H因子增强抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及对H因子特异性的分离的、合成的或重组的抗体以及它们的片段。本发明专利技术还涉及这种抗体和片段用于抑制补体激活和治疗与补体激活相关的病症的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】H因子增强抗体及其用途
本专利技术涉及免疫学和医学领域。特别地，本专利技术涉及H因子特异性抗体(factorHspecificantibody)及其用途。
技术介绍
补体系统是先天免疫的重要元素，其有助于保护诸如哺乳动物的许多生物体抵抗入侵的病原体。补体系统由超过30种主要在肝脏中合成的不同成分组成。补体系统的激活通过三种不同途径发生，经典途径(classicalpathway)、凝集素途径(lectinpathway)和旁路途径(alternativepathway)。三种途径在形成C3转化酶时收敛(converge)，其对于每种途径是不同的，但具有相似的活性。在经典补体途径中，由C1q、C1r和C1s组成的补体成分(C)1复合物的激活在结合至抗体-抗原复合物时发生。C1复合物切割C4和C2，导致由C4bC2a组成的C3转化酶的形成。C3转化酶将C3切割成活性组分C3a和C3b。在凝集素途径中，甘露糖结合凝集素结合至病原体表面上的甘露糖残基，其激活能够切割C4和C2的丝氨酸蛋白酶MASP-1和MASP-2。如在经典途径中，这导致C4bC2aC3转化酶的形成。该C3转化酶可以结合C3b以形成C5转化酶。与经典和凝集素途径相反，旁路途径由于血浆中C3到C3(H2O)的自发水解而具有低水平的连续活性。该C3b样C3(H2O)可通过结合因子B(FB)形成液相C3转化酶，其进而被因子D激活成Bb。类似地，当C3b结合至表面时，它可结合FB以形成C3bB。该复合物被D因子切割为C3bBb，它是可被备解素(properdin)(P因子)稳定至C3bBbP的旁路途径的C3转化酶。该C3转化酶能够将C3切割成C3a和C3b。除了该过程，旁路途径充当经典和凝集素激活途径的扩增环(amplificationloop)，因为在这些途径中产生的C3b可充当旁路途径的起始点。由此，扩增环导致经典和凝集素途径的增强。在三种激活途径之一中形成的C3转化酶可结合C3b以形成C5转化酶。所有三种补体途径的C5转化酶将C5激活为C5a和C5b，其启动补体系统的末端途径(terminalpathway)。C5b结合C6、C7、C8和C9以形成膜攻击复合物(MAC)，其形成跨膜通道并引起细胞溶解。在病原体的膜中形成孔之后，补体通过使用C3b分子的调理作用(opsonisation)和产生促炎肽诸如C3a和C5a(其吸引并激活免疫细胞到感染部位)帮助清除病原体或变异的自身细胞(alteredself-cell)。由于补体的强促炎性质，宿主细胞被多种膜和可溶性补体调节蛋白良好地保护。旁路途径促成80-90％的总补体活性。因此，该途径的调节至关重要。通常，如果通过C3和C3b的自发水解形成的C3(H2O)不被病原体结合，则被H因子(FH)、I因子(FI)和宿主细胞表面分子快速失活，从而抑制C3转化酶的形成。CD55(也称为衰变加速因子或DAF)在宿主细胞表面结合C3b。FI将C3b切割成无活性形式，但依赖于在细胞表面上表达(CD46，MCP)或在血浆(FH)中循环的辅因子。Fh是血浆糖蛋白，其对于控制在溶液中和在细胞表面上的补体的旁路途径是重要的。FH在与FB相同的位置结合C3b，从而防止C3转化酶的形成。Fh还具有衰变加速活性，即一旦它们被形成，它就促进旁路途径C3转化酶的解离。FH是否结合C3b由存在于细胞表面上的碳水化合物决定。存在于宿主细胞表面上的唾液酸、糖胺聚糖和肝素促进FH与C3b的结合，而C3b与病原体表面上表达的分子的结合导致FB的结合。因此，FH在宿主细胞上而不是在致病细胞(pathogeniccell)的表面上发挥其补体抑制活性，因为结合FH的细胞表面分子在宿主细胞上表达，但通常不在致病细胞上表达。FH缺陷或由于突变所致的宿主表面识别受损与补体介导的组织损伤和疾病有关。在正常止血期间控制补体激活之后，FH还在限制病变细胞和组织的补体介导的损伤中起重要作用。已经描述了FH基因中的多种突变，其可能导致FH蛋白的功能丧失。FH的C-端区域是疾病突变的热点。这是FH与宿主细胞结合的关键区域。该区域中大多数疾病相关的突变干扰FH结合。大多数具有突变的FH基因的患者具有杂合突变(heterozygousmutation)，意味着约一半的循环FH具有正常功能。然而，这显然不足以在其中补体被激活的某些条件下保护自身表面。FH缺陷可能导致肾脏疾病，例膜性增生性肾小球肾炎(MPGN)和非典型溶血尿毒综合征(aHUS)。最近，已经描述了FH突变和年龄相关性黄斑病(AMD)之间的关系。目前，对于诸如aHUS中的FH缺陷的标准治疗是血浆补充或血浆置换疗法。使用这种疗法补充缺陷型补体调控因子。此外，血浆置换疗法清除了针对补体因子的突变补体因子和/或自身抗体。然而，血浆疗法也有一些限制。没有前瞻性临床研究显示血浆置换疗法在治疗aHUS中是安全或有效的，并且血浆疗法的疗效可能依赖潜在的突变。一些患者对新鲜冷冻血浆形成过敏反应，这可能需要停止任何形式的血浆疗法。此外，由于给予血浆源性活性致病性补体成分，血浆置换可能使aHUS的临床表现恶化。最近，在多个国家(其中有美国和欧洲国家)中，治疗性单克隆抗体艾库组单抗(eculizumab)已被批准用于治疗aHUS和阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)。艾库组单抗(Eculizumab)是针对C5特异性的人源化小鼠单克隆抗体，其防止C5裂解为C5a和C5b。