PD-L1中和抗体对痛风炎症作用机理的研究方法技术

本发明专利技术公开了PD

Research methods of PD-L1 neutralizing antibody on the mechanism of gout inflammation

【技术实现步骤摘要】
PD
‑
L1中和抗体对痛风炎症作用机理的研究方法


[0001]本专利技术涉及痛风炎症研究
，尤其涉及PD
‑
L1中和抗体对痛风炎症作用机理的研究方法。

技术介绍

[0002]痛风是由尿酸盐晶体沉积在关节和非关节等软组织部位所引起的炎症性疾病，其临床表现为累及下肢关节的极度疼痛等。遗传和代谢等因素可以导致血液中累积较高浓度的尿酸，在一些生理变化和外界条件的刺激下，高浓度的尿酸析出尿酸盐晶体并沉积在相关组织。沉积的尿酸盐可以和其它因素一起协同激活NLRP3炎症小体，产生活性的前炎性细胞因子IL
‑
1β等启动痛风炎症，NLRP3炎症小体的活化还会进一步导致细胞焦亡以及其它类型的细胞死亡。焦亡或死亡细胞的内容物被释放到周围环境，其中包含大量的DAMP，这些DAMP会进一步激活免疫反应导致更剧烈的炎症，造成痛风发作期的极度疼痛表现。
[0003]PD
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1/PD
‑
L1通路是目前主流的免疫检验点，临床上有多个靶向的抗体用于抗肿瘤治疗，但其对痛风的研究目前较少，尚没有针对PD
‑
1/PD
‑
L1在痛风中的治疗方案。最新研究表明PD
‑
1/PD
‑
L1通路参与尿酸盐晶体介导的NLRP3炎症小体活化，PD
‑
L1抗体具有治疗痛风疾病的潜力。

