一种用于INS‑1大鼠胰岛细胞培养的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于INS‑1大鼠胰岛细胞培养的试剂盒，所述试剂盒配方的组成为：氨基酸类2.5×10‑5mol/L～1.1×10‑3mol/L，维生素类3.7×10‑9mol/L～1.9×10‑4mol/L，谷胱甘肽3.0×10‑6mol/L，无机盐类4.0×10‑4mol/L～1.03×10‑1mol/L，D‑葡萄糖1.1×10‑2mol/L，其他化合物5.0×10‑5mol/L～1.0×10‑2mol/L，占试剂盒体积百分比为5％的胎牛血清；其中，所述其他化合物为酚红1.3×10‑5mol/L、HEPES1.0×10‑2mol/L、Na‑pyruvate 1.0×10‑3mol/L、2‑mercaptoethanol5.0×10‑5mol/L、IGF‑1 1.0×10‑5mol/L和IGF‑2 1.0×10‑5mol/L；本发明专利技术试剂盒细胞倍增时间更短、扩增效率高、收获细胞量较常规培养方式更多且细胞的形态更为稳定。

A kit for INS 1 rat islet cell culture

The invention discloses a kit for INS 1 islet cell culture, consisting of the kit for formula: amino acids 2.5 * 10 ~ 1.1 * 10 5mol/L 3mol/L, 3.7 x 10 vitamin 9mol/L ~ 1.9 * 10 4mol/L 3 * 10, glutathione 6mol/L, inorganic salt 4 * 10 ~ 1.03 * 10 4mol/L 1mol/L, D glucose 1.1 * 10 2mol/L, 5 x 10 other compounds 5mol/L ~ 1 x 10 2mol/L kit, accounted for 5% volume fraction of fetal bovine serum; among them, the other is 1.3 x 10 phenol compounds, HEPES1.0 * 5mol/L 10 2mol/L, Na pyruvate 1 x 10, 2 x mercaptoethanol5.0 3mol/L 10 5mol/L, IGF 1 1 * 10 5mol/L and 2 IGF 1 x 10 5mol/L; the kit of the invention cell doubling time shorter, high amplification efficiency, harvest cells compared with the conventional culture and more The morphology of the cells is more stable.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于试剂盒
，尤其是涉及一种用于INS-1大鼠胰岛细胞培养的试剂盒。
技术介绍
细胞试剂盒既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。细胞试剂盒是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。试剂盒主要包括天然细胞试剂盒、合成细胞试剂盒和无血清细胞试剂盒等。天然细胞试剂盒是人们早期采用的细胞试剂盒，直接取自于动物组织提取液或体液，如血浆凝块、血清、淋巴液、胚胎浸出液等。营养价值高，但成分复杂，差异大、不稳定，来源也受到限制。水解乳蛋白和胶原是两种较好的天然试剂盒，富含氨基酸。血清是天然试剂盒中最有效和最常用的试剂盒，但其组成成分复杂，其中一些成分与功能不明确。合成细胞试剂盒是用化学成分明确的试剂配制的试剂盒，组分稳定，主要包括糖类、必需氨基酸、维生素、无机盐类等。自1950年199细胞试剂盒问世以来，合成细胞试剂盒发展至今已有几十种，除了沿用半个世纪的基础合成细胞试剂盒之外，近年来还出现了营养成分更加丰富的低血清细胞试剂盒。由于细胞种类和培养条件不同，适宜的合成细胞试剂盒也不同，在动物细胞培养中最常用基础细胞试剂盒有6～7种，如BME、MEM、DMEM、HAMF12、PRMI1640、M199等。