一种减少以异常升高的循环中aP2为表征的临床病症的症状方法，该方法通过给予患者一种分泌的aP2的抑制剂，aP2的分泌抑制剂，或者一种血清aP2封堵剂来进行。例如，随着这种抑制剂或者药剂的给药减少葡萄糖不耐性。典型的组合物抑制aP2的抑制细胞的分泌或者结合到流通的aP2，从而减少血中或者血清中aP2的水平或者活性。
Secreted aP2 and its inhibiting method
A method to reduce the symptoms of abnormal increase of circulating aP2 for the characterization of clinical symptoms, the patients were given an inhibitor of aP2 secretion, aP2 secretion inhibitor, or a serum aP2 plugging agent to. For example, glucose intolerance is reduced with the administration of this inhibitor or agent. Typical compositions inhibit aP2 secretion by inhibiting cells or binding to circulating aP2, thereby reducing the level or activity of aP2 in blood or serum.
【技术实现步骤摘要】
分泌的aP2及其抑制方法本申请为国际申请PCT/US2010/026305进入中国国家阶段的中国专利申请(申请号为201080019800.8，申请日为2010年3月5日，专利技术名称为“分泌的aP2及其抑制方法”)的分案申请。政府权益声明本专利技术是在政府的支持下完成的，国立卫生研究院授权号为DK064360何DK071507。政府具有本专利技术的某些权利。
技术介绍
代谢综合症或者代谢疾病是一种术语，它定义为新陈代谢的危险因素的集合，这些危险因素集中到单一个体中并且诱致糖尿病和心血管疾病。代谢综合症的主要特征包括胰岛素抗性，高血压(高血压症)，胆固醇异常，和增加的结块风险。胰岛素抑制性指的是细胞对胰岛素促进葡萄糖从血运输进肌肉及其他组织中的作用的响应能力的减少。带有这种危险因素簇的患者几乎经常是超重的或者肥胖的。专利技术概述本专利技术基于一种发现，即血清aP2调节全身性胰岛素敏感性和葡萄糖代谢。因此,一种减少代谢疾病症状的方法是通过给予患者一种组合物，这种组合物结合循环中的aP2并阻遏循环中的aP2(例如，血或血清aP2)，所述方法通过给予一种结合到并减少循环中aP2蛋白质的量的组合物，或通过给予一种由细胞分泌的aP2的抑制剂来进行。例如，葡萄糖不耐性要减少这种抑制剂接下来的给药。典型的组合物包括抗体或它们的特定的抗原片段，结合到aP2的那些小分子，以及那些通过一种脂肪细胞或巨噬细胞抑制aP2的分泌的组合物。阻止或减少代谢疾病的严重程度的一种方法涉及给予患者一种减少血清aP2浓度的组合物。在某些实施方案中，本方法包含鉴别与正常的、健康的、相应的年龄、相应的性别对照的患者(或患者库)相比较患者有血清aP2水平升高的特征的患者。例如，一种对照患者是瘦的并且特征为血清aP2水平20μg/L，一种需要介入治疗的患者的特点在于aP2的水平是升高的。待治疗的患者是超重的，肥胖的，和/或包含血清aP2水平大于20μg/L(例如，血清中25，28，30，32，35,40或更多μg/LaP2)。患者是随意地确定具有正常重量(BMI18.5-24.9)，超重的(BMI25-29.9)，或肥胖的(BMI30或更大)。在此描述的每一个治疗的方法中，与治疗前血清aP2浓度相比血清aP2浓度减少了至少10％，25％，50％，75％，2倍，5倍，10倍或更多。在一个实例中，减少血清aP2浓度的组合物是一种aP2特异性抗体。该抗体是一种纯化了的单克隆的或多克隆的抗体。例如，结合到抗体可达到的aP2的抗原表位的那些抗体，例如，图⒊中那些加亮部分。这种抗体结合到如结晶的模型(图3)所示的溶液(例如，血和血清中)中蛋白质的三维结构露出的表面上的aP2的抗原表位。一种不连续的抗原表位，它的氨基酸处于大约接近蛋白质的三维结构(折叠的)，但是当展开时距离远的位置。优选地，本抗体是一种单克隆抗体，它的结合专一性包含一种结构的抗原表位，这种抗原表位当存在于一种身体的流质例如血，血清，或血浆中的aP2分子上表面容易接近。例如，该抗原表位包含至少一种人类aP2蛋白质的下列部分的一种：SEQIDNO：4的残基1-5,残基22，残基36-37，残基46-47，残基57，残基59-60，残基78，残基80，残基89，残基97-101，残基110-112，残基122。当它们暴露于溶液中的aP2蛋白质表面上时该抗体随意地结合两个或更多抗原表位(残基或残基串)。在某些例子中，该抗体没有结合到变性的aP2或没有结合到aP2的线型的抗原表位。