新型产志贺毒素F18型大肠杆菌噬菌体Esc‑COP‑1及其用于抑制产志贺毒素F18型大肠杆菌增殖的用途制造技术

本发明专利技术涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌菌株的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑COP‑1，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12662BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的方法。

New type of Shiga toxin producing Escherichia coli F18 phage Esc COP 1 and its use for inhibiting Shiga toxin producing Escherichia coli F18 proliferation

The present invention relates to a separation from nature and can specifically kill Shiga toxin producing Escherichia coli F18 strains myoviridae phage Esc COP 1, having represented by the nucleotide sequence of SEQ ID NO:1 genome (Registration Number: KCTC 12662BP), and the use of containing the phage as the active ingredient composition for the prevention and treatment methods of Shiga toxin producing Escherichia coli F18 infection.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种从自然界分离的感染和杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌的噬菌体，以及一种使用包含噬菌体作为活性成分的组合物用来预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的方法。更具体地说，本专利技术涉及从自然界分离出来的并可以特异性地杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌菌株的肌尾噬菌体科噬菌体Esc-COP-1，其具有由SEQIDNO：1的核苷酸序列表示的基因组(登记号：KCTC12662BP)以及预防产志贺毒素F18型大肠杆菌感染和之后使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物治疗的方法。
技术介绍
有两种大肠杆菌(E.coli)：非致病性大肠杆菌和致病性大肠杆菌。非致病性大肠杆菌是肠道中的正常固有菌群，有利于与其他肠细菌平衡，有助于消化等。致病性大肠杆菌通过菌毛附着在肠壁上增殖并产生引起腹泻的肠毒素。致病性大肠杆菌影响各种不同年龄的家畜，引起明显的症状-腹泻，其可能由于脱水导致高死亡率。在韩国，据报道，这种腹泻几乎在大部分家畜养殖场发生。此外，在轮状病毒、冠状病毒、原生球虫等的混合感染的情况下，与单一感染的情况相比，这种发作是因为损伤肠粘膜而引起的，症状高度加重。有几种致病性大肠杆菌菌株引起腹泻。尤其是，产志贺毒素F18型大肠杆菌通常被报道会在猪中引起严重的腹泻和水肿。产志贺毒素F18型大肠杆菌通过菌毛(F18)附着在肠上皮细胞上，以分泌志贺毒素。分泌的毒素被吸收到血管中增加血压并损伤小动脉，从而在身体的各个部分产生水肿并伴随惊厥、瘫痪等。考虑到产志贺毒素F18型大肠杆菌对畜牧业的重大损害，迫切需要开发有效预防和治疗这种感染的方法。已经使用各种抗生素来预防或治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌的这种感染。然而，由于耐抗生素性细菌的增加，迫切需要有效的替代方法。最近，使用噬菌体作为治疗细菌感染的新方法引起了我们的注意。特别地，我们对噬菌体非常感兴趣的原因是因为基于噬菌体的治疗是一种自然友好的方法。噬菌体是感染细菌的极小微生物，简称为噬菌体。一旦噬菌体感染细菌，噬菌体在细菌细胞内增殖。完全增殖后，后代破坏细菌细胞壁逃离宿主，这说明噬菌体具有杀菌能力。噬菌体感染的特征是特异性高，使得特定噬菌体仅感染特异性细菌。也就是说，可以被特定噬菌体感染的细菌是有限的，这表明噬菌体只能杀死特定细菌并且不会伤害其他细菌。噬菌体首先由英国细菌学家特沃特(Twort)在1915年发现，当时他注意到微球菌菌落被未知的某种东西融化并变得透明。1917年，法国细菌学家d'Herelle发现，痢疾病人粪便的滤液中的痢疾志贺菌(Shigelladisentriae)被某物融化，并进一步研究了这种现象。结果是，他独自确定了噬菌体，并将其命名为噬菌体，其意思是病菌杀手。从那时起，已经连续鉴定了特异性地作用于志贺菌(Shigella)、伤寒沙门氏菌(SalmonellaTyphi)和霍乱弧菌(Vibriocholerae)等致病菌的噬菌体。由于噬菌体杀死细菌的独特能力，已经研究并预期噬菌体是治疗细菌感染的更好的方法。然而，Fleming发现青霉素之后，由于抗生素的普及，只有东欧国家和前苏联的噬菌体研究在继续。2000年以后，常规抗生素的优点由于耐抗生素性细菌的增加而褪色。因此，噬菌体再次被视为可以代替常规抗生素的新的抗菌剂。此外，最近全球政府强化对使用抗生素的监管。对噬菌体感兴趣的越来越多，工业应用也越来越多。因此，本专利技术人尝试通过使用从自然界中分离的可以选择性地杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌的噬菌体而开发可用于预防或治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的组合物，并进一步建立使用该组合物预防或治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的方法。