新城疫病毒、新城疫灭活疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开了新城疫病毒、新城疫灭活疫苗及其制备方法。其中，新城疫病毒保藏号CGMCC No.7805，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，该新城疫病毒具有较强的毒力，免疫原性好，交叉保护力强，毒价较高，利用该新城疫病毒制备的疫苗安全性高，免疫原性好。

Newcastle disease virus, Newcastle disease inactivated vaccine and preparation method thereof

The invention discloses a Newcastle disease virus and a Newcastle disease inactivated vaccine and a preparation method thereof. Among them, Newcastle disease virus accession No. CGMCC No.7805, preserved in general microbial center Chinese microbe preservation management committee, the Newcastle disease virus with strong virulence, immunogenicity and cross protection ability, drug price higher, use safety of the Newcastle disease virus vaccine preparation, good immunogenicity.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及新城疫病毒、新城疫灭活疫苗及其制备方法。
技术介绍
鸡新城疫病毒，是由新城疫病毒（NewcastleDisease，ND)引起的严重危害养禽业的高度接触性传染病。新城疫病毒属于副粘病毒科，禽腮腺炎病毒属的禽副粘病毒I型。血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）是病毒的两种主要保护性抗原。鸡新城疫病，1926年首先发现于印度尼西亚，不久又在英国新城发现，之后世界各国均有流行记载。有强毒株和弱毒株两类，病毒分为强毒力型、中毒力型和低毒力型。家禽最易感，雏禽比成年禽类易感性更强。死亡率高，对养鸡业危害严重。尚无有效治疗药物，只能依靠严格消毒、隔离，活疫苗和灭活疫苗的协同使用预防接种。基于现有疫苗质量问题、免疫接种方式方法、免疫程序、鸡场饲养管理水平、鸡群抗体水平良莠不齐的现状，使新城疫病免疫失败屡见不鲜。为解决这一难题，有赖于对本地区流行的毒株的流行特点、变异特点进行研究以及筛选分离出合适的优势疫苗毒株，以使新城疫的防控更具有针对性和有效性。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种新城疫病毒、新城疫灭活疫苗及其制备方法。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种新城疫病毒，该新城疫病毒保藏编号CGMCCNo.7805，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，根据本专利技术实施例，所述的新城疫病毒是从经过正常免疫新城疫灭活疫苗的发病鸡群分离得到，其毒价HA效价高于1:256，因此，所述的新城疫病毒株毒力高，具有良好的免疫原性，可作为灭活疫苗生产毒株及检验毒种。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了上述新城疫病毒在制备新城疫灭活疫苗中的用途，在本专利技术一个实施例中，根据新城疫病毒交叉免疫保护试验证明，所述的新城疫病毒具有很好的交叉免疫保护作用。因此利用该新城疫病毒生产新城疫灭活疫苗，可以有效提高新城疫灭活疫苗的免疫原性，从而能够抵抗新城疫病毒强毒以及其它新城疫强毒株的攻击。在本专利技术第三方面，本专利技术提出了一种新城疫灭活疫苗，根据本专利技术实施例，该新城疫灭活疫苗包括灭活的新城疫病毒。从而有效提高新城疫灭活疫苗的免疫原性，进一步提高新城疫灭活疫苗安全性及免疫原性。在本专利技术第四方面，本专利技术提出了一种制备新城疫灭活疫苗的方法，根据本专利技术实施例，该方法包括：对上述新城疫病毒进行灭活，以便获得经过灭活的新城疫病毒；利用所述经过灭活的新城疫病毒制备水相；以及将所述水相与油相进行混合乳化，以便获得所述新城疫灭活疫苗。由此，可以有效提高新城疫灭活疫苗的免疫原性，从而进一步提高新城疫灭活疫苗安全性及免疫原性。根据本专利技术一个实施例，本专利技术上述实施例的制备新城疫灭活疫苗的方法还包括如下附加技术特征：根据本专利技术实施例，在对所述新城疫病毒进行灭活之前，包括按照下列步骤获得新城疫病毒培养液：将所述新城疫病毒接种非免疫鸡胚中，并在35.5～37.5℃下进行培养，收集所获得的鸡胚尿囊液；分离所述鸡胚尿囊液，以便获得所述新城疫病毒培养液。根据本专利技术一个实施例，对所述新城疫病毒进行灭活包括：在37℃下，利用终浓度为0.2%的甲醛对新城疫病毒培养液进行灭活处理16～36小时；以便获得含有灭活新城疫病毒的溶液。