生长激素释放抑制因子肽类制造技术

游离形式或盐形式的具有如下式Ｉ的化合物，当与α－或β－射线放射性核素或具俄歇电子级联核素配合后，用作放射性药物：＄式中，＄Ｍ是一当量的阳离子，Ａ是苯丙氨酸或酪氨酸。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生长激素释放抑制因子肽类，制备它们的方法，含它们的药物制剂和它们作为放射性药物用于例如放射性治疗生长激素释放抑制因子受体阳性瘤(positive tumors)的用途。采用放射性化合物的肿瘤的放射性疗法具有选择性地将肿瘤及其次生肿瘤作为目标的优点，所以，可限制对正常组织的放射剂量。放射性治疗剂应该能在靶器官如肿瘤上迅速蓄积和有高的滞留性并迅速从循环系统清除以便减少全身的放射剂量。基于螯合的放射性金属的放射性治疗剂在热力学上和/或动力学上也应该是稳定的，以防止该放射性金属的损失。反复给药的放射性治疗剂不应该是产生免疫的。GB-A-2,225,579公开了带至少一个螯合基团的生长激素释放抑制因子肽类，它能被放射性标记用于体内诊断和治疗。这些化合物能与生长激素释放抑制因子受体结合，(例如被肿瘤或次生肿瘤表达或过度表达的受体)。EP-A2-607,103公开生长激素释放抑制因子肽类，它们含借助间隔基(spacer group)与其末端氨基相接的双官能多氨基多羧酸螯合基团。但是，尽管双官能螯合基团(八齿)和间隔基存在导致生成的结合物的某些性质的改变，仍然迫切需要进一步改良性质的放射性药物，尤其具高的靶/肾比放射性药物，以便将肾中的放射剂量减至最小。正如在下文中公开的，现在已发现含直接(即无间隔基)与生长激素释放抑制因子肽类的末端氨基结合的单官能DOTA(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸)的生长激素释放抑制因子肽类具有改良的特性。尤其它们具有更好的肿瘤/肾比，因此到达肾的放射剂量更低。按照本专利技术提供游离形式、盐形式或与放射性核素配合形式的具如下式I的化合物 式中M是阳离子和A是苯丙氨酸或酪氨酸。很容易理解，在上边DOTA式中每个联接二个氮原子的“ ”键代表l，2一亚乙基。当A是苯丙氨酸时，式I化合物的肽部分相当于oclrcotidc。当A是酪氨酸时，肽部分相当于-0clrcotidc。A优选酪氨酸。M可以是H+或羧基的任意成盐阳离子，例如一价阳离子或一当量的多价阳离子，例如，碱金属离子如钠、钾离子或取代或未取代的铵离子。式I化合物也可以如内盐的形式(当M是H+时)或酸加成盐形式存在。酸加成盐包括如加入有机、聚合或无机酸所得盐，例如水合氯化物(chlorhydracc)、乙酸盐、三氟乙酸盐或乳酸盐。所谓放射性核素指α-或β-射线核素或带有俄歇电子级联(Auger-e--cascades)的核素。适合的核素包括如64Cu、67Cu或放射性镧系元素，尤其90Y、140La、161Tb、169Er、153Sm、177Lu、166Dy、166Ho或175Yb，以161Tb和90Y为佳，以90Y最好。本专利技术也包括制备式I化合物的方法。它们可通过与已知方法类似方法制备，例如，式I化合物可按如下过程制备a)除去至少一个被保护形式式I化合物中存在的保护基团，或b)通过酰胺键联结两个肽单元，其中之一含至少一个保护或未保护形式的氨基醇，而其中另一个含DOTA基团，其中该酰胺键采用的方式应能获得式I的所需的氨基酸顺序，然后可任选完成该过程的步骤a)，或c)以这样的方式联接DOTA和保护或未保护形式的所需的生长激素释放抑制因子肽类，以使从DOTA衍生的基团固定在该肽类的末端氨基上，然后可任选完成步骤a)，或d)氧化其氨基酸顺序如式I中所述的DOTA-肽，其中半胱氨酸的巯基以游离形式存在以便生成两个半胱氨酸基通过-S-S-桥联接的式I化合物。于是，获得游离形式、盐形式或以与放射性核素配合形式的式I化合物。以上的反应可按与已知方法类似的方法完成，例如下例中所述的方法。