嵌合Notch受体制造技术

本发明专利技术涉及包含Notch受体的细胞内结构域和跨膜结构域以及异源细胞外配体结合结构域的嵌合受体及其用途，具体地是用于改善T细胞功能和/或T细胞存活的用途，更特别地是在癌症疗法中的用途。疗法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】嵌合Notch受体


[0001]本专利技术涉及疗法(治疗，therapy)领域，特别是癌症疗法，更具体地是过继性T细胞免疫疗法。

技术介绍

[0002]已经通过体外扩增的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)或表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞的过继性转移在肿瘤疗法中取得了显著成功。CAR含有对在肿瘤上发现的抗原具有特异性的、与CD3ζ的信号传导结构域和共刺激受体(如CD28或4-1BB)连接的胞外结构域(抗体的一部分)(图1)。CAR在T细胞中的表达导致其被肿瘤抗原激活。在某些血液恶性肿瘤中，CAR T细胞获得了高达90％的完全缓解。在实体瘤的治疗中获得的成功更少得多。因此，仍然有许多患者不能通过这种疗法治愈。主要障碍是转移的T细胞的持久性欠佳以及多种抑制性受体对T细胞功能的阻碍(这种现象称为耗尽)，所有这些都必须被针对以发挥最大的治疗效果。理想情况下，抗肿瘤T细胞可以在很大程度上不受抑制机制的影响，并且其寿命长到足以实现彻底根除肿瘤。
[0003]Notch是一种细胞表面受体，其响应膜结合的配体。它通过引人注目的直接途径进行信号传导，在该途径中，细胞内结构域被γ分泌酶从质膜上切割下来，并迁移到细胞核以充当转录因子(图2)。Notch是CD4和CD8 T细胞效应子分化的主要调节剂。它还可以促进CD4记忆T细胞以及组织驻留记忆CD8 T细胞的长期存活，CD4记忆T细胞和组织驻留记忆CD8 T细胞是对抗实体瘤最有效的T细胞类型。此外，Notch是CD8效应子T细胞基因表达程序的主要调节剂。它的直接靶基因是编码IFNγ、粒酶B和穿孔素的那些基因，以及编码转录因子T-bet和脱中胚蛋白(Eomesodermin)的那些基因。Notch通路中T细胞特异性缺陷的小鼠无法排斥模型肿瘤。反之亦然，Notch的故意激活促进了小鼠的肿瘤排斥。肿瘤相关的髓样源性抑制细胞(MDSC)下调T细胞中的Notch表达，大概可以帮助肿瘤逃脱有效的T细胞介导的排斥。活性的Notch等位基因的表达使CD8 T细胞对MDSC介导的抑制不敏感。
[0004]最近的研究(Morsut et al.2016和Roybal et al.2016)创建了含有Notch的跨膜区域以及细胞外区域的一小部分的嵌合受体。这些与不相关的表面受体的配体结合结构域连接，同时，Notch的细胞内部分被不相关的反式激活因子(Gal4)替换。这些受体与配体的结合导致γ分泌酶介导的Gal4释放，其然后激活人工响应基因的转录。因此，在这些受体中，Notch的细胞内效应子结构域和Notch的细胞外配体结合结构域均不再存在，并由导致Notch信号传导也不再存在。
[0005]在本领域中仍然需要用于肿瘤免疫疗法的新的组合物和方法，所述新的组合物和方法可以与现有的免疫疗法组合使用或不组合使用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的一个目的是提供总体上改善T细胞功能的方法，并且特别是在肿瘤免疫疗法中。
[0007]因此，本专利技术提供了包含Notch受体的细胞内结构域和跨膜结构域以及异源细胞外配体结合结构域的嵌合受体。嵌合受体还优选包含Notch受体的异源二聚结构域和Lin-12-Notch(LNR)重复结构域。
[0008]当异源细胞外配体结合结构域结合配体时，根据本专利技术的嵌合受体能够进行Notch信号传导，优选Notch1、Notch2、Notch3和/或Notch4信号传导，更优选Notch1和/或Notch2信号传导。
[0009]在进一步的方面，本专利技术提供了一种核酸分子，其包含编码根据本专利技术的嵌合受体的序列。
[0010]在进一步的方面，本专利技术提供了一种载体，其包含根据本专利技术的核酸分子。
[0011]在进一步的方面，本专利技术提供了一种分离细胞，其包括根据本专利技术的核酸分子。在进一步的方面，本专利技术提供了一种此类细胞的群。
[0012]在进一步的方面，本专利技术提供了一种分离细胞，其表达根据本专利技术的嵌合受体。在进一步的方面，本专利技术提供了一种此类细胞的群。
[0013]在进一步的方面，本专利技术提供了一种基因修饰的T淋巴细胞，其是由本专利技术的核酸分子或载体转导的。
[0014]在进一步的方面，本专利技术提供了一种药物组合物，其包含根据本专利技术的核酸分子、载体或细胞以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0015]在进一步的方面，本专利技术提供了一种在有需要的受试者中改善T细胞功能和/或T细胞存活的方法，该方法包括向所述受试者给予治疗有效量的根据本专利技术的嵌合受体、核酸分子、载体或细胞。
[0016]在进一步的方面，本专利技术提供了根据本专利技术的嵌合受体、核酸分子、载体或细胞，用于在改善受试者的T细胞功能和/或T细胞存活的方法中使用。
[0017]在进一步的方面，本专利技术提供了在有需要的受试者中进行免疫疗法的方法，该方法包括向所述受试者给予治疗有效量的根据本专利技术的嵌合受体、核酸分子、载体或细胞。
[0018]在进一步的方面，本专利技术提供了根据本专利技术的嵌合受体、核酸分子、载体或细胞，用于在疗法(优选免疫疗法)中使用。
[0019]在进一步的方面，本专利技术提供了一种增强受试者中基于抗体的免疫疗法的功效的方法，受试者患有癌症并且正在接受所述抗体的治疗，方法包括向所述受试者给予治疗有效量根据本专利技术的表达嵌合受体的T细胞。
[0020]在进一步的方面，本专利技术提供了根据本专利技术的表达嵌合受体的T细胞，用于在受试者中增强基于抗体的免疫疗法的功效的方法中使用，受试者患有癌症并且正在接受所述抗体的治疗。
[0021]在进一步的方面，本专利技术提供了一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，方法包括向所述受试者给予有效量的T细胞，该T细胞包含编码根据本专利技术的嵌合受体的核酸序列。
[0022]在进一步的方面，本专利技术提供了包含编码根据本专利技术的嵌合受体的核酸序列的T细胞，用于在受试者中治疗癌症的方法中使用。
[0023]在进一步的方面，本专利技术提供了一种生产根据本专利技术的细胞群的方法，包括：
[0024]-提供细胞，优选人类T细胞，
[0025]-向所述细胞提供根据本专利技术的核酸分子或载体，和
[0026]-允许表达根据本专利技术的嵌合抗原受体。
具体实施方式
[0027]本专利技术涉及一种在配体结合后具有功能性Notch信号传导的嵌合受体，该受体由Notch的细胞内效应子和跨膜结构域与异源细胞外配体结合结构域的组合产生。本专利技术人发现，Notch信号传导抑制T细胞特异性抑制受体如PD1(程序性死亡蛋白1)和LAG3(淋巴细胞激活基因3)在T细胞上的表达。肿瘤通常通过上调此类抑制性分子来降低抗肿瘤T细响应，从而逃避免疫破坏。因此，Notch的治疗性激活是用于在人类患者中增强针对肿瘤的T细胞响应的有吸引力的靶标。到目前为止，Notch的治疗性用途已被两个问题排除。首先，Notch在许多细胞类型中均起作用，并且其系统性激活很可能引起许多副作用。其次，过多的Notch信号传导可能是致癌的。由于本专利技术人发现，当将Notch的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合受体，包含Notch受体的细胞内结构域、跨膜结构域、异源二聚结构域和Lin-12-Notch(LNR)重复结构域，以及异源细胞外配体结合结构域。2.根据权利要求1所述的嵌合受体，其中，所述受体能够Notch信号传导。3.根据权利要求1或2所述的嵌合受体，其中，所述异源细胞外配体结合结构域选自以下各项组成的组：
·
对可溶性配体具有特异性的配体结合结构域；
·
对细胞表面抗原具有特异性的配体结构结构域，如ScFv抗体结构域，优选对肿瘤细胞表面抗原具有特异性的ScFv抗体结构域；
·
Fc受体的细胞外配体结合结构域或其配体结合片段；
·
包含用于抗体的表位的细胞外结构域，该抗体可以在没有表面分子参与的情况下交联所述嵌合受体；
·
包含如生物素等部分的细胞外结构域，该部分可以被具有针对该部分的多个结合位点的试剂如链霉亲和素交联。4.根据权利要求1至3中任一项所述的嵌合受体，还包含位于所述LNR结构域和所述异源细胞外配体结合结构域之间的连接序列。5.一种核酸分子，包含编码根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合受体的序列。6.一种载体，包含根据权利要求5所述的核酸分子。7.一种分离细胞，包含根据权利要求5所述的核酸分子或权利要求6所述的载体。8.根据权利要求7所述的细胞，其中，所述细胞是T细胞，如肿瘤来源的T细胞或肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)。9.根据权利要求7或8所述的细胞，其中，所述T细胞是从患有癌症的患者分离的自体T细胞。10.根据权利要求8或9所述的细胞，其中，所述T细胞表达嵌合抗原受体。11.一种基因修饰的T细胞，其是由根据权利要求5或6所述的核酸分子或载体转导的。12.一种药物组合物，包含根据权利要求5所述的核酸分子、根据权利要求6所述的载体或根据权利要求7至11中任一项所述的细胞以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。13.一种在有需要的受试者中改善T细胞功能和/或T细胞存活的方法，所述方法包括向所述受试者给予治疗有效量的根据权利要求1至11中任一项所述的嵌合受体、核酸分子、载...

【专利技术属性】
技术研发人员：德克，
申请(专利权)人：桑昆血液供给基金会，
类型：发明
国别省市：