根据本专利技术一个实施例，所述制备水相包括：将含有灭活新城疫病毒的溶液与吐温-80按照96：4的体积比例进行混合，以便得到所述水相，其中，所述吐温-80的终浓度为4%。根据本专利技术一个实施例，所述制备油相包括：将注射用白油MARCOL52、司本-80以及硬脂酸铝按照94：6：2的质量比进行混合，以便得到所述油相。由此，提高新城疫灭活疫苗的免疫原性，从而进一步提高新城疫灭活疫苗安全性及免疫原性。根据本专利技术一个实施例，将所述水相与油相混合包括：将所述水相和油相按照体积比为2：3～2：4进行混合乳化搅拌，在搅拌终止前加入终浓度为0.01%的硫柳汞以便获得所述新城疫灭活疫苗。由此可以使得由此可以防止腐败，延长疫苗的保存期，提高新城疫灭活疫苗的稳定性和免疫原性。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1是根据本专利技术一个实施例的新城疫灭活疫苗的制备方法技术路线图。具体实施方式本专利技术是基于专利技术人的下列发现而完成的：专利技术人分离了一株新城疫病毒，该病毒在经过灭活后可以用作制备新城疫灭活疫苗，用于防止和抵抗新城疫病毒以及其它新城疫强毒株的攻击。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种新城疫病毒，根据本专利技术实施例，该新城疫病毒保藏编号CGMCC：7805，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，根据本专利技术实施例，新城疫病毒是从经过正常新城疫灭活疫苗免疫的发病鸡群分离得到，其效价HA高于1:256，因此，分离得到的新城疫病毒株毒力高，具有良好的免疫原性，可作为灭活疫苗生产毒株及检验毒种，根据本专利技术一个实施例，新城疫病毒交叉免疫保护试验证明，该新城疫病毒具有很好的交叉免疫保护作用。因此可以利用该新城疫病毒生产新城疫灭活疫苗，有效提高新城疫灭活疫苗的免疫原性，从而进一步提高新城疫灭活疫苗安全性及免疫原性。本专利技术的新城疫病毒具有良好的特异性和免疫原性，鸡胚尿囊液凝集红细胞的作用不能被抗EDS76阳性血清抑制、不能被抗H5、H7、H9亚型禽流感病毒阳性血清所抑制，而能被新城疫阳性血清抑制。免疫雏鸡能产生新城疫特异的HI抗体。用新城疫特异抗血清中和后接种鸡胚，鸡胚均不死亡，而未中和的对照接种胚都死亡，这进一步说明了本专利技术毒株的特异性。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了上述新城疫病毒在制备新城疫灭活疫苗中的用途，在本专利技术一个实施例中，根据新城疫病毒交叉免疫保护试验证明，该新城疫病毒具有很好的交叉免疫保护作用。因此利用该新城疫病毒生产新城疫灭活疫苗，可以有效提高新城疫灭活疫苗的免疫原性，从而进一步提高新城疫灭活疫苗免疫原性和免疫效果。在本专利技术的第三方面，本专利技术提出了一种新城疫灭活疫苗，根据本专利技术实施例，该新城疫灭活疫苗包括灭活的新城疫病毒。根据本专利技术实施例，该新城疫灭活疫苗的免疫持续期至少可以维持4个月。根据本专利技术实施例，该新城疫灭活疫苗可在2～8℃下保存12个月，因此该疫苗具有良好的稳定性。本专利技术的新城疫灭活疫苗，免疫原性好，免疫周期长，生产成本低，工艺合理，具有极广的应用性。根据本专利技术实施例，上述新城疫灭活疫苗是被灭活的，可以采用的灭活剂种类并不受特别限制，只要可以有效破坏新城疫病毒的核酸结构以及使蛋白质变性即可，但不破坏新城疫病毒的抗原性及血凝性。根据本专利技术一个实施例，所采用的灭活剂为甲醛，甲醛可以有效破坏新城疫病毒的DNA结构，进而达到灭活新城疫病毒的目的。根据本专利技术实施例，所采用的灭活剂甲醛终浓度并不受特别限制，只要能够有效灭活新城疫病毒即可。根据本专利技术一个实施例，所采用的甲醛的终浓度为0.2%。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新城疫病毒，其以保藏号CGMCC No.7805，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

【技术特征摘要】
2013.07.19 CN 201310305540.61.一种新城疫病毒，其以保藏号CGMCCNo.7805，保藏于中国微生物菌种保藏管理
委员会普通微生物中心。
2.权利要求1所述的新城疫病毒在制备新城疫灭活疫苗中的用途。
3.一种新城疫灭活疫苗，其特征在于，包含：
灭活的权利要求1所述的新城疫病毒。
4.根据权利要求3所述的新城疫灭活疫苗，其特征在于，所述新城疫病毒是被甲醛灭
活的。
5.一种制备新城疫灭活疫苗的方法，其特征在于，包括：
对权利要求1所述的新城疫病毒进行灭活，以便获得经过灭活的新城疫病毒；
利用所述经过灭活的新城疫病毒制备水相；以及
将所述水相与油相进行混合乳化，以便获得所述新城疫灭活疫苗。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在对所述新城疫病毒进行灭活之前，包
括按照下列步骤获得新城疫病毒培养液：
将所述新城疫病毒接种于非免疫鸡胚中，并在35...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄华，张希娟，刘延亭，刘俊生，郑杰，贺云霞，邓秋红，
申请(专利权)人：北京中联康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11