角膜模型低温保存用固体培养基及制备方法和使用方法技术

本发明专利技术公开了一种角膜模型低温保存用固体培养基及制备方法和使用方法，所述固体培养基由基础培养基和琼脂糖水溶液按照1:1的体积比混合均匀后凝固制成；所述琼脂糖水溶液的质量浓度为0.5%～5%；所述基础培养基以DMEM培养液和F12培养液的混合溶液为基础液，添加胎牛血清、维甲酸、人表皮生长因子、胰岛素、氢化可的松、腺嘌呤、三碘甲状腺氨酸、谷氨酰胺和低温保护剂；所述低温保护剂为HEPES、蔗糖、甘氨酸、丙氨酸、腺苷、维生素E、维生素C、透明质酸和硫酸软骨素的混合物。本发明专利技术的固体培养基具有减少组织细胞低温缺氧损伤的优点，能够有效保证角膜模型测试结果的准确性，同时方便操作及长途运输。

【技术实现步骤摘要】
角膜模型低温保存用固体培养基及制备方法和使用方法
本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种角膜模型低温保存用固体培养基及制备方法和使用方法。
技术介绍
随着体外器官培养技术的发展，基于体外细胞培养构建的3D重组角膜上皮模型，在眼刺激风险评价领域表现出特有的趋势。体外构建的3D角膜上皮模型类似于人体角膜上皮的细胞三维结构，不仅可以更为真实的反映人体对化学物的响应，准确给出化学物刺激性的预测，对于化合物筛选的种类也具有更宽的应用范畴，除了不同功效目的的剂型开发，也包括化妆品具体成分的危害评价。经济合作与发展组织（OECD）已通过角膜模型EpiOcular的验证和相应的测试法案。由于体外3D角膜模型的自身特点，要求能够在体外保持其结构和活性，从而确保测试结果的准确性，因此模型的应用受到其保存运输条件的制约，同时还应最大限度地排除外来化学物的影响。因此开发一种适合体外重建3D角膜模型保存运输的培养基意义重大。目前临床上角膜保存方法多样，包括短期保存、中期保存、中长期保存、长期保存、非活性保存等。其中，短期保存法即湿房保存，是将全眼球消毒处理后在湿房内4℃保存，仍是许多眼库运用最多的角膜短本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种角膜模型低温保存用固体培养基，其特征在于，所述固体培养基由基础培养基和琼脂糖水溶液按照1:1的体积比混合均匀后凝固制成；所述琼脂糖水溶液的质量浓度为0.5%～5%；所述基础培养基以DMEM培养液和F12培养液的混合溶液为基础液，添加胎牛血清、维甲酸、人表皮生长因子、胰岛素、氢化可的松、腺嘌呤、三碘甲状腺氨酸、谷氨酰胺和低温保护剂；所述DMEM培养液和F12培养液的混合溶液中DMEM培养液和F12培养液的体积比为3:（1～9），所述基础培养基中胎牛血清的体积百分含量为5%～20%，维甲酸的浓度为4μg/mL～10μg/mL，人表皮生长因子的浓度为0.1ng/mL～10.0ng/mL，胰岛素的...

【技术特征摘要】
1.一种角膜模型低温保存用固体培养基，其特征在于，所述固体培养基由基础培养基和琼脂糖水溶液按照1:1的体积比混合均匀后凝固制成；所述琼脂糖水溶液的质量浓度为0.5%～5%；所述基础培养基以DMEM培养液和F12培养液的混合溶液为基础液，添加胎牛血清、维甲酸、人表皮生长因子、胰岛素、氢化可的松、腺嘌呤、三碘甲状腺氨酸、谷氨酰胺和低温保护剂；所述DMEM培养液和F12培养液的混合溶液中DMEM培养液和F12培养液的体积比为3:（1～9），所述基础培养基中胎牛血清的体积百分含量为5%～20%，维甲酸的浓度为4μg/mL～10μg/mL，人表皮生长因子的浓度为0.1ng/mL～10.0ng/mL，胰岛素的浓度为5.0ng/mL～50.0ng/mL，氢化可的松的浓度为0.1μg/mL～10.0μg/mL，腺嘌呤的浓度为5.0μg/mL～50.0μg/mL，三碘甲状腺氨酸的浓度为0.1μg/mL～10.0μg/mL，谷氨酰胺的浓度为0.2g/L～20.0g/L；所述低温保护剂为HEPES、蔗糖、甘氨酸、丙氨酸、腺苷、维生素E、维生素C、透明质酸和硫酸软骨素的混合物，基础培养基中HEPES的浓度为1mmol/L～100mmol/L，蔗糖的浓度为0.1mmol/L～50mmol/L，甘氨酸的浓度为0.1mmol/L～100mmol/L，丙氨酸的浓度为0.1mmol/L～100mmol/L，腺苷的浓度为1mmol/L～200mmo...

【专利技术属性】
技术研发人员：何欣，李潇，卢永波，
申请(专利权)人：广东博溪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44