因此，它防止末端途径的激活并减少免疫细胞的流入。然而，艾库组单抗(eculizumab)的使用与不期望的副作用相关。因为它阻断C5(其是引发末端途径的关键组分)，用艾库组单抗(eculizumab)治疗的患者变得易于被荚膜细菌(例如，脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseriameningitidis))感染，其清除非常依赖于MAC形成。因此，在接受用艾库组单抗(eculizumab)治疗之前，要求患者接受针对脑膜炎球菌(meningococcus)的疫苗接种。此外，由于艾库组单抗(eculizumab)作用于C3的下游，维持C3沉积，这在涉及不期望的或过度的补体激活的多种病症中是有害的。此外，艾库组单抗(eculizumab)治疗涉及到高成本，并且抗体的可得性有限。结合CCP18的小鼠单克隆抗体由Cheng等人(ClinicalChemistry,2005)进行描述。据描述，称为X52.1的该抗体增加FH与C3b和C3d的结合，其被认为是由FH的二聚引起的。由X52.1诱导的FH与C3b和C3d的结合增加导致补体介导的细胞裂解增加，包括RBC和多种类型的癌细胞，如由Corey等人(JBiolChem.2000)所证实的。这表明抗体X52.1抑制FH的补体抑制活性。事实上，Corey等人表明抗体可以通过增强补体介导的癌细胞裂解用于治疗癌症。鉴于上述，因此仍需要改善与不期望的或过度的补体激活相关的病症的疗法。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供针对与补体系统的旁路途径的不希望的或过度激活相关的疾病的治疗策略，其克服了这种疾病的当前治疗策略的缺点。本专利技术的另一个目的是提供可用于治疗这类疾病的抗体，所述抗体具有比当前可用的抗体改善的性质。本专利技术的抗体及其片段对FH是特异性的，并本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异性结合H因子(FH)的补体调控蛋白结构域18(CCP18)并增强FH活性的分离的、合成的或重组的抗体或其片段，其中所述FH活性是抑制旁路补体激活，并且其中所述抗体或其片段包括：‑具有SEQ ID NO:5的序列的重链CDR1、具有SEQ ID NO:6的序列的重链CDR2和具有SEQ ID NO:7的序列的重链CDR3序列，和/或‑具有SEQ ID NO:1的序列的轻链CDR1序列、具有SEQ ID NO:2的序列的轻链CDR2序列和具有SEQ ID NO:3的序列的轻链CDR3。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.20 EP 14181631.41.一种特异性结合H因子(FH)的补体调控蛋白结构域18(CCP18)并增强FH活性的分离的、合成的或重组的抗体或其片段，其中所述FH活性是抑制旁路补体激活，并且其中所述抗体或其片段包括：-具有SEQIDNO:5的序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:6的序列的重链CDR2和具有SEQIDNO:7的序列的重链CDR3序列，和/或-具有SEQIDNO:1的序列的轻链CDR1序列、具有SEQIDNO:2的序列的轻链CDR2序列和具有SEQIDNO:3的序列的轻链CDR3。2.根据权利要求1所述的抗体或片段，其中抑制旁路补体激活包括：-抑制溶血活性，-抑制所述个体的细胞上的补体成分3(C3)沉积，和/或-增加FH与C3b、iC3b和/或C3d的结合。3.根据权利要求1或2所述的抗体或片段，其中所述片段包含至少一种Fab片段。4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或片段，其是单克隆抗体或其片段。5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体或片段，其是包含人轻链恒定区和重链恒定区的嵌合抗体或人源化抗体或其片段。6.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或片段，包括包含与SEQIDNO:8的序列具有至少80％序列一致性的序列的重链序列和/或包含与SEQIDNO:4的序列具有至少80％的序列一致性的序列的轻链序列。7.一种与包括包含SEQIDNO:8的序列的重链序列和包含SEQIDNO:4的序列的轻链序列的抗体竞争结合H因子(FH)的补体调控蛋白结构域18(CCP18)并且增强FH活性的分离的、合成的或重组的抗体或其片段，其中所述FH活性是抑制旁路补体激活。8.一种分离的、合成的或重组的核酸分子，包含编码权利要求1-6中任一项所述的抗体或片段的核酸序列。9.根据权利要求8所述的核酸分子，包括：-包含与SEQIDNO:13的序列至少80％一致的序列的重链CDR1序列，和/或-包含与SEQIDNO:14的序列至少80％一致的序列的重链CDR2序列，和/或-包含与SEQIDNO:15的序列至少80％一致的序列的重链CDR3序列，和/或-包含与SEQIDNO:9的序列至少80％一致的序列的轻链CDR1序列，和/或-包含与SEQIDNO:10的序列至少80％一致的序列的轻链CDR2序列，和/或-包含与SEQIDNO:11的序列至少80％一致的序列的轻链CDR3序列。10.根据权利要求8或9所述的核酸分子，...

【专利技术属性】
技术研发人员：塔卡·威廉·库依普斯，黛安娜·武泰，玛利亚·克莱尔·布劳威尔，理查德·本杰明·普维，
申请(专利权)人：桑昆血液供给基金会，
类型：发明
国别省市：荷兰,NL