特发性肺纤维化的治疗方法技术

本发明专利技术属于用于医学治疗、特别是特发性肺纤维化(IPF)的治疗的方法和制剂的领域。本发明专利技术提供了这些方法，在所述方法中将与所选瓜氨酸化表位反应的抗体或其片段用于IPF的治疗。发现针对位于组蛋白多肽H2A和H4的氨基端处的瓜氨酸化表位的抗体是特别有用的。因此，本发明专利技术涉及与脱亚胺基组蛋白H2A或H4的N‑端上的瓜氨酸化表位特异性反应的抗体，其用于特发性肺纤维化的预防或治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特发性肺纤维化的治疗方法
本专利技术属于用于医学治疗、特别是特发性肺纤维化(IPF)的治疗的方法和制剂的领域。本专利技术提供了这些方法，在所述方法中将与所选瓜氨酸化表位反应的抗体或其片段用于IPF的治疗。发现针对位于组蛋白多肽H2A和H4的氨基端处的瓜氨酸化表位的抗体是特别有用的。
技术介绍
特发性肺纤维化(IPF)是一种病因学未知的复杂的慢性纤维增殖性肺病，具有越来越高的发病率。所述疾病的特征在于间质内细胞外基质的逐渐积累。它是渐进性且不可逆的疾病，估计的存活时间中值仅为36个月。在历史上，已提出将皮质类固醇(例如泼尼松龙)与免疫抑制剂(例如硫唑嘌呤)和/或N-乙酰半胱氨酸的组合作为用于IPF的合理但未被证实的治疗策略。另一种在日本、欧洲、印度和加拿大已被批准用于IPF治疗的药物是吡非尼酮。吡非尼酮是一种口服给药的吡啶，其在肺纤维化的实验模型中具有组合的消炎、抗氧化和抗纤维化作用，尽管确切的作用机制尚不了解。它是已观察到无进展存活时间延长的唯一药物。目前，没有科学证据表明当前的治疗策略可以在IPF中逆转纤维化；正在调查的疗法的现实目标是使疾病发展的速率稳定或降低。显然，迫切地需要用于IPF的更好且更有效的治疗。
技术实现思路
在本文中，我们提供了当将针对源自于脱亚胺基组蛋白H2A或H4的N-端的肽上的瓜氨酸化表位的抗体给药到需要这样的治疗的受试者时，可以阻止、改善或废除IPF的症状这一证据。通过用源自于脱亚胺基组蛋白H2A或H4的包含瓜氨酸残基的N-端肽进行免疫接种，可以实现同样的效果。专利技术详述在产生本专利技术的实验中,我们利用了公认的用于IPF的小鼠模型。在该模型中，通过如实施例1中详细描述的博来霉素的口咽滴注，在C57BL/6小鼠的肺中诱导纤维化。对照动物接受PBS的口咽滴注。与脱亚胺基组蛋白H2A或H4的N-端上的瓜氨酸化表位特异性反应的抗体被给药到博来霉素处理的动物，并显示出在治疗IPF的症状中有效。这些抗体在后文中被称为抗瓜氨酸蛋白抗体，简写为ACPA。ACPA可以以本身被专业技术人员所知的多种不同方式获得。例如，ACPA可以通过用适合的抗原例如包含脱亚胺基组蛋白H2A或H4的N-端上的瓜氨酸化表位的肽免疫实验动物来产生。这些肽的代表性实例可以包含下列氨基酸序列：SGCitGKQGGKARA(SEQIDNO：1)和SGCitGKGGKGLGKGGAKRHRKVLR(SEQIDNO：2)，表1。可以试验由此获得的抗体与所述组蛋白H2A或H4的N-端上的瓜氨酸化表位结合的特异性。有利的是，这可以通过将所述抗体与符合SEQIDNO：1或SEQIDNO：2的肽的结合同与不携带所述组蛋白H2A或H4的N-端上的瓜氨酸化表位的对照肽的结合进行比较来进行。不含所述组蛋白H2A或H4的N-端上的瓜氨酸化表位的肽的代表性实例是例如包含表1的氨基酸序列SGRGKQGGKARA(SEQIDNO：3)和SGRGKGGKGLGKGGAKRHRKVLR(SEQIDNO：4)的肽。表1：肽SEQIDNO：氨基酸序列SEQIDNO：1SGCitGKQGGKARASEQIDNO：2SGCitGKGGKGLGKGGAKRHRKVLRSEQIDNO：3SGRGKQGGKARASEQIDNO：4SGRGKGGKGLGKGGAKRHRKVLR如果抗体结合于脱亚胺基组蛋白H2A或H4的N-端上的瓜氨酸化表位，而它以较低的亲和性结合于不包含所述组蛋白H2A或H4的N-端上的瓜氨酸化表位的对照肽，则认为所述抗体与脱亚胺基组蛋白H2A或H4的N-端上的瓜氨酸化表位的结合是特异性的。在这种情形中，较低的亲和性意味着结合低至少50％，例如低75％、90％、95％或超过95％。更优选地，所述抗体与所述脱亚胺基组蛋白H2A或H4的N-端上的瓜氨酸化表位的结合可以容易地检测，而所述抗体与具有相同氨基酸序列但其中瓜氨酸残基被精氨酸残基置换的肽的结合不可检测到。