抗‑肌肉生长抑制因子抗体、包含变体FC区的多肽及使用方法技术

本公开提供抗‑肌肉生长抑制因子抗体及其制备和使用方法。还提供编码所述抗‑肌肉生长抑制因子抗体的核酸以及包含所述核酸的宿主细胞。本公开还提供含有变体Fc区的多肽及其制备和使用方法。还提供编码所述多肽的核酸以及包含所述核酸的宿主细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗-肌肉生长抑制因子抗体、包含变体FC区的多肽及使用方法
本专利技术涉及抗-肌肉生长抑制因子抗体及其使用方法。本专利技术还涉及包含变体Fc区的多肽及其使用方法。
技术介绍
肌肉生长抑制因子(myostatin)，也被称为生长分化因子-8(GDF8)，是一种分泌蛋白并且是转化生长因子-β(TGF-β)蛋白超家族的成员。该超家族的成员具有生长-调节和形态发生性质(参见，例如，NPL1，NPL2，和PTL1)。肌肉生长抑制因子主要表达在发育的和成人骨骼肌中并且作为肌肉生长的负向调节物发挥功能。肌肉生长抑制因子在成年小鼠中的系统性过表达导致肌肉消耗(参见，例如，NPL3)，同时，相反地，肌肉生长抑制因子敲除小鼠表征为骨骼肌的肥大和增生，这导致与其野生型同胞仔相比二至三倍高的肌肉量(参见，例如，NPL4)。类似于TGF-β家族的其他成员，肌肉生长抑制因子被合成为含有N-端前肽结构域和被认为是活性分子的C-端结构域的大的前体蛋白(参见，例如，NPL5；PTL2)。两个肌肉生长抑制因子前体分子经由C-端生长因子结构域中的单个二硫键共价相连。通过多步蛋白水解加工，具有活性的成熟肌肉生长抑制因子(由C-端生长因子结构域组成的二硫键键合的同源二聚体)从肌肉生长抑制因子前体释放。在肌肉生长抑制因子活化途径的第一步中，在同源二聚前体的两条链中，N-端前肽结构域和C-端生长因子结构域之间的肽键，Arg266-Asp267，被弗林型(furin-type)前蛋白转化酶切割。但是所得的三个肽(两个前肽和一个成熟肌肉生长抑制因子(即，由生长因子结构域组成的二硫键键合的同源二聚体))仍然相连，形成被称为"潜伏性肌肉生长抑制因子"的非共价无活性复合物。然后，经由前肽的降解，成熟肌肉生长抑制因子可以由潜伏性肌肉生长抑制因子释放。金属蛋白酶的骨形态发生蛋白1(BMP1)家族的成员切割前肽内的单个肽键，Arg98-Asp99，其伴随着作为同源二聚体的成熟有活性的肌肉生长抑制因子的释放(参见，例如，NPL6)。此外，通过利用酸或热处理使复合物解离，可以在体外活化潜伏性肌肉生长抑制因子(参见，例如，NPL7)。肌肉生长抑制因子发挥其作用是通过跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶杂四聚体受体家族，所述受体家族的活化增强受体磷酸转移，从而导致刺激丝氨酸/苏氨酸激酶活性。已经证明，肌肉生长抑制因子途径包括活性肌肉生长抑制因子二聚体以高的亲和力结合激活蛋白受体IIB型(ActRIIB)，后者然后募集并活化低亲和力受体激活蛋白样激酶4(ALK4)或激活蛋白样激酶5(ALK5)的磷酸转移。也已经证明，蛋白Smad2和Smad3随后被活化并且与Smad4形成复合物，所述复合物之后被转移至细胞核用于活化靶基因转录。已经证明，ActRIIB能够介导体内肌肉生长抑制因子的影响，因为小鼠中占优势的阴性形式ActRIIB的表达类似于肌肉生长抑制因子基因敲除(参见，例如，NPL8)。数种疾病或病症与肌肉消耗(即，肌肉组织损失或功能受损)相关，如肌肉营养不良(musculardystrophy，MD；包括杜氏肌营养不良(Duchennemusculardystrophy))，肌萎缩侧索硬化(amyotrophiclateralsclerosis，ALS)，肌肉萎缩，器官萎缩，虚弱，充血性阻塞性肺病(congestiveobstructivepulmonarydisease，COPD)，少肌症(sarcopenia)，和由癌症或其他疾病导致的恶病质，以及肾病，心脏衰竭或心脏病，以及肝病。患者将受益于肌肉量和/或肌肉力量的增加；然而，目前可用于这些病症的治疗是有限的。因此，由于其作为骨骼肌生长的负向调节物的角色，肌肉生长抑制因子成为适用于此种疾病或病症的治疗性或预防性干预或适用于监测此种疾病或病症的进展的靶标。特别地，抑制肌肉生长抑制因子活性的药剂可以是治疗有益的。抑制肌肉生长抑制因子表达导致肌肉肥大和增生(NPL9)。在损伤后，肌肉生长抑制因子负向调节肌肉再生并且无肌肉生长抑制因子小鼠中肌肉生长抑制因子的缺乏导致加速的肌肉再生(参见，例如，NPL10)。在例如PTL3，PTL4，PTL5，PTL6，PTL7，PTL8，PTL9和PTL10中所述的抗-肌肉生长抑制因子(GDF8)抗体已被证明在体外和在体内结合肌肉生长抑制因子并且抑制肌肉生长抑制因子活性，包括与骨骼肌量的负向调节相关的肌肉生长抑制因子活性。肌肉生长抑制因子中和抗体增加野生型小鼠(参见，例如，NPL11)以及作为肌营养不良模型的mdx小鼠(参见，例如，NPL12；NPL13)的体重，骨骼肌量，和骨骼肌中的肌肉尺寸和力量。然而，这些现有技术抗体都是对成熟肌肉生长抑制因子具有特异性，而对潜伏性肌肉生长抑制因子没有特异性，并且记述的用于抑制肌肉生长抑制因子活性的策略已经利用了可以结合并中和成熟肌肉生长抑制因子的抗体。