在这些反应中，需要时，可使用适用于肽类或DOTA螯合基团的保护基团作为官能基团，该官能基团不参与该反应。所谓保护基团也可包括具官能基团的聚合物树脂。DOTA可以游离酸的形式，可作为酸酐或活性酯(例如与N-羟基琥珀酰亚胺)用在步骤c)过程中。与放射性核素的配合过程可在室温下按照现有技术已知的方法来进行，例如，使未配合的式I化合物与能产生所需放射性核素的盐反应。式I的未配合化合物与得到放射性核素的盐的配合过程在60°～120℃下进行为佳，以在80°～100℃下进行更好。当完成配合过程的温度≥100℃时，可在高压釜内进行。加热下的配合过程可容易地在短时间内进行，例如10～20分钟。当该放射性核素是90Y时，优选的能生成90Y盐是99YCl3。在避免微量金属污染的条件下，上述反应可容易地进行。优选使用去离子蒸馏水，超纯试剂，不加载体放射性物质等，以便降低微量金属的作用。式I化合物在与放射性核素配合后具有药物活性，所以，它们可作为有效的放射性药物用在体内治疗生长激素释放抑制因子受体阳性肿瘤和次生性肿瘤，这可由标准试验所表明。特别是式I化合物对生长激素释放抑制因子受体具有亲合性，这可通过体外按照J.C.Reubi(Life Sc.36，1829(1985))和C Bruns等(Biochem.J.，265，39(1990))公开的结合分析方法对其作评估。据观察式I化合物例如与90Y或161Tb配合的式I化合物与生长激素释放抑制因子受体结合具有良好的亲合性和专一性，其pKD值约8.0～10.0。实施例1化合物以高度亲合性与在小鼠皮质或AR42J胰腺肿瘤细胞上表达的生长激素释放抑制因子受体结合它以-octreotide作为特定的配位体，具有的pKi值为8.9±0.1。实施例2的化合物是生长激素释放抑制因子受体的特定配位体，它能被oct-reotide从生长激素释放抑制因子受体上置换，其pIC50＝9.0±0.3。式I的配位化合物对生长激素释放抑制因子受体的亲合性也可按照标准试验方法，例如在GB-A-2,225,579上公开方法，通过体内试验来表明。例如，在一项试验中，以5μCi的剂量给患外分泌胰腺肿瘤的小鼠腹膜内注射(i.p.injection)实施例2的化合物后2小时，该化合物产生显著的肿瘤部位蓄积；在生长激素释放抑制因子受体阳性肿瘤部位的存在量为9.53±0.70％ID/g，而在生长激素释放抑制因子受体阳性正常组织中蓄积明显较少量的放射性，例如在胰腺它的量为1.52±0.08％ID/g。所谓％ID/g指的是每克组织注射的放射性剂量的百分比。实施例2化合物提供注射后24小时的高的肿瘤/肾比，以及高的肿瘤/肝比和肿瘤/股骨比。骨髓被认为是对放射性最敏感的器官，只有少量的放射性在骨部位蓄积是有利的。与放射性核素配合的式I化合物对带有生长激素释放抑制因子受体的肿瘤细胞具有抗增殖作用，例如像在裸鼠试验中所表明的一样。AR42J小鼠胰腺肿瘤细胞受胰蛋白酶作用，将1×107肿瘤细胞(在0.2ml中)皮下注射到裸鼠的两肋。当肿瘤达到0.1～2ml显著的体积时，将动物随机分为对照组和治疗组。对照组动物以相应治疗组最高剂量的剂量腹膜内注射给式I的未配合化合物或者相应的式I的冷配合(coldcomplexe)化合物。每只鼠给药量从0.8mCi至到40mCi/kg/100μl。用卡尺测量肿瘤的大小。使用公式“体积(椭圆球体)＝长度×深度×高度×0.52”计算肿瘤的体积(ml)。采用Student′sT试验作为统计学计算方法。在该试验中，在单纯使用实施例2化本文档来自技高网...

【技术保护点】
游离形式、盐形式或与放射性核素配合形式的如下式式Ⅰ化合物： ＊＊＊ Ⅰ 式中， Ｍ是阳离子，和 Ａ是苯丙氨酸或酪氨酸。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：R艾伯特，C布朗斯，P史密夫琼斯，B施托兹，G韦克贝克，
申请(专利权)人：诺瓦蒂斯有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]