一种稳定生物活性材料的组合物的制备方法技术

本发明专利技术揭示了一种稳定保存生物活性材料的组合物的制备方法，该包括：制备包含高支化的多糖、生物活性材料、药学上可接受的基质组分及(水性)溶剂的混悬液或真溶液或胶体溶液,上述高支化的多糖及基质组分可溶于或分散于上述(水性)溶剂形成真溶液或胶体溶液(溶液)，上述高支化的多糖的平均支化度以带有支化位点的失水单糖的摩尔百分比表示为30％至70％；制成上述的混悬液或真溶液或胶体溶液(溶液)与高压气体或近超临界液体的混合物；降低混合物的压力，从而形成小滴的气态悬浮体；和用干燥气体与小滴的气态悬浮体交换把小滴干燥成粉状微粒。该组合物的制备方法可更好地稳定生物活性材料(的活性)，延长其贮藏时间或有效期限。

【技术实现步骤摘要】
一种稳定生物活性材料的组合物的制备方法
本专利技术涉及一种组合物的制备方法。具体说来，本专利技术涉及一种稳定保存生物活性材料的组合的制备方法物。
技术介绍
生物材料，如蛋白质、肽、核酸、细菌、细胞、抗体、酶、血清、疫苗、脂质体和病毒，在保存在介质中时通常是不稳定的。US8,968,721揭示了一种保护益生菌的干燥玻璃态基质，该基质由多糖、糖类(单糖、双糖、寡糖)及多元醇(糖醇)组成。US9,072,310、US9,480,276揭示了一种保护益生菌的干燥玻璃态基质，该基质由多糖、糖类(单糖、双糖、寡糖)及蛋白质组成。US9,504,275、US9,504,750、CN104244985A揭示了一种生物活性材料的干燥的稳定化组合物，其包括糖类(多糖、单糖、寡糖、双糖或糖醇)和水解蛋白，进一步还包含羧酸(盐)组分，并可形成为生物活性材料提供增强的稳定性的片剂或其它形式。CN101287449B揭示了用粉状微粒基质保存生物活性材料的方法和组合物。该方法对制剂提供了高压气体喷雾和/或接近超临界喷雾，随后在经调节的气流中干燥以形成包含生物活性材料的稳定的粉状微粒。该组合物含有多羟基化合物(如海藻糖、蔗糖、山梨糖、松三糖、甘油、果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、palactose、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、赤藻醇、苏糖醇、山梨糖醇和蜜三糖)，聚合物(如淀粉、淀粉衍生物、羧甲基淀粉、羟乙基淀粉(HES)、右旋糖酐、人类血清白蛋白(HSA)和明胶，以提供对微粒的生物活性材料和结构的保护)，表面活性剂等，还可包含氨基酸稳定剂添加剂(如赖氨酸、精氨酸、氨基乙酸、甲硫氨酸、组氨酸等等)。上述技术，特别是其中提及的多糖，对生物活性材料起了重要的稳定保护作用，但仍有较大的改善空间。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种稳定保存生物活性材料的干燥组合物及其制备方法。基于上述目的，本上明人意外地上现，在原有技术基础上,把原普通多糖替换成高支化的多糖,其他基本不变，相比原普通多糖，可更好地稳定生物活性材料(的活性)，延长其贮藏时间或有效期限。希望不受该理论的限制，高支化的多糖，相比普通多糖，与生物活性材料具有更多的亲合点、更高的亲合性，对生物活性材料的初级结构及次级结构有更好的稳定及保护作用,从而对其活性具有更好的稳定及保护作用。本专利技术涉及一种稳定保存生物活性材料的组合物的制备方法，该制备方法通常包括：1)、制备包含高支化的多糖、生物活性材料、药学上可接受的基质组分及(水性)溶剂的混悬液或真溶液或胶体溶液(溶液)，上述高支化的多糖及基质组分可溶于或分散于上述(水性)溶剂形成真溶液或胶体溶液(溶液)，上述高支化的多糖对上述生物活性材料不具有活性抑制或杀灭作用,上述高支化的多糖的平均支化度以带有支化位点的失水单糖的摩尔百分比表示为30％至70％(，较佳地，(且)上述高支化的多糖的平均重均分子量Mw为10,000至800,000道尔顿)；2)、制成上述的混悬液或真溶液或胶体溶液(溶液)与高压气体或近超临界液体的混合物(较佳地，上述高压气体含有一压力，该压力范围为250～15000psi)；3)、降低混合物的压力，从而形成小滴的气态悬浮体；和4)、用干燥气体与小滴的气态悬浮体交换把小滴干燥成粉状微粒。