抗体因其在血液中的高稳定性以及较少的副作用而作为药物得到关注(参见，例如，NPL14和NPL15)。目前市售的几乎所有治疗性抗体都是人IgG1亚类的抗体。IgG类抗体的已知功能之一是抗体依赖性细胞介导性细胞毒性(下文中称为ADCC活性)(参见，例如，NPL16)。对于显示ADCC活性的抗体，抗体Fc区必须结合Fcγ受体(下文中称为FcγR)，所述受体是存在于效应器细胞如杀伤细胞，自然杀伤细胞，和激活的巨噬细胞的表面上的抗体结合受体。在人中，FcγRIa(CD64A)，FcγRIIa(CD32A)，FcγRIIb(CD32B)，FcγRIIIa(CD16A)和FcγRIIIb(CD16B)同种型已作为FcγR蛋白家族被报道，并且也已经报道了相应的同种异型(参见，例如，NPL17)。FcγRIa，FcγRIIa和FcγRIIIa被称为激活性FcγR，因为其具有免疫学活性功能，而FcγRIIb被称为抑制性FcγR，因为其具有免疫抑制功能(参见，例如，NPL18)。在Fc区和FcγR之间的结合中，抗体铰链区和CH2结构域中的若干氨基酸残基，以及与CH2结构域结合的连接至位置297(EU编号)处的Asn的糖链已被证明是重要的(参见，例如，NPL19，NPL20和NPL21])。目前已经研究了多种具有FcγR结合性质的变体，主要是在这些位点引入有突变的抗体；并且已经获得了对激活性FcγR具有更高结合活性的Fc区变体(参见，例如，PTL11，PTL12，PTL13和PTL14)。当激活性FcγR与免疫复合物交联时，其磷酸化胞内结构域或FcR共有γ-链(相互作用配偶体)中包含的免疫受体酪氨酸系激活基序(ITAM)，激活信号转导物SYK，并且通过启动活化信号级联而触发炎性免疫应答(参见，例如，NPL22)。FcγRIIb是唯一在B细胞上表达的FcγR(参见，例如，NPL23)。据报道，抗体Fc区与FcγRIIb的相互作用抑制B细胞的初级免疫应答(参见，例如，NPL24)。此外，据报道，当B细胞上的FcγRIIb和B细胞受体(BCR)经由血液中的免疫复合物交联时，B细胞活化和B细胞的抗体生产被抑制(参见，例如，NPL25)。在该由BCR和FcγRIIb介导的免疫抑制信号转导中，包含在FcγRIIb的胞内结构域中的免疫受体酪氨酸系抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的抗体，所述分离的抗体结合潜伏性肌肉生长抑制因子，其中所述抗体抑制肌肉生长抑制因子的活化。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.19 JP 2014-2576361.分离的抗体，所述分离的抗体结合潜伏性肌肉生长抑制因子，其中所述抗体抑制肌肉生长抑制因子的活化。2.权利要求1的抗体，其中所述抗体：(a)阻断成熟肌肉生长抑制因子从潜伏性肌肉生长抑制因子的释放；(b)阻断成熟肌肉生长抑制因子的蛋白水解释放；(c)阻断成熟肌肉生长抑制因子的自发释放；或(d)不结合成熟肌肉生长抑制因子；或结合由肌肉生长抑制因子前肽(SEQIDNO:78)的氨基酸21-100组成的片段内的表位。3.权利要求1或2的抗体，其中所述抗体与包含表2a、11a或13中所述的VH和VL对的抗体竞争结合潜伏性肌肉生长抑制因子，或与包含表2a、11a或13中所述的VH和VL对的抗体结合相同的表位。4.权利要求1至3中任一项的抗体，其在中性pH结合潜伏性肌肉生长抑制因子的亲和力比在酸性pH更高，或其在pH7.4结合潜伏性肌肉生长抑制因子的亲和力比在pH5.8更高。5.权利要求1至4中任一项的抗体，其是(a)单克隆抗体，(b)人、人源化或嵌合抗体；(c)全长IgG抗体或(d)结合肌肉生长抑制因子的抗体片段。6.权利要求1至5中任一项的抗体，其中所述抗体包含：(a)(i)HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列GVPAX1SX2GGDX3，其中X1是Y或H，X2是T或H，X3是L或K(SEQIDNO:128)，(ii)HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列AGGYGGGX1YA，其中X1是L或R(SEQIDNO:131)，和(iii)HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列IISX1AGX2X3YX4X5X6WAKX7，其中X1是Y或H，X2是S或K，X3是T、M或K，X4是Y或K，X5是A、M或E，X6是S或E，X7是G或K(SEQIDNO:127)；(b)(i)HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列X1X2DIS，其中X1是S或H，X2是Y、T、D或E(SEQIDNO:126)，(ii)HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列IISX1AGX2X3YX4X5X6WAKX7，其中X1是Y或H，X2是S或K，X3是T、M