一种重组大鼠磷脂酶Cγ2腺病毒、构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种重组大鼠磷脂酶Cγ2腺病毒，通过将大鼠磷脂酶Cγ2基因插入含有腺病毒基因组的腺病毒穿梭质粒pHBAd‑MCMV‑GFP中获得，所述大鼠磷脂酶Cγ2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术还提供了上述重组大鼠磷脂酶Cγ2腺病毒的构建方法和应用。本发明专利技术针对PLCγ2在癌细胞凋亡中的促进作用，构建PLCγ2重组腺病毒以代替基因的模式，可以针对性对癌细胞生长情况进行调控，重组大鼠磷脂酶Cγ2腺病毒能够稳定表达大鼠磷脂酶Cγ2，病毒滴度高，促细胞凋亡效应显著；重组腺病毒及其表达的大鼠磷脂酶Cγ2对大鼠肝肿瘤细胞具有显著抑制细胞增殖、促进其凋亡效应，为肝肿瘤的预防和治疗提供新的治疗思路。

【技术实现步骤摘要】
一种重组大鼠磷脂酶Cγ2腺病毒、构建方法及其应用
本专利技术属于生物病毒构建领域，具体涉及一种重组大鼠磷脂酶Cγ2腺病毒、构建方法及其应用。
技术介绍
肝脏是机体的重要器官，有外分泌、内分泌、代谢、生物转化等功能，参与糖、脂肪、维生素等营养物代谢、储存和重新分配，对维持机体的代谢平衡有重要作用。肝脏还是机体的主要解毒器官，通过生物转化和胆汁排泄等方式去除代谢废物和外源物。由于肝脏有诸多重要生理功能，因此当肝脏功能失调时就会产生各种肝病。相关的疾病达数百种之多，常见的有肝肿瘤、脂肪肝、肝纤维化、急性肝坏死、中毒性肝病等。我国每年因肝病死亡的人数超过50万，每年治疗肝病的费用高达50-100亿元人民币。在各种肝病中，肝肿瘤有“癌症之王”之称，以高发病率和高死亡率威胁人类的健康，是各种肝病(脂肪肝、肝硬化、病毒性肝炎等)的终末期表现。由于肝肿瘤发病前期病症不明显，致使其不能够较早预防与治疗，故肝脏肿瘤疾病的检测、预防与治疗一直是全球范围的难点课题。随着分子生物学技术的发展，新的治疗方法不断出现。其中基因治疗由于其成本低、药效高、特异性强等优点，成为治疗肝脏瘤的最佳途径。具体说，基因治疗药物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组大鼠磷脂酶Cγ2腺病毒，其特征在于，通过将大鼠磷脂酶Cγ2基因插入含有腺病毒基因组的腺病毒穿梭质粒pHBAd‑MCMV‑GFP中获得，所述大鼠磷脂酶Cγ2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种重组大鼠磷脂酶Cγ2腺病毒，其特征在于，通过将大鼠磷脂酶Cγ2基因插入含有腺病毒基因组的腺病毒穿梭质粒pHBAd-MCMV-GFP中获得，所述大鼠磷脂酶Cγ2基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的重组大鼠磷脂酶Cγ2腺病毒的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤1，重组穿梭质粒的构建步骤1.1，采用无缝克隆技术将SEQIDNO.1所示的大鼠磷脂酶Cγ2基因插入pUC57载体中，得到克隆载体pUC57-PLCγ2；步骤1.2，以克隆载体pUC57-PLCγ2为模板，以Forwardprimer和Rewardprimer为引物，PCR扩增，凝胶回收扩增产物PLCγ2，并利用SmaI将扩增产物PLCγ2酶切，凝胶回收得到PLCγ2酶切产物；所述Forwardprimer的序列为：5’-CTGCAGGTCGGATCCAGACCCGGGATGACCACCATGGTCAACGTGGA-3’，Rewardprimer的序列为：5’-TCTGTAGAATTCGGTCCCGGGGGAGTAGAACCTGCTGTTACTCA-3’；步骤1.3，以SmaI酶切腺病毒穿梭质粒pHBAd-MCMV-GFP，对酶切后的产物进行凝胶回收和纯化，得到MCMV酶切产物；步骤1.4，利用DNAT4连接酶将PLCγ2酶切产...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓光，刘玉梅，吕琼霞，张自强，邓雯，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：河南,41