由于天然试剂盒的一些营养成分不能被合成细胞试剂盒完全代替，因此一般需在合成细胞试剂盒中添加5％～10％的小牛血清。小牛血清的加入对细胞培养非常有效，但小牛血清的成分复杂，这对培养产物的分离纯化和检测会带来一定的不便，为减少小牛血清的影响，开发了营养成分更加丰富的低血清细胞试剂盒，可以将小牛血清的使用量降低到1～3％。现有用于INS-1大鼠胰岛细胞培养的试剂盒主要使用成分明确的PRMI1640试剂盒，然而该试剂盒会导致细胞状态下降、甚至是死亡；必须添加血清及其他的添加物才行；这些添加物的成分并不明确，未见专利论文报道且ATCC并未收录
技术实现思路
本专利技术为了克服现有技术的缺陷，目的在于提供了一种用于INS-1大鼠胰岛细胞培养的试剂盒，该试剂盒细胞倍增时间更短、扩增效率高、收获细胞量较常规培养方式更多且细胞的形态更为稳定。为了实现上述目的，本专利技术取的技术方案如下：一种用于INS-1大鼠胰岛细胞培养的试剂盒，所述试剂盒配方的组成为：PRMI164培养基80％，氨基酸类2.5×10-5mol/L～1.1×10-3mol/L，维生素类3.7×10-9mol/L～1.9×10-4mol/L，谷胱甘肽3.0×10-6mol/L，无机盐类4.0×10-4mol/L～1.03×10-1mol/L，D-葡萄糖1.1×10-2mol/L，其他化合物5.0×10-5mol/L～1.0×10-2mol/L，占试剂盒体积百分比为5％的胎牛血清；其中，所述其他化合物为酚红1.3×10-5mol/L、HEPES1.0×10-2mol/L、Na-pyruvate1.0×10-3mol/L、2-mercaptoethanol5.0×10-5mol/L、IGF-11.0×10-5mol/L和IGF-21.0×10-5mol/L。优选的，所述氨基酸为L-精氨酸1.1×10-3mol/L、L-天冬酰胺1.7×10-3mol/L、L-天冬氨酸1.5×10-4mol/L、L-半胱氨酸2.1×10-4mol/L、L-谷氨酸1.4×10-4mol/L、L-谷氨酰胺4.1×10-3mol/L、甘氨酸1.3×10-4mol/L、L-组氨酸9.7×10-5mol/L、L-羟脯胺酸1.5×10-4mol/L、L-异亮氨酸3.8×10-4、L-亮氨酸3.8×10-4、L-赖氨酸HCL2.2×10-4mol/L、L-甲硫氨酸1.0×10-4mol/L、L-苯丙氨酸9.1×10-5mol/L、L-脯氨酸1.7×10-4mol/L、L-丝氨酸2.9×10-4mol/L、L-苏氨酸1.7×10-4mol/L、L-色氨酸2.5×10-5mol/L、L-酪氨酸1.1×10-4mol/L和L-缬氨酸1.7×10-4mol/L中的一种或多种。优选的，所述维生素类为P-氨苯甲酸7.30×10-6mol/L、生物素8.20×10-7mol/L、氧化胆碱2.10×10-5mol/L、叶酸2.30×10-6mol/L、1-肌醇1.9×10-4mol/L、烟酰胺8.2×10-6mol/L、D-偏多酸钙1.1×10-6mol/L、吡哆醇4.9×10-6mol/L、核黄素5.3×10-7mol/L、硫胺素3.0×10-6mol/L和维生素B123.7×10-9mol/L中的一种或多种。优选的，所述无机盐类为KCl5.3×10-3mol/L、MgSO44.0×10-4mol/L、NaCl1.03×10-1mol/L、NaHCO32.3×10-2mol/L、Na2HPO45.6×10-3mol/L中的一种或多种。与现有的技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术所提供的INS-1细胞试剂盒中添加了多种其他化合物，其中，酚红为酸碱指示剂，PH对细胞的生长影响显著、HEPES为缓冲盐，对细胞无毒且能平衡培养体系的PH、Na-pyruvate是能源物质为细胞提供能量、2-mercaptoethanol为强还原剂，能保护细胞免受氧化损伤、IGF-1IGF-2生长因子，能够促进细胞增殖，因此，本专利技术试剂盒细胞倍增时间更短、扩增效率高、收获细胞量较常规培养方式更多且细胞的形态更为稳定。