或K，X4是Y或K，X5是A、M或E，X6是S或E，X7是G或K(SEQIDNO:127)，和(iii)HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列GVPAX1SX2GGDX3，其中X1是Y或H，X2是T或H，X3是L或K(SEQIDNO:128)；(c)(i)HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列X1X2DIS，其中X1是S或H，X2是Y、T、D或E(SEQIDNO:126)，(ii)HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列IISX1AGX2X3YX4X5X6WAKX7，其中X1是Y或H，X2是S或K，X3是T、M或K，X4是Y或K，X5是A、M或E，X6是S或E，X7是G或K(SEQIDNO:127)，(iii)HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列GVPAX1SX2GGDX3，其中X1是Y或H，X2是T或H，X3是L或K(SEQIDNO:128)，(iv)HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列X1X2SQX3VX4X5X6NWLS，其中X1是Q或T，X2是S或T，X3是S或E，X4是Y或F，X5是D或H，X6是N、D、A或E(SEQIDNO:129)；(v)HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列WAX1TLAX2，其中X1是S或E，X2是S、Y、F或W(SEQIDNO:130)；和(vi)HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列AGGYGGGX1YA，其中X1是L或R(SEQIDNO:131)；或(d)(i)HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列X1X2SQX3VX4X5X6NWLS，其中X1是Q或T，X2是S或T，X3是S或E，X4是Y或F，X5是D或H，X6是N、D、A或E(SEQIDNO:129)；(ii)HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列WAX1TLAX2，其中X1是S或E，X2是S、Y、F或W(SEQIDNO:130)；和(iii)HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列AGGYGGGX1YA，其中X1是L或R(SEQIDNO:131)。7.权利要求6(b)的抗体，其还包含：重链可变结构域框架FR1，所述FR1包含SEQIDNO:132-134中任一的氨基酸序列；FR2，所述FR2包含SEQIDNO:135-136中任一的氨基酸序列；FR3，所述FR3包含SEQIDNO:137的氨基酸序列；和FR4，所述FR4包含SEQIDNO:138的氨基酸序列。8.权利要求6(d)的抗体，其还包含：轻链可变结构域框架FR1，所述FR1包含SEQIDNO:139的氨基酸序列；FR2，所述FR2包含SEQIDNO:140-141中任一的氨基酸序列；FR3，所述FR3包含SEQIDNO:142-143中任一的氨基酸序列；和FR4，所述FR4包含SEQIDNO:144的氨基酸序列。9.权利要求1至5中任一项的抗体，其包含(a)与SEQIDNO:13、16-30、32-34和86-95中任一的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQIDNO:15、31、35-38和96-99中任一的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或(c)SEQIDNO:13、16-30、32-34和86-95中任一的VH序列，和SEQIDNO:15、31、35-38和96-99中任一的VL序列。10.分离的核酸，其编码权利要求1至9中任一项的抗体。11.宿主细胞，其包含权利要求10的核酸。12.制备抗-肌肉生长抑制因子抗体的方法，所述方法包括：(a)培养权利要求11的宿主细胞从而制备所述抗体；或(b)针对多肽免疫动物，其中所述多肽包含对应于肌肉生长抑制因子前肽(SEQIDNO:78)的位置21至100处的氨基酸的区域。13.药物制剂，所述药物制剂包含权利要求1至9中任一项的抗体和药用载体。14.多肽，所述多肽包含变体Fc区，所述变体Fc区包含在亲本Fc区中的至少一个氨基酸改变，其中[亲本Fc区对猴FcγRIIb的KD值]/[变体Fc区对猴FcγRIIb的KD值]之比是2.0或更大，并且[亲本Fc区对猴FcγRIIIa的KD值]/[变体Fc区对猴FcγRIIIa的KD...

【专利技术属性】
技术研发人员：类家庆直，仓持太一，村松弘康，植山笃则，井川智之，坚田仁，堀裕次，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP