特异工程噬菌体检测大肠杆菌O157的方法技术

技术编号:11382264 阅读:168 留言:0更新日期:2015-05-01 05:44
本发明专利技术公开了特异工程噬菌体检测大肠杆菌O157的方法,采用一种用于同源重组噬菌体JL1的质粒,该质粒是由下述方法制备的:以噬菌体JL1基因组DNA为模板进行PCR扩增获得其碱基序列如序列表1所示的噬菌体JL1衣壳蛋白基因;将衣壳蛋白基因插入pMD18-T载体中;将插入了衣壳蛋白基因的pMD18-T载体和序列表2所示的荧光蛋白基因,用BssSI酶切后,连接,得pMD18-T-衣壳蛋白基因-绿色荧光蛋白基因-衣壳蛋白基因质粒。同源重组噬菌体JL1,用筛选同源重组成功的噬菌体,检出大肠杆菌O157特异性强,检出限可达104CFU/mL。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属生物
,具体涉及一种用于检测大肠杆菌O157的特异工程噬菌体及检测大肠杆菌O157的方法。
技术介绍
大肠杆菌O157是肠出血性大肠杆菌最主要的一种血清型。大肠杆菌O157进入肠道大量繁殖后产生志贺样毒素,损伤肠道表皮毛细血管,进而引起纤维蛋白在多种器官内沉着,引起出血性肠炎,最终可能发展为血小板减少和急性肾衰竭。大肠杆菌是重要的食源性病原菌,其中大肠杆菌O157是致病性最强的一种血清型。全世界每年都有因食用被大肠杆菌O157污染的食物而致病甚至死亡的报道,对人们的生命和健康造成极大的威胁。人对大肠杆菌O157的感染剂量很低,只需要10个活菌就可致病,对于免疫力低下的老人和小孩甚至更低。噬菌体是一种细菌病毒,是世界上数量最庞大的非细胞生命,有细菌的地方就会有相应噬菌体存在。噬菌体鉴定细菌的传统方法就是噬菌体分型。噬菌体与宿主之间特异性的相互作用是噬菌体分型的基础,能用不同类型的噬菌体识别未知的细菌。在一个典型的噬菌体分型测试中,各种类型宿主谱已知的噬菌体分别用来感染细菌样品。如果这种细菌在噬菌体的宿主谱范围内,细菌将会被噬菌体侵染,本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于同源重组噬菌体JL1的质粒,它是由下述方法制备的:1)用引物:P1:gcggggttaaagcggaaagtcaatP2:tcaacgcggtcaatagcac以噬菌体JL1基因组DNA为模板进行PCR扩增获得其碱基序列如序列表1所示的噬菌体JL1衣壳蛋白基因;2)将衣壳蛋白基因插入pMD18‑T载体中;3)将插入了衣壳蛋白基因的pMD18‑T载体和序列表2所示的荧光蛋白基因,用BssSI酶切后,连接,得pMD18‑T‑衣壳蛋白基因‑绿色荧光蛋白基因‑衣壳蛋白基因质粒。

【技术特征摘要】
1.一种用于同源重组噬菌体JL1的质粒,它是由下述方法制备的:
1)用引物:
P1:gcggggttaaagcggaaagtcaat
P2:tcaacgcggtcaatagcac
以噬菌体JL1基因组DNA为模板进行PCR扩增获得其碱基序列如序列表1所示的噬菌体JL1衣壳蛋白基因;
2)将衣壳蛋白基因插入pMD18-T载体中;
3)将插入了衣壳蛋白基因的pMD18-T载体和序列表2所示的荧光蛋白基因,用BssSI酶切后,连接,得pMD18-T-衣壳蛋白基因-绿色荧光蛋白基因-衣壳蛋白基因质粒。
2.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘金华史艳宇薜力刚孟日增卢春梅刘韬
申请(专利权)人:吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心
类型:发明
国别省市:吉林;22

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