附图说明：图1本专利技术实施例1和对比例1-2不同培养体系INS-1细胞生长曲线图；图2本专利技术实施例1和对比例1-2不同培养体系培养INS-1细胞峰值图；图3本专利技术实施例1和对比例1-2不同培养体系INS-1细胞培养扩增倍数图；图4本专利技术实施例1和对比例1-2不同培养体系INS-1细胞细胞活率图；图5本专利技术实施例1和对比例1-2不同培养体系INS-1细胞克隆形成率图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1一种用于INS-1大鼠胰岛细胞培养的试剂盒，所述试剂盒配方的组成为：L-精氨酸1.1×10-3mol/L，P-氨苯甲酸7.30×10-6mol/L，谷胱甘肽3.0×10-6mol/L，KCl5.3×10-3mol/L，D-葡萄糖1.1×10-2mol/L，酚红1.3×10-5mol/L、HEPES1.0×10-2mol/L、Na-pyruvate1.0×10-3mol/L、2-mercaptoethanol5.0×10-5mol/L、IGF-11.0×10-5mol/L和IGF-21.0×10-5mol/L，占试剂盒体积百分比为5％的胎牛血清。实施例2一种用于INS-1大鼠胰岛细胞培养的试剂盒，所述试剂盒配方的组成为：L-天冬酰胺1.7×10-3mol/L，生物素8.20×10-7mol/L，谷胱甘肽3.0×10-6mol/L，MgSO44.0×10-4mol/L，NaCl1.03×10-1mol/L，D-葡萄糖1.1×10-2mol/L，酚红1.3×10-5mol/L，HEPES1.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于INS‑1大鼠胰岛细胞培养的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒配方的组成为：氨基酸类2.5×10‑5mol/L～1.1×10‑3mol/L，维生素类3.7×10‑9mol/L～1.9×10‑4mol/L，谷胱甘肽3.0×10‑6mol/L，无机盐类4.0×10‑4mol/L～1.03×10‑1mol/L，D‑葡萄糖1.1×10‑2mol/L，其他化合物5.0×10‑5mol/L～1.0×10‑2mol/L，占试剂盒体积百分比为5％的胎牛血清；其中，所述其他化合物为酚红1.3×10‑5mol/L、HEPES 1.0×10‑2mol/L、Na‑pyruvate 1.0×10‑3mol/L、2‑mercaptoethanol 5.0×10‑5mol/L、IGF‑1 1.0×10‑5mol/L和IGF‑2 1.0×10‑5mol/L。

【技术特征摘要】
1.一种用于INS-1大鼠胰岛细胞培养的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒配方的组成为：氨基酸类2.5×10-5mol/L～1.1×10-3mol/L，维生素类3.7×10-9mol/L～1.9×10-4mol/L，谷胱甘肽3.0×10-6mol/L，无机盐类4.0×10-4mol/L～1.03×10-1mol/L，D-葡萄糖1.1×10-2mol/L，其他化合物5.0×10-5mol/L～1.0×10-2mol/L，占试剂盒体积百分比为5％的胎牛血清；其中，所述其他化合物为酚红1.3×10-5mol/L、HEPES1.0×10-2mol/L、Na-pyruvate1.0×10-3mol/L、2-mercaptoethanol5.0×10-5mol/L、IGF-11.0×10-5mol/L和IGF-21.0×10-5mol/L。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述氨基酸为L-精氨酸1.1×10-3mol/L、L-天冬酰胺1.7×10-3mol/L、L-天冬氨酸1.5×10-4mol/L、L-半胱氨酸2.1×10-4mol/L、L-谷氨酸1.4×10-4mol/L、L-谷氨酰胺4.1×10-3mol/L、甘氨酸1.3×10-4mol/L、L-组氨酸9.7×10-5mol/L、L-羟脯胺酸1.5×10-4mol/L、L-异亮氨酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖泽玺，祝加和，李超，江泉，李秋圆，陈晨，刘媛媛，李献更，
申请(专利权)人：上海银海圣生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31