在描述和主张本专利技术时，将根据下述定义来使用下列术语。应当理解，在本文中使用的术语的目的仅仅是为了描述具体实施方式，并不旨在限制。在本说明书和随附的权利要求书中使用时，单数形式“一”、“一种”、“一个”和“此”包括其复数形式，除非上下文明确指明不是如此。因此，例如，言及“蛋白质”则包括单个蛋白质或两种或两种以上蛋白质的组合；言及“酶”、“细菌”等则包括单个或几种类型的混合物，等等。本专利技术中的术语“生物活性成分”、“生物活性材料”和“生物材料”都是指允许生物活性的微生物或成分,其基本成分或基本组成或构成成分的分子中包含肽链或蛋白链或核酸链。适用于本专利技术的生物活性材料包括但不限于活性肽、活性蛋白质、酶、激素、核酸、抗体、疫苗、微生物(如酵母、真菌、细菌(益生菌或其它)、病毒、土壤微生物)、脂质体、血清和/或细胞悬液。本专利技术中的术语“生物(药物)组合物”是指处于允许生物活性成分或试剂的生物活性明确有效的形式下的制备物(制剂)，且不包含任何对组合物施用到的受试者有毒的另外成分。本专利技术中的术语“稳定(性)”是指制剂或组合物中的生物活性材料在储存后基本上保留其物理稳定性、化学稳定性和/或生物活性。用于测定稳定性的各种分析技术是本领域可得到的，和可见，如肽和蛋白质给药“(PeptideandProteinDrugDelivery)，247～301，VincentLeeEd.，MarcelDekker，Inc.，NewYork，N.Y.，Pubs.(1991)和Jones，A.Adv.DrugDeliveryRev.10：29～90(1993)。对于选定的时间长度而言，可以在选定的温度和湿度条件下测量稳定性。可以使用趋势分析来估算预期的储存期限，然后才将材料实际储存该时间长度。例如，对于活细菌而言，稳定性被定义为在预定的温度、湿度和时间长度条件下失去1log的CFU/g干制剂所花费的时间。对于活的流感病毒，稳定性被定义为它释放1logFFU/ml或1logTCID50/ml所用的时间。“稳定”制剂或组合物是储存时其中生物活性材料基本保留其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的制剂或组合物。该组合物在室温(～25℃)稳定至少3个月和/或在约2～8℃下稳定至少1年较佳。而且，该组合物在冷冻(到，如-70℃)和融化后仍稳定较佳。对于细菌来说，“活力”是指在适合于细菌生长的营养介质上形成菌落的能力(CFU或菌落形成单位)。对于病毒来说，活力是指感染适合的宿主细胞并在适合的宿主细胞中繁殖，导致在宿主细胞的菌苔(lawn)上形成噬斑的能力。“玻璃增强剂”、“玻璃增强化合物”和“玻璃形成剂”在本文中可互换使用，指能在低于临界温度(玻璃转化温度(Tg))时具有形成无定形或玻璃质结构的能力的化合物。在玻璃质结构的形成中，生物物质可以包埋于玻璃结构中。玻璃形成剂的组合也可考虑在单一组合物中。用于获得用于本专利技术目的的玻璃质结构的方法通常是溶剂升华和/或蒸发技术。理想情况下，属于GRAS化合物的化合物优选于那些不属于GRAS的化合物。“玻璃”或“玻璃态”或“玻璃基质”指流动能力明显降低的液体(即固体溶液或固体溶胶)，或者说，很高粘度的液体，其中粘度范围在1010到1014帕斯卡·秒。它可以被认为是亚稳定无定形体系，其中分子有振动运动但是有很慢(几乎测不出)的转动和平移分量。作为亚稳定体系，它在储存在远低于玻璃转化温度的温度时可在长时间内稳定。由于玻璃不处于热力学平衡状态，储存在玻璃转化温度和接近玻璃转化温度的玻璃松弛到平衡并失去了高粘度。产生的似橡胶的或糖浆状，流动液体经常在化学上和结构上不稳定。玻璃虽然可通过许多不同途径获得，但无论用任何途径获得，看起来在物理上和结构上是一样的材料。用于获得本专利技术的玻璃基质的方法通常是溶剂升华和/或蒸发技术。“玻璃转化温度”以符号Tg表示，是指组合物从玻璃或类玻璃状态转变为糖浆状或似橡胶的状态的温度。