本专利技术不但包含一种完整的单克隆抗体和它们的用法，而且包含一种有效的免疫抗体片段，例如，Fab或(Fab)2片段；一种设计的单链Fv分子；或者一种嵌合的分子，例如，一种抗体，它包含一种抗体的结合专一性例如，鼠的起端，和另一个抗体残存的部分，例如，人类起端的。同样包括在本专利技术中的是一种鉴别aP2分泌的抑制剂的方法。为了鉴别这种化合物一种分泌的aP2细胞例如脂肪细胞或巨噬细胞与待选择的化合物接触并且检测细胞外的aP2水平。与该化合物不存在时相比在该化合物存在下细胞外aP2的减少表明该化合物抑制aP2的分泌。例如，细胞外的aP2的水平减少至少10％，25％，50％，75％，2倍，5倍，10倍或更多。aP2分泌的抑制剂的筛选在不同的脂肪细胞中进行，它在体外和体内大量地表达aP2以及在它们响应激素及其他生物刺激中大约接近脂肪组织。例如，两个步骤用于进行高通量筛选。首先，使用腺病毒调节基因传递在脂肪细胞中表达一种GFP标记的aP2。抑制剂用于在96孔板中细胞的种子并且通过测量状况良好的培养基的荧光强度来测定aP2的分泌。第二，带有标记的aP2的互补DNA和HA双重的标记在脂肪细胞中表达。抑制剂治疗后aP2的分泌是通过使用一种酶联免疫吸附系统来检测的。标记用来俘获板上的aP2并且共轭HRP的HA抗体将用于检测aP2。本方法和组合物能够有效的治疗或者减少那些以不正常升高的分泌的aP2水平为特征的临床疾病的严重程度，所述不正常升高的分泌的aP2水平例如，血或者血清中升高的aP2水平。这种情形包括代谢综合症，葡萄糖不耐性，肥胖，糖尿病，脂肪肝疾病，动脉粥样硬化，和哮喘(aP2在该病状的发生中起到直接作用的情况)。增加的血清aP2也与慢性的血液透析作用(圆二色性)，引起阻塞的睡眠呼吸暂停(一种与肥胖有关系的病症)，感染艾滋病病毒的病人中脂肪代谢障碍，和脂肪分解有关，使用在此描述的方法和组合物治疗或者减少这些情形。本方法也对治疗或者减少病理状态例如高血压，中风，和神经变性的疾病有用处，在这些疾病中aP2是间接地涉及。抑制剂用来治疗人类及其他动物,例如，猫、狗的糖尿病。例如，给予那些已经诊断有或者发展为II型糖尿病风险的患者本抑制剂。这里引用的所有出版物、美国专利和申请、基因库(Genbank)/NCBI序列号以及其他所有的参考文献通过引证在此全部并入本文。仅出于举例的目的，本专利技术包括但不限于如下技术方案：技术方案1：一种治疗或者减少aP2调节的疾病严重程度的方法，包含给予患者一种分泌的aP2抑制剂或者一种aP2分泌的抑制剂。技术方案2：根据技术方案1所述的方法，在这里所说的患者确定为是包含循环的aP2水平升高。技术方案3：根据技术方案1所述的方法，在这里所说的疾病选自由代谢综合症，肥胖，糖尿病，脂肪肝疾病，葡萄糖不耐性，动脉粥样硬化，哮喘，高血压，中风，神经变性的疾病，慢性的血液透析作用(CD)，引起阻塞的睡眠呼吸暂停，感染艾滋病病毒病人中脂肪代谢障碍，和脂解组成的组中。技术方案4：根据技术方案1所述的方法，其中，分泌的aP2抑制剂包含一种可溶解的aP2封堵剂。技术方案5：根据技术方案4所述的方法，其中，封堵剂是一种aP2特异性抗体或者它们的aP2结合片段。技术方案6：一种预防或者减少代谢疾病的严重程度的方法，包含给予患者一种减少血清aP2浓度的组合物。技术方案7：根据技术方案6所述的方法，其中，所述血清aP2浓度减少了至少10％。技术方案8：根据技术方案6所述的方法，其中，所述组合物是一种aP2特异性抗体。技术方案9：根据技术方案6所述的方法，其中，所述的组合物是一种结合到aP2的不连续的抗原表位的抗体。技术方案10：根据技术方案9所述的方法，其中，所述的抗本文档来自技高网...
【技术保护点】
aP2特异性抗体或其aP2‑结合片段在制备治疗糖尿病的药物中的用途，其中所述aP2特异性抗体结合到血或血清溶液中的aP2的三维结构上露于表面的抗原表位，以及将所述药物用于被诊断为患有II型糖尿病或者具有患II型糖尿病风险的患者。
【技术特征摘要】
2009.03.05 US 61/209,251;2010.01.28 US 61/299,1701.aP2特异性抗体或其aP2-结合片段在制备治疗糖尿病的药物中的用途，其中所述aP2特异性抗体结合到血或血清溶液中的aP2的三维结构上露于表面的抗原表位，以及将所述药物用于被诊断为患有II型糖尿病或者具有患II型糖尿病风险的患者。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述aP2特异性抗体或其aP2-结合片段是一种结合到aP2不连续的抗原表位的抗体。3.根据权利要求2所述的用途，其中所述aP2的不连续的抗原表位是溶液中aP2的三维结构上露出来的表面。4....
【专利技术属性】
技术研发人员：G·S·霍塔梅斯利吉尔，曹海明，
申请(专利权)人：哈佛学院董事会，
类型：发明
国别省市：美国,US
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