技术实现思路

[0004]针对上述存在的问题，本专利技术旨在提供一种PD
‑<br/>L1中和抗体对痛风炎症作用机理的研究方法，可对PD
‑
L1中和抗体用于痛风治疗的研究提供前期研究基础。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案如下：
[0006]PD
‑
L1中和抗体对痛风炎症作用机理的研究方法，其特征在于，包括以下步骤，
[0007]S1：选择实验动物，并将实验动物随机分成正常组、模型组、实验组和同型对照组；
[0008]S2：制备单钠尿酸盐晶体悬浊液；
[0009]S3：对实验组动物尾静脉注射anti
‑
PD
‑
L1中和抗体；
[0010]S4：对同型对照组动物尾静脉注射IgG2b；
[0011]S5：对模型组、实验组和同型对照组动物制备急性痛风性关节炎模型；
[0012]S6：观察分析对比正常组、模型组、实验组和同型对照组动物的生理指标；
[0013]S7：根据步骤S6中的分析结果对PD
‑
L1中和抗体对痛风炎症作用机理进行研究。
[0014]进一步的，步骤S1中所述的实验动物为雄性小鼠，所有小鼠都饲养在无病原体的动物设施中，任意提供无菌水和食物，并在8
‑
12周龄时用于实验。
[0015]进一步的，步骤S2的具体操作包括以下步骤，
[0016]S201：将10mg/mL尿酸盐溶解在0.01M NaOH溶液中，得到过饱和尿酸溶液；
[0017]S202：采用0.45μm滤膜过滤过饱和尿酸溶液，并在室温下干燥48小时，得到单钠尿酸盐晶体；
[0018]S203：将单钠尿酸盐晶体用100％乙醇洗涤并超声处理，得到单钠尿酸盐晶体悬浊
液。
[0019]进一步的，步骤S6的具体操作包括以下步骤，
[0020]S601：造模前及造模后12h，观察记录各组小鼠的关节肿胀及活动情况；
[0021]S602：造模前及造模后12h，眼眶后静脉丛采血检测炎症因子水平差异；
[0022]S603：将小鼠踝关节滑膜组织经过常规处理后，进行HE染色，用显微镜观察踝关节滑膜组织病理形态改变。
[0023]本专利技术的有益效果是：
[0024]本专利技术中通过对PD
‑
L1中和抗体对痛风炎症作用机理的研究可以得出，小鼠痛风模型中对PD
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L1进行抗体阻断显著的抑制了小鼠对踝关节注射尿酸盐的炎症反应，小鼠的关节红肿程度以及体内炎症水平显著降低；由此可得，PD
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L1特异性的中和抗体治疗可以显著缓解动物模型中的痛风发作，为靶向PD
‑
L1用于痛风的临床治疗提供研究基础。
附图说明
[0025]图1为本专利技术中各组小鼠NLRP3、pro
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IL
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1β表达和炎症因子IL
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1分泌情况对照图；
[0026]图2为本专利技术中各组小鼠关节红肿情况对照图；
[0027]图3为本专利技术中显微镜下各组小鼠HE切片中炎性细胞对照图；
[0028]图4为小鼠分离的骨髓巨噬细胞在PD
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L1抗体阻断下，NLRP3、pro
‑
IL
‑
1β表达和炎症因子IL
‑
1分泌情况对照图。
具体实施方式
[0029]为了使本领域的普通技术人员能更好的理解本专利技术的技术方案，下面结合附图和实施例对本专利技术的技术方案做进一步的描述。
[0030]PD
‑
L1中和抗体对痛风炎症作用机理的研究方法，包括以下步骤，
[0031]S1：选择实验动物，并将实验动物随机分成正常组、模型组、实验组和同型对照组；
[0032]具体的，实验动物选用C57/BL6雄性小鼠，购自杭州子源实验动物科技有限公司；所有小鼠都饲养在无病原体的动物设施中，任意提供无菌水和食物，并在8
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12周龄时用于实验，中科大附属第一医院动物伦理委员会批准了所有程序。
[0033]将20只小鼠，随机分为正常组(NC组)、模型组(MSU组)、实验组(anti
‑
PD
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L1组)，同型对照组(IGg组)，每组5只小鼠。分别完成四组小鼠编号，并将小鼠固定后，用记号笔在每只小鼠右后踝关节正中部位画一圈作标记。
[0034]进一步的，步骤S2：制备单钠尿酸盐晶体悬浊液；
[0035]具体的，S201：将10mg/mL尿酸盐(Sigma
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Aldrich)溶解在0.01M NaOH(pH 7.1)溶液中，得到过饱和尿酸溶液；
[0036]S202：采用0.45μm滤膜过滤过饱和尿酸溶液，并在室温下干燥48小时，得到单钠尿酸盐(MSU)晶体；
[0037]S203：将MSU晶体用100％乙醇洗涤并超声处理以减小其尺寸，得到MSU晶体悬浊液。
[0038]进一步的，步骤S3：对实验组动物尾静脉注射anti
‑
PD
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L1中和抗体；
[0039]具体的，对实验组每只小鼠尾静脉注射InVivoMAb anti
‑
mouse PD
‑
L1(B7
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H1)中
和抗体100μg本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.PD
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L1中和抗体对痛风炎症作用机理的研究方法，其特征在于，包括以下步骤，S1：选择实验动物，并将实验动物随机分成正常组、模型组、实验组和同型对照组；S2：制备单钠尿酸盐晶体悬浊液；S3：对实验组动物尾静脉注射anti
‑
PD
‑
L1中和抗体；S4：对同型对照组动物尾静脉注射IgG2b；S5：对模型组、实验组和同型对照组动物制备急性痛风性关节炎模型；S6：观察分析对比正常组、模型组、实验组和同型对照组动物的生理指标；S7：根据步骤S6中的分析结果对PD
‑
L1中和抗体对痛风炎症作用机理进行研究。2.根据权利要求1所述的PD
‑
L1中和抗体对痛风炎症作用机理的研究方法，其特征在于：步骤S1中所述的实验动物为雄性小鼠，所有小鼠都饲养在无病原体的动物设施中，任意提供无菌水和食物，并在8
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【专利技术属性】
技术研发人员：陶金辉，张宏亮，高洁，
申请(专利权)人：安徽省立医院中国科学技术大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：