结果是，本专利技术人分离出适合于此目的的噬菌体，并确定了可将本专利技术的噬菌体与其他噬菌体区分开的基因组的核苷酸序列。然后，我们已经开发了一种包含分离的噬菌体作为活性成分的组合物，并证实该组合物可以有效地用于预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染，完成本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从自然界中分离的并可以特异性杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌的肌尾噬菌体科的噬菌体Esc-COP-1，其具有由SEQIDNO：1的核苷酸序列表示的基因组(登记号：KCTC12662BP)。本专利技术的另一个目的是提供一种适用于预防产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的组合物，其包含可以感染和杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌的噬菌体Esc-COP-1作为活性成分，以及使用所述组合物预防产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的方法。本专利技术的另一个目的是提供一种适用于治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的组合物，其包含可以感染和杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌的噬菌体Esc-COP-1作为活性成分，以及使用所述组合物治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的方法。本专利技术的另一个目的是提供一种用于使用所述组合物预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的消毒剂。本专利技术的另一个目的是提供一种用于使用所述组合物预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的饮用水添加剂。本专利技术的另一个目的是提供一种通过使用所述组合物预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌的感染而对养殖业有效的饲料添加剂。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种从自然界分离出来的并可以特异性地杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌的肌尾噬菌体科噬菌体Esc-COP-1，其具有由SEQIDNO：1的核苷酸序列表示的基因组(登记号：KCTC12662BP)，以及使用包含噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的方法。噬菌体Esc-COP-1由本专利技术人分离，然后于2014年8月21日保藏于韩国生物科学和生物工艺学研究院韩国典型培养物保藏中心(登记号：KCTC12662BP)。本专利技术还提供一种适用于预防或治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的消毒剂、饮用水添加剂和饲料添加剂，其包含噬菌体Esc-COP-1作为活性成分。由于本专利技术的组合物中包含的噬菌体Esc-COP-1有效地杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌，因此被认为对预防或治疗由产志贺毒素F18型大肠杆菌引起的大肠杆菌腹泻(感染)是有效的。因此，本专利技术的组合物可用于预防和治疗由产志贺毒素F18型大肠杆菌引起的大肠杆菌腹泻。在本说明书中，大肠杆菌腹泻包括伴随发烧，腹泻等的大肠杆菌感染引起的症状。在本说明书中，术语“治疗(treatment)”或“治疗(treat)”表示(i)抑制由产志贺毒素F18型大肠杆菌引起的腹泻；和(ii)缓解由产志贺毒素F18型大肠杆菌引起的腹泻。在本说明书中，术语“分离(isolation)”或“分离的(isolated)”表示通过使用不同的实验技术分离噬菌体的所有操作，和确保能够区分该噬菌体与其他噬菌体的特征的操作，还包括通过生物工程技术增殖噬菌体使其有用的操作。包含在本专利技术组合物中的药学上可接受的载体是通常用于制备药物制剂的药物载体，其实例为乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油，但并不限于此。除了上述成分之外，本专利技术的组合物还可以包括润滑剂、润湿剂、甜味剂、香料、乳化剂、悬浮剂和防腐剂。在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从自然界分离并能够特异性地杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑COP‑1，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12662BP）。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.30 KR 10-2014-01929831.一种从自然界分离并能够特异性地杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌的肌尾噬菌体科噬菌体Esc-COP-1，其具有由SEQIDNO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC12662BP）。2.一种用于预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的组合物，其包含权利要求1所述的噬菌体Esc-COP-1作为活性成分。3.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹成俊，姜尚铉，全秀娟，白亨琭，孙志洙，朴硕晃，金炳局，
申请(专利权)人：尹特荣生物科技株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国;KR