用于对循环肿瘤细胞进行测序的血液样品处理制造技术

本发明专利技术提供了一种检测CTC基因组中的突变的方法，所述方法使用负选择步骤从血液样品中去除一部分非CTC。所述负选择步骤之后是从剩余的富集CTC中提取DNA、然后将所述DNA稀释到非常低的浓度并制备最终稀释液的两个或更多个重复品并对所述重复品进行测序。

A sample of blood used to sequence a circulating tumor cell

The present invention provides a method for detecting mutations in the CTC genome that removes a portion of non CTC from a blood sample using a negative selection step. After the negative selection step is to extract DNA from the enrichment of CTC in the remaining, then the DNA is diluted to a very low concentration and the preparation of the final dilution of two or more repeated and the products were sequenced to repeat.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于对循环肿瘤细胞进行测序的血液样品处理
本专利技术涉及一种用于以能够对循环肿瘤细胞进行有效的基因组DNA测序的方式处理血液样品的方法。已知患有不同癌症的患者的血液中存在循环肿瘤细胞(CTC)。所述循环肿瘤细胞是罕见的细胞并且通常每毫升血液可能仅存在1到1,000个细胞。血液中存在的其他细胞数量上大大超过所述循环肿瘤细胞，这使得通过细胞化学技术或分子技术对CTC进行分析变得复杂。
技术介绍
循环肿瘤细胞(CTC)在癌症中的确切作用仍旧未被完全理解。认为它们是癌症扩散到全身的机制。当前了解到细胞发生突变使控制细胞生长的机制失去活性。很可能存在具有不同影响的多位点突变，如引起抗药性的多位点突变。CTC的水平随着肿瘤负荷增大而升高，并且这个特征用于使用Veridex公司的CellSearch仪器监测对例如乳腺癌的疗效。要求在分析之前提取、富集并纯化CTC。在例如10mL体积的全血中捕获少量CTC具有巨大的挑战性，该全血中将含有约4千万到1亿个白细胞和高达550亿个红细胞。所有这些CTC富集方法的关键问题是CTC的内在脆弱性难题。阳性富集技术过去一直用于选择和捕获CTC，这些技术包括使用细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在血液样品中检测突变的方法，该方法包括：对所述血液样品进行处理以去除一部分正常的非CTC有核细胞；纯化来自所述经处理的样品的DNA；稀释所述经纯化的DNA；将所述经稀释的DNA分成两个或更多个重复品；对每个重复品中存在的DNA进行测序并且如果对一个或多个重复品的测序读数中超过1％显示所述序列中的突变则鉴别所述突变。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.13 GB 1502374.0;2015.09.07 GB 1515754.81.一种在血液样品中检测突变的方法，该方法包括：对所述血液样品进行处理以去除一部分正常的非CTC有核细胞；纯化来自所述经处理的样品的DNA；稀释所述经纯化的DNA；将所述经稀释的DNA分成两个或更多个重复品；对每个重复品中存在的DNA进行测序并且如果对一个或多个重复品的测序读数中超过1％显示所述序列中的突变则鉴别所述突变。2.根据权利要求1所述的方法，其中鉴别突变的阈值是重复品的2％或更多、3％或更多、5％或更多、或10％或更多读数中的一者显示所述突变。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述DNA被稀释成每微升100个基因组的水平或更低的水平。4.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述DNA被稀释成每微升20个基因组的水平或更低的水平。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述DNA被稀释成每微升10个基因组的水平或更低的水平。6.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述经稀释的DNA被分成五个...

【专利技术属性】
技术研发人员：达米安·邦德，克里斯多佛·斯坦利，
申请(专利权)人：泊克玛科技有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB