一种检测水果中5种萘衍生物的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测水果中5种萘衍生物的方法,本方法包括：标准溶液的配制、样品提取、样品净化和超高效液相色谱测定等四个步骤，本方法以乙腈为样品提取液；NH2固相萃取小柱净化，含1％‑2％甲酸的二氯甲烷‑乙腈(90:10‑95:5，V/V)为淋洗液；用1.7μm，2.1×100mm C18色谱柱分离，0.1％(v/v)甲酸水溶液‑0.1％(v/v)甲酸乙腈溶液为流动相；于超高效液相色谱荧光检测器激发波长280nm，发射波长330nm下测定。本方法简便、灵敏、准确，适用于水果中NAD、NAA、2‑NOA、NPA和NAME这5种萘衍生物的同时测定。

【技术实现步骤摘要】
一种检测水果中5种萘衍生物的方法
本专利技术涉及一种检测水果中5种萘衍生物的方法,属于化学检测领域。
技术介绍
植物激素是指植物体内天然存在的对植物生长、发育有显著作用的微量有机物质，也被称为植物天然激素或植物内源激素。由于植物体内的植物激素含量甚微，如果通过从植物体内提取植物激素再应用于农业生产非常困难，成本也很高。于是，人们就用化学的方法，仿照植物激素的作用合成具有类似植物激素功能的有机化合物，这便是植物生长调节剂。植物生长调节剂又称为植物外源激素,属于农药管理范畴，每种植物生长调节剂都有特定的用途，而且应用技术要求相当严格。欧盟、美国、澳大利亚、日本等发达国家对蔬菜水果中植物激素均制定了严格的安全限量控制标准，而且对植物外源激素进行常规检测。萘衍生物1-萘乙酰胺(NAD)、1-萘乙酸(NAA)、2-萘氧乙酸(2-NOA)、萘丙酸(NPA)和萘乙酸甲酯(NAME)，属生长素类植物生长调节剂，在果树上使用能加强植株的新陈代谢和光合作用，促进细胞分裂与扩大，刺激生长，提高嫁接成活率，促进坐果和增大果粒。我国规定苹果、葡萄和荔枝中NAA最大残留限量(MRL)分别为0.1，0.1，0.05mg/kg。日本规定NAA在水果、蔬菜等产品中的最大残留限量，范围为0.03-5.0mg/kg，并且规定了NAD在苹果和梨中的限量为0.1mg/kg。欧盟规定NAD、NAA和2-NOA在浆果类水果中的最大残留限量分别为0.05，0.05和0.01mg/kg。目前关于NAA测定的报道已较多，方法主要有荧光光谱法、气相色谱法(GC)、液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)、液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)、液相色谱－串联质谱法(HPLC-MS/MS)。而国内外对NAD、2-NOA、NPA和NAME检测方面的报道都比较少，尤其是NPA和NAME鲜有人报道，还未见有同时测定1-萘乙酰胺(NAD)、1-萘乙酸(NAA)、2-萘氧乙酸(2-NOA)、萘丙酸(NPA)和萘乙酸甲酯(NAME)5种萘衍生物的方法报道。
技术实现思路
本专利技术为了解决上述技术问题，提供一种检测水果中5种萘衍生物的方法,通过本检测方法使1-萘乙酰胺(NAD)、1-萘乙酸(NAA)、2-萘氧乙酸(2-NOA)、萘丙酸(NPA)和萘乙酸甲酯(NAME)5种萘衍生物达到很好的分离，建立同时检测水果中5种萘衍生物的前处理方法和检测方法。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种检测水果中5种萘衍生物的方法,包括：1)标准溶液的配制1.0mg/mL标准溶液：分别称取NAD、NAA、2-NOA、NPA和NAME标准品各10.0mg，用甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，混匀后贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，分别配制成1.0mg/mL的NAD、NAA、2-NOA、NPA和NAME标准溶液；10mg/L混合标准溶液：分别移取1.0mg/mL的NAD、NAA、2-NOA、NPA和NAME标准溶液各0.1mL混合于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀后贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，配制成10mg/L混合标准溶液；混合标准工作溶液：将10mg/L混合标准溶液用含0.1％(v/v)甲酸的乙腈-水溶液(3:7，V/V)逐级稀释成0.005、0.01、0.02、0.1和1.0mg/L的混合标准工作溶液，供超高效液相色谱测定；2)样品提取称取10g粉碎好的水果样品于100mL具塞离心管中，加入20.0mL乙腈，涡旋2min，加入5g氯化钠，盖上盖子，剧烈振摇1min，4000r/min离心5min，使乙腈和水相分层；3)样品净化移取10.0mL上层乙腈溶液于100mL梨形瓶中，40℃水浴中旋转浓缩至干，加入2-5mL含1％-2％(v/v)甲酸的二氯甲烷-乙腈(90:10-95:5，V/V)淋洗液溶解残渣，移入用淋洗液活化好的NH2固相萃取小柱中，收集流出液于50mL鸡心瓶中，再用淋洗液洗涤梨形瓶2次，每次用2-5mL淋洗液，再移入上述NH2固相萃取小柱中，合并流出液，在30℃水浴中旋转浓缩至干，用1.0mL含0.1％(v/v)甲酸的乙腈-水溶液(3:7，V/V)溶解残渣，经0.22μm微孔滤膜过滤后，得样品溶液，供超高效液相色谱测定；4)超高效液相色谱测定用超高效液相色谱测定1)所得的混合标准工作溶液和3)所得的样品溶液，得到两者的色谱图，通过样品色谱图的保留时间与相应标准样品的保留时间对照定性。当样品色谱图中色谱峰保留时间与标准样品色谱图中的NAD、NAA、2-NOA、NPA和NAME这5种化合物的色谱峰保留时间的相对偏差不大于5％，则定性为检出。在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。进一步，在步骤1)中，所述甲醇的纯度为色谱纯。进一步，在步骤3)中，所述NH2固相萃取小柱用淋洗液活化的步骤为:向NH2固相萃取小柱中加入5-6mL含1％-2％(v/v)甲酸的二氯甲烷-乙腈(90:10-95:5，V/V)淋洗液，不收集。进一步，在步骤4)中，所述超高效液相色谱测定的条件为：色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18(1.7μm，2.1×100mm)；荧光检测波长：Ex(激发波长)＝280nm，Em(发射波长)＝330nm；柱温：40℃；进样量：4μL；流速0.2-0.5mL/min；流动相A为0.1％(v/v)甲酸水溶液，流动相B为0.1％(v/v)甲酸乙腈溶液，梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1，表1流动相梯度程序本专利技术建立了超高效液相色谱-荧光检测法同时测定水果中1-萘乙酰胺(NAD)、1-萘乙酸(NAA)、2-萘氧乙酸(2-NOA)、1-萘丙酸(NPA)和1-萘乙酸甲酯(NAME)这5种萘衍生物的方法。以乙腈为样品提取液；NH2固相萃取小柱净化，含1％-2％甲酸的二氯甲烷-乙腈(90:10-95:5，V/V)为淋洗液；用1.7μm，2.1×100mmC18色谱柱分离，0.1％(v/v)甲酸水溶液-0.1％(v/v)甲酸乙腈溶液为流动相；于超高效液相色谱荧光检测器激发波长280nm，发射波长330nm下测定。5种化合物在质量浓度0.005-1.0mg/L范围内，线性关系良好，相关系数(r2)≥0.99996。当样品中添加水平为0.004、0.02和0.2mg/kg时，回收率为77.6％-95.0％，相对标准偏差(RSD)为4.3％-11.2％，方法检出限为0.001-0.002mg/kg。本方法简便、灵敏、准确，适用于水果中NAD、NAA、2-NOA、NPA和NAME这5种萘衍生物的同时测定。附图说明图1为本专利技术5种萘衍生物在不同洗脱条件下的回收率图,其中，a.含1％(V/V)甲酸的二氯甲烷-乙腈(95:5，V/V)；b.含1％(V/V)甲酸的二氯甲烷-乙腈(90:10，V/V)；c.含2％(V/V)甲酸的二氯甲烷-乙腈(95:5，V/V)；d.含2％(V/V)甲酸的二氯甲烷-乙腈(90:10，V/V)。图2为本专利技术标准样品色谱图(0.02μg/mL)；图3为本专利技术草莓空白样品色谱图；图4为本专利技术草莓加标样品色谱图(0.004mg/kg)。具体实施方式以下对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。1实验部分1.1仪器与试本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测水果中5种萘衍生物的方法,其特征在于，包括：1)标准溶液的配制1.0mg/mL标准溶液：分别称取NAD、NAA、2‑NOA、NPA和NAME标准品各10.0mg，用甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，混匀后贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，分别配制成1.0mg/mL的NAD、NAA、2‑NOA、NPA和NAME标准溶液；10mg/L混合标准溶液：分别移取1.0mg/mL的NAD、NAA、2‑NOA、NPA和NAME标准溶液各0.1mL混合于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀后贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，配制成10mg/L混合标准溶液；混合标准工作溶液：将10mg/L混合标准溶液用含0.1％(v/v)甲酸的乙腈‑水溶液(3:7，V/V)逐级稀释成0.005、0.01、0.02、0.1和1.0mg/L的混合标准工作溶液，供超高效液相色谱测定；2)样品提取称取10g粉碎好的水果样品于100mL具塞离心管中，加入20.0mL乙腈，涡旋2min，加入5g氯化钠，盖上盖子，剧烈振摇1min，4000r/min离心5min，使乙腈和水相分层；3)样品净化移取10.0mL上层乙腈溶液于100mL梨形瓶中，40℃水浴中旋转浓缩至干，加入2‑5mL含1％‑2％(v/v)甲酸的二氯甲烷‑乙腈(90:10‑95:5，V/V)淋洗液溶解残渣，移入用淋洗液活化好的NH2固相萃取小柱中，收集流出液于50mL鸡心瓶中，再用淋洗液洗涤梨形瓶2次，每次用2‑5mL淋洗液，再移入上述NH2固相萃取小柱中，合并流出液，在30℃水浴中旋转浓缩至干，用1.0mL含0.1％(v/v)甲酸的乙腈‑水溶液(3:7，V/V)溶解残渣，经0.22μm微孔滤膜过滤后，得样品溶液，供超高效液相色谱测定；4)超高效液相色谱测定用超高效液相色谱测定1)所得的混合标准工作溶液和3)所得的样品溶液，得到两者的色谱图，通过样品色谱图的保留时间与相应标准样品的保留时间对照定性,当样品色谱图中色谱峰保留时间与标准样品色谱图中的NAD、NAA、2‑NOA、NPA和NAME这5种化合物的色谱峰保留时间的相对偏差不大于5％，则定性为检出。...

【技术特征摘要】
1.一种检测水果中5种萘衍生物的方法,其特征在于，包括：1)标准溶液的配制1.0mg/mL标准溶液：分别称取NAD、NAA、2-NOA、NPA和NAME标准品各10.0mg，用甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，混匀后贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，分别配制成1.0mg/mL的NAD、NAA、2-NOA、NPA和NAME标准溶液；10mg/L混合标准溶液：分别移取1.0mg/mL的NAD、NAA、2-NOA、NPA和NAME标准溶液各0.1mL混合于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀后贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，配制成10mg/L混合标准溶液；混合标准工作溶液：将10mg/L混合标准溶液用含0.1％(v/v)甲酸的乙腈-水溶液(3:7，V/V)逐级稀释成0.005、0.01、0.02、0.1和1.0mg/L的混合标准工作溶液，供超高效液相色谱测定；2)样品提取称取10g粉碎好的水果样品于100mL具塞离心管中，加入20.0mL乙腈，涡旋2min，加入5g氯化钠，盖上盖子，剧烈振摇1min，4000r/min离心5min，使乙腈和水相分层；3)样品净化移取10.0mL上层乙腈溶液于100mL梨形瓶中，40℃水浴中旋转浓缩至干，加入2-5mL含1％-2％(v/v)甲酸的二氯甲烷-乙腈(90:10-95:5，V/V)淋洗液溶解残渣，移入用淋洗液活化好的NH2固相萃取小柱中，收集流出液于50mL鸡心瓶中，再用淋洗液洗涤梨形瓶2次，每次用2-5mL淋洗液...

【专利技术属性】
技术研发人员：仲伶俐，雷绍荣，郭灵安，李曦，毛建霏，付成平，李华仙，
申请(专利权)人：四川省农业科学院分析测试中心，
类型：发明
国别省市：四川,51