通常Tg是使用差示扫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定保存生物活性材料的组合物的制备方法，该制备方法包括(/包含)：1)、制备包含高支化的多糖、生物活性材料、药学上可接受的基质组分及(水性)溶剂的混悬液或真溶液或胶体溶液(溶液)，上述高支化的多糖及基质组分可溶于或分散于上述(水性)溶剂形成真溶液或胶体溶液(溶液)，上述高支化的多糖对上述生物活性材料不具有活性抑制或杀灭作用,上述高支化的多糖的平均支化度以带有支化位点的失水单糖的摩尔百分比表示为30％至70％(，较佳地，(且)上述高支化的多糖的平均重均分子量Mw为10，000至800，000道尔顿)；2)、制成上述的混悬液或真溶液或胶体溶液(溶液)与高压气体或近超临界液体的混合物(较佳地，上述高压气体含有一压力，该压力范围为250～15000psi)；3)、降低混合物的压力，从而形成小滴的气态悬浮体；和4)、用干燥气体与小滴的气态悬浮体交换把小滴干燥成粉状微粒。

【技术特征摘要】
1.一种稳定保存生物活性材料的组合物的制备方法，该制备方法包括(/包含)：1)、制备包含高支化的多糖、生物活性材料、药学上可接受的基质组分及(水性)溶剂的混悬液或真溶液或胶体溶液(溶液)，上述高支化的多糖及基质组分可溶于或分散于上述(水性)溶剂形成真溶液或胶体溶液(溶液)，上述高支化的多糖对上述生物活性材料不具有活性抑制或杀灭作用,上述高支化的多糖的平均支化度以带有支化位点的失水单糖的摩尔百分比表示为30％至70％(，较佳地，(且)上述高支化的多糖的平均重均分子量Mw为10，000至800，000道尔顿)；2)、制成上述的混悬液或真溶液或胶体溶液(溶液)与高压气体或近超临界液体的混合物(较佳地，上述高压气体含有一压力，该压力范围为250～15000psi)；3)、降低混合物的压力，从而形成小滴的气态悬浮体；和4)、用干燥气体与小滴的气态悬浮体交换把小滴干燥成粉状微粒。2.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述的高支化的多糖选自高支化多糖中的高支化的支链淀粉、高支化的动物糖原、高支化的植物糖原、高支化植物β-D-葡聚糖、高支化真菌β-D-葡聚糖、高支化植物杂多糖、高支化真菌杂多糖或它们的降解的产物，及其混合物。3.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述的高支化的多糖选自高支化的茶杂多糖(酸性多糖)、裂褶菌葡聚糖、硬葡聚糖、香茹多糖、木聚糖、霉菌多糖、凝胶多糖、竹荪多糖、竹节参杂多糖、虎奶菇菌核多糖、虎奶菇菌核糖蛋白，或它们的降解的产物，及其混合物。4.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述的生物活性材料选自活性肽、活性蛋白质、酶、激素、核酸、抗体、疫苗、微生物(如酵母、真菌、细菌(益生菌或其它)、病毒、土壤微生物)、脂质体、血清(如人血清、牛血清)或细胞悬液，及它们的混合物。5.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述的药学上可接受的基质组分选自药学上可接受的单糖、双糖、寡糖(3～20糖)、糖醇、无生物活性的多糖、环糊精、氨基酸(及其盐)、可食用或药用肽、聚氨基酸、聚烯吡酮(PVP)、糖胺(如葡甲胺)、室温25℃下为固体的羧酸、羧酸盐、药用无机盐，及它们的混合物。6.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述气体或近超临界液体选自氮、氧、氦、二氧化碳、六氟化硫、氯氟烃、氟碳化合物、一氧化二氮、氙、丙烷、正戊烷、乙醇、氮和水。7.一种制备稳定保存生物活性材料(一种根据权利要求1至52所述)的组合物中的粉状微粒的设备，该设备包含：第一室，其包含高支化的多糖、生物活性材料、药学上可接受的基质组分及(水性)溶剂的混悬液或真溶液或胶体溶液(溶液)，上述高支化的多糖及基质组分可溶于或分散于上述(水性)溶剂形成真溶液或胶体溶液(溶液)，上述高支化的多糖对上述生物活性材料不具有活性抑制或杀灭作用,上述高支化的多糖的平均支化度以带有支化位点的失水单糖的摩尔百分比表示为30％至70％(，较佳地，(且)上述高支化的多糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟术光，
申请(专利权)人：钟术光，
类型：发明
国别省市：四川,51