗体细胞株，其特征在于：所述宿主细胞包括CHO、NS0、SP2/0，CHO细胞包括CHO-K1、CHO-S。3.一种稳定表达抗TNF-α单克隆抗体细胞表达体系的构建方法，其特征在于：以不影响细胞基本存活能力、而对细胞增殖及抗体表达生产具有潜在负面影响的基因为靶标，构建特异性整合到靶基因位点的抗TNFα人鼠嵌合单克隆抗体同源重组质粒以及特异性切割靶基因的CRISPR/Case9载体，通过将二者共同转染到宿主细胞中，经筛选成功获得稳定定点整合的抗TNF-α单克隆抗体LC与HC多顺反共表达细胞系。4.根据权利要求3所述的稳定表达抗TNF-α单克隆抗体的细胞表达体系的构建方法，其特征在于：所述负面影响的基因包括Bak1、Bax、Igfbp4、AqpI。5.根据权利要求3所述的稳定表达抗TNF-...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗学刚，张同存，苗峙，李潜，王鹏，赵涧，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津,12