因子H增强抗体及其用途制造技术

本文提供了对因子H特异的新颖分离的合成或重组抗体及其片段，或者编码此类抗体和片段的核酸或载体。本文还提供了此类抗体、片段、核酸或载体用于抑制补体激活和治疗与补体激活相关的病症的用途。相关的病症的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】因子H增强抗体及其用途
[0001]相关申请案
[0002]本申请要求2019年7月17日提交的美国临时专利申请号62/875,309的权益和优先权，该美国临时专利申请的公开内容出于所有目的以引用的方式整体并入本文。
[0003]专利技术背景
[0004]补体系统是先天免疫力的重要部分，它有助于保护许多生物体(诸如哺乳动物)免受侵袭性病原体影响。补体系统由30多种不同的组分组成，所述组分主要在肝脏中合成。补体系统的激活通过三种不同的途径发生，即经典途径、凝集素途径和替代途径。该三种途径在C3转化酶形成时汇集，所述途径中的每一种途径都不同但具有类似的活性。
[0005]在经典补体途径中，由C1q、C1r和C1s组成的补体组分(C)1复合物的激活在结合至抗体
‑
抗原复合物后发生。C1复合物切割C4和C2，从而形成由C4bC2a组成的C3转化酶。C3转化酶将C3切割为活性组分C3a和C3b。在凝集素途径中，甘露糖结合凝集素结合至病原表面上的甘露糖残基，从而激活能够切割C4和C2的丝氨酸蛋白酶MASP
‑
1和MASP
‑
2。如在经典途径中，这导致形成了C4bC2a C3转化酶。这种C3转化酶可以结合C3b以形成C5转化酶。与经典途径和凝集素途径相反，替代途径由于C3在血浆中自发水解为C3(H2O)而具有低水平的连续活性。这种C3b样C3(H2O)可以通过结合因子B(FB)而形成流体相C3转化酶，后者又通过因子D激活为Bb。类似地，当C3b结合至表面时，它可以结合FB以形成C3bB。这种复合物通过因子D切割成C3bBb，后者是可以通过备解素(因子P)稳定为C3bBbP的替代途径C3转化酶。这种C3转化酶能够将C3切割成C3a和C3b。除此过程以外，替代途径还充当经典途径和凝集素激活途径的扩增环，因为这些途径中产生的C3b可以充当替代途径的起点。由此，扩增环增强了经典途径和凝集素途径。该三个激活途径之一中形成的C3转化酶可以结合C3b，以形成C5转化酶。所有三个补体途径的C5转化酶都将C5激活为C5a和C5b，从而引发补体系统的终末途径。C5b结合C6、C7、C8和C9以形成膜攻击复合物(MAC)，从而形成跨膜通道并引起细胞溶解。
[0006]继在病原体的膜中形成孔隙后，补体通过用C3b分子助噬以及产生将免疫细胞吸引至感染部位并激活免疫细胞的促炎性肽(诸如C3a和C5a)来辅助清除病原体或已被改变的自体细胞。由于补体的强促炎性特性，宿主细胞通过若干种膜性和可溶性补体调控蛋白受到充分保护。
[0007]替代途径占总补体活性的80％至90％。因此，这种途径的调控至关重要。由C3自发水解形成的C3(H2O)和C3b在未被病原体结合时一般被因子H(FH)、因子I(FI)和宿主细胞表面分子快速灭活，从而抑制C3转化酶形成。CD55(也称为衰退加速因子或DAF)结合宿主细胞表面的C3b。FI将C3b切割为非活性形式，但取决于细胞表面上表达的辅因子(CD46、MCP)或在血浆中循环的辅因子(FH)。
[0008]FH是血浆糖蛋白，它对于控制溶液中和细胞表面上的替代补体途径来说都是必需的。FH在与FB相同的位置结合C3b，从而防止C3转化酶形成。FH还具有衰退加速活性，即，它在替代途径C3转化酶已经形成后促进它们解离。FH是否结合至C3b由细胞表面上存在的碳水化合物决定。宿主细胞表面上存在的唾液酸、糖胺聚糖和肝素促进FH与C3b结合，而C3b与
病原体表面表达的分子结合引起了FB结合。FH因此在宿主细胞上而非在病原细胞表面上发挥其补体抑制活性，这是因为结合FH的细胞表面分子表达于宿主细胞上但一般不表达于病原细胞上。FH含有20个补体控制蛋白(CCP)结构域，从FH的N末端开始编号为1至20。CCP结构域也称为短共有重复(SCR)或寿司(sushi)结构域。CCP 1
‑
4是参与调控的结构域，CCP 19
‑
20参与结合C3b，并且CCP 6、7、8、19和20结合至细胞表面表达的GAG和唾液酸。结合CCP19和/或CCP20的抗体抑制FH的活性。