已发现，本文中公开的特异反应性抗体(RhmAb2.102、RhmAb2.108、RhmAb2.109、RhmAb2.110、RhmAb2.111、RhmAb2.112、MQ22.101、MQ22.102和MQ22.101b/d)都与符合SEQIDNO：1或SEQIDNO：2的肽反应，其中它们与具有SEQIDNO：3或SEQIDNO：4的肽的结合是阴性的。这些抗体以前也已公开在WO2011/070172和WO2009/147201中。选择小鼠单克隆抗体Rmmab22.101(在本文中简写为MQ22.101)作为模型抗体，其代表了特异性结合于脱亚胺基组蛋白H2A或H4的N-端上的瓜氨酸化表位的抗体类别。MQ22.101抗体的治疗活性如下确立。博来霉素处理的小鼠接受含有1mg单克隆抗体MQ22.101或1mg从ModiQuestResearchB.V.获得的同种型匹配的对照抗体MQ20.101(目录号MQ20.101)的腹膜内注射液。在第0、2和5日将单克隆抗体给药到所述动物。从第0日起直至第14日，每隔一日评估所有动物的体重。取动物的体重减轻作为疾病严重性的度量。我们观察到，与体重没有任何减轻的PBS处理的对照小鼠相比，用博来霉素+MQ20.101处理的小鼠体重随时间逐渐减轻，在第14日体重减轻32％(图1)。在MQ22.101处理的组中，我们发现动物受到保护以对抗体重的巨大减轻，最大值为第6日的17％，随后动物的体重随时间逐渐增加(与第0日相比，第14日体重减轻10％)。在博来霉素或PBS滴注后2或3周，在异氟烷麻醉下通过颈椎脱位杀死小鼠，并收集肺和支气管肺泡灌洗(BAL)液。将肺固定，石蜡包埋，并将切片进行Masson染色，以便评估炎症/纤维化的量(图2)。我们观察到，与来自于没有任何纤维化征兆的对照小鼠(PBS处理)的肺相比，博来霉素+MQ20.101处理的小鼠在肺中存在大量纤维化组织。MQ22.101能够保护所述博来霉素处理的小鼠免于肺中的炎性应答以及因此纤维化的形成(图2)。BAL中的总蛋白是肺损伤的度量。与盐水处理和MQ22.101处理的小鼠相比，来自于博来霉素+MQ20.101处理的小鼠的BAL液含有分别高4和2倍的蛋白(图3A)。此外，在BAL液中测量了总细胞和差别细胞计数(嗜中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞)。如果与盐水处理和MQ22.101处理的小鼠相比，在博来霉素+MQ20.101处理的小鼠中细胞的总数显著增加(图3B)。当着眼于差别细胞计数(图3C-E)时，对嗜中性粒细胞发现了最显著的差异；来自于博来霉素+MQ20.101处理的小鼠的BAL含有20％的嗜中性粒细胞，而来自于盐水处理和MQ22.101处理的小鼠的BAL中的嗜中性粒细胞的百分率接近0％(图3C)。使用MQ22.101的人源化版本重复上面描述的实验，并如实施例2中所述进行了一些微小修改。MQ22.101的人源化版本MQ22.101b/d的制造，描述在实施例7中。将来自于MQ22.101的可变重链(VH)和可变轻链(VL)片段克隆到人IgG1κ骨架中。随后通过CDR嫁接将VH和VL结构域人源化。表2示出了符合IMGT(http://www.imgt.org/)的VHCDR1、-2和-3多肽(SEQIDNO：5、6和7)和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于特发性肺纤维化的预防或治疗的抗体，其与脱亚胺基组蛋白H2A或H4的N‑端上的瓜氨酸化表位特异性反应。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.11 EP 14197374.31.一种用于特发性肺纤维化的预防或治疗的抗体，其与脱亚胺基组蛋白H2A或H4的N-端上的瓜氨酸化表位特异性反应。2.权利要求1的用途的抗体，其中所述瓜氨酸化表位位于包含SEQIDNO：1或SEQIDNO：2的序列的肽上。3.权利要求1或2的用途的抗体，其是单克隆抗体。4.权利要求1-3任一项的用途的抗体，其中所述抗体包含含有SEQIDNO：5的多肽的重链CDR1结构域、含有SEQIDNO：6的多肽的重链CDR2结构域、含有SEQIDNO：7的多肽的重链CDR3结构域、含有S...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷纳多·杰勒杜斯·希尔瓦诺·齐尔里维，约瑟夫·玛利亚·亨德里克·拉茨，
申请(专利权)人：莫蒂克斯特私人有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰,NL