[0009]因子H相关蛋白(CFHR)是与FH的结构和抗原性相关的血浆糖蛋白。FHR蛋白还包含CCP结构域，且这些结构域与FH中发现的CCP结构域具有不同程度的同源性。举例来说，FHR1包含对应于CCP6、CCP7、CCP18、CCP19和CCP20的结构域。与FH相比，CFHR不具有强补体抑制活性。CFHR的一个共同特征是它们结合至补体的C3b组分，从而与FH竞争结合至C3b，并且因此被视为替代补体途径的正调控剂。
[0010]由于突变所致的FH缺乏或宿主表面识别受损与补体介导的组织损伤和疾病相关。继在正常止血过程中控制补体激活后，FH还在限制补体介导的患病细胞和组织损伤方面起着重要作用。已经描述了FH基因中可能导致FH蛋白丧失功能的多个突变。FH的C末端区域是疾病的突变热点。这是FH与宿主细胞结合的关键区域。这个区域中的大部分疾病相关突变会干扰FH结合。大部分具有突变FH基因的患者具有杂合突变，意味着大约一半的循环FH具有正常功能。然而，在补体被激活的某些条件下，这显然不足以保护自身表面。FH缺乏可能导致肾病，诸如膜性增生性肾小球肾炎(MPGN)和非典型溶血性尿毒综合征(aHUS)。最近，已经描述了FH突变与年龄相关性黄斑疾病(AMD)之间的关系。
[0011]目前，FH缺乏(诸如在aHUS中)的标准治疗是血浆补充或血浆交换疗法。利用此类疗法，补充了缺乏的补体调控剂。血浆交换疗法另外还去除了突变补体因子和/或针对补体因子的自体抗体。然而，血浆疗法也有一些限制。尚无前瞻性临床研究证明血浆交换疗法在治疗aHUS方面安全或有效，而且血浆疗法的效率可能取决于潜在突变。一些患者对新鲜冷冻血浆产生了过敏反应，这可能需要停止任何形式的血浆疗法。此外，由于施用了血浆来源的活性病原性补体组分，血浆交换可能使aHUS的临床表达恶化。
[0012]最近，治疗性单克隆抗体依库珠单抗(eculizumab)已经在若干个国家(其中包括美国和欧洲国家)被批准用于治疗aHUS和阵发性夜间血红蛋白尿症(PNH)。依库珠单抗是可以防止C5切割为C5a和C5b的C5特异性人源化小鼠单克隆抗体。它因此防止终末途径激活并减少了免疫细胞流入。然而，依库珠单抗的使用与不良副作用有关联。由于它阻断了引发终末途径的关键组分C5，因此用依库珠单抗治疗的患者变得易感染荚膜细菌(诸如脑膜炎双球菌(Neisseria meningitidis))，后者的清除非常依赖于MAC形成。因此，需要患者在接受依库珠单抗治疗前接种脑膜炎球菌疫苗。此外，由于依库珠单抗在C3下游起作用，所以维持了C3沉积，这在涉及不良或过度补体激活的若干种病症中是不利的。另外，依库珠单抗治疗涉及高成本，而且抗体的可用性有限。
[0013]Cheng等(Clinical Chemistry,2005)描述了结合CCP18的小鼠单克隆抗体。据描述，这种抗体(称为X本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的合成或重组抗体或其抗原结合片段，其特异性结合至因子H(FH)的补体控制蛋白结构域18(CCP18)，并且包含：
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轻链CDR1序列，其包含序列SSVTY(SEQ ID NO:1)或序列TSVTY(SEQ ID NO:13)；
‑
轻链CDR2序列，其包含序列ATS(SEQ ID NO:2)或序列ASS(SEQ ID NO:14)；
‑
轻链CDR3序列，其包含序列QHRSSSNPLT(SEQ ID NO:3)；
‑
重链CDR1序列，其包含序列GFSLTNYG(SEQ ID NO:5)；
‑
重链CDR2序列，其包含序列VWSGGTT(SEQ ID NO:6)或序列IWSGGTT(SEQ ID NO:10)；以及
‑
重链CDR3序列，其包含序列ARNFGNYAMDY(SEQ ID NO:7)或序列ARNFGNYAMDF(SEQ ID NO:11)。2.根据权利要求1所述的抗体或片段，其包含：
‑
轻链CDR1序列，其包含序列SSVTY(SEQ ID NO:1)；
‑
轻链CDR2序列，其包含序列ATS(SEQ ID NO:2)；
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轻链CDR3序列，其包含序列QHRSSSNPLT(SEQ ID NO:3)；
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重链CDR1序列，其包含序列GFSLTNYG(SEQ ID NO:5)；
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重链CDR2序列，其包含序列IWSGGTT(SEQ ID NO:10)；以及
‑
重链CDR3序列，其包含序列ARNFGNYAMDF(SEQ ID NO:11)。3.根据权利要求1所述的抗体或片段，其包含：
‑
轻链CDR1序列，其包含序列SSVTY(SEQ ID NO:1)；
‑
轻链CDR2序列，其包含序列ATS(SEQ ID NO:2)；
‑
轻链CDR3序列，其包含序列QHRSSSNPLT(SEQ ID NO:3)；
‑
重链CDR1序列，其包含序列GFSLTNYG(SEQ ID NO:5)；
‑
重链CDR2序列，其包含序列VWSGGTT(SEQ ID NO:6)；以及
‑
重链CDR3序列，其包含序列ARNFGNYAMDY(SEQ ID NO:7)。4.根据权利要求1所述的抗体或片段，其包含：
‑
轻链CDR1序列，其包含序列TSVTY(SEQ ID NO:13)；
‑
轻链CDR2序列，其包含序列ASS(SEQ ID NO:14)；
‑
轻链CDR3序列，其包含序列QHRSSSNPLT(SEQ ID NO:3)；
‑
重链CDR1序列，其包含序列GFSLTNYG(SEQ ID NO:5)；
‑
重链CDR2序列，其包含序列VWSGGTT(SEQ ID NO:6)；以及
‑
重链CDR3序列，其具有序列ARNFGNYAMDY(SEQ ID NO:7)。5.根据权利要求1所述的抗体或片段，其包含：
‑
轻链CDR1序列，其包含序列TSVTY(SEQ ID NO:13)；
‑
轻链CDR2序列，其包含序列ASS(SEQ ID NO:14)；
‑
轻链CDR3序列，其包含序列QHRSSSNPLT(SEQ ID NO:3)；
‑
重链CDR1序列，其包含序列GFSLTNYG(SEQ ID NO:5)；
‑
重链CDR2序列，其包含序列IWSGGTT(SEQ ID NO:10)；以及
‑
重链CDR3序列，其包含序列ARNFGNYAMDF(SEQ ID NO:11)。6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或片段，其中所述抗体或片段对FH的结合亲
和力以K
D
计为2.5
×
10
‑8M或更低和/或对包含CCP18
‑
20的FH片段的结合亲和力以K
D
计为0.1
×
10
‑9M或更低，或者其中所述抗体或片段对FH的结合亲和力以K
D
计为1.25
×
10
‑8M或更低和/或对包含CCP18
‑
20的FH片段的结合亲和力以K
D
计为0.04
×
10
‑9M或更低。7.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或片段，其中所述抗体或片段对FH的结合亲和力以K
D
计为2.5
×
10
‑8M或更低和/或对包含CCP18
‑
20的FH片段的结合亲和力以K
D
计为0.1
×
10
‑9M或更低，或者其中所述抗体或片段对FH的结合亲和力以K
D
计为0.6
×
10
‑8M或更低和/或对包含CCP18
‑
20的FH片段的结合亲和力以K
D
计为0.6
×
10
‑
11
M或更低。8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或片段，其中所述抗体或片段：
‑
在存在10％(v/v)血清时抑制体外脂多糖上的C3沉积，其中IC
50
值为38nM或更低，诸如IC
50
值为30nM或更低；和/或
‑
在存在10％(v/v)血清时抑制体外溶血活性，其中IC
50
值为150nM或更低，诸如IC
50
值为130nM或更低；和/或
‑
使体外FH对C3b的K
D
降低(使结合亲和力增加)到至多2μM和/或使体外FH对C3b的结合亲和力增加至少3倍。9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体或片段，其包含：
‑
可变轻链序列，其包含与SEQ ID NO:4或16具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列；
‑
可变重链序列，其包含与SEQ ID NO:8或12具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：桑昆血液供给基金会，
类型：发明
国别省市：