一种北冬虫夏草菌株G5及其诱变选育和培育方法技术

本发明专利技术公开了一种北冬虫夏草菌株G5及其诱变选育和培育方法，本发明专利技术诱变选育方法通过

【技术实现步骤摘要】
一种北冬虫夏草菌株G5及其诱变选育和培育方法
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种北冬虫夏草菌株G5及其诱变选育和培育方法。
技术介绍
北冬虫夏草[Cordycepsmilitaris(L.exFr.)Link.]又称北虫草，蛹虫草，隶属于真菌界、子囊菌门、子囊菌纲、肉座菌目、麦角菌科、虫草属，与冬虫夏草是同属不同种，也是一种久负盛名的药用真菌，可全草入药，具特殊的药用价值和滋补功效，含有虫草素、虫草酸、虫草多糖、SOD、和微量元素硒等多种生物活性物质，可促进机体新陈代谢，提高机体的免疫功能。古人就有“宁要虫草一把，不要黄金满车”之说。北虫草所含营养成分的种类、数量与冬虫夏草相同或基本相同，且在某些营养物质的含量上高于冬虫夏草。北冬虫夏草生理独特，生态复杂，是鳞翅目昆虫的蛹体感染虫草菌后形成的虫与真菌两部分组成的复合体，主要生长在针叶林、阔叶林或混交林地表土层中。北虫草自然资源分布数量很少，价格昂贵，仅靠野生虫草已无法满足市场的需求，且采挖野生虫草，破坏植被，水土流失严重。人工栽培的北虫草作为野生虫草的替代品，市场空间大，效益高。人工培养北虫草子实体影响因子很多，也很复杂，优良菌种的选育和高产培养条件的研究仍是北虫草研究的重点。近年来，我国关于北虫草人工栽培及规模化生产技术已有很多报道，但是还存在影响北虫草子实体人工培养和工业化生产规模扩大的若干关键的、急需解决的问题，比如说菌种的退化问题、菌种的选育研究、不同地区培养条件的优化研究，以及如何提高子实体的生物产量等问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种北冬虫夏草菌株G5。本专利技术的再一目的在于提供上述北冬虫夏草菌株G5的诱变选育方法。本专利技术的再一目的在于提供上述北冬虫夏草菌株G5的培育方法。本专利技术是这样实现的，一种北冬虫夏草菌株G5的诱变选育方法，该北冬虫夏草菌株通过12C6+重离子束按照150Gy辐射剂量辐照对蛹虫草出发菌株的菌悬液进行辐照处理，再通过对辐照处理后的菌悬液依次进行初筛、复筛后得到北冬虫夏草菌株G5。北虫草高产菌株G5保藏于兰州职业技术学院生物工程系微生物实验室。优选地，所述初筛为：采用平板分离的方法从辐照处理后的菌悬液进行初筛，并选出有效诱变菌株。优选地，所述复筛为：对初筛的诱变菌株进行复筛处理，获得符合条件的北冬虫夏草菌株，其中，复筛的项目包括北冬虫夏草菌株子实体产量、多糖含量、虫草素含量以及遗传稳定性。上述北冬虫夏草菌株G5的培育方法，该方法包括：将北冬虫夏草菌株G5接种在培育基上培养至子实体成熟；其中，培养温度为21℃，散射光照度为500Lx，所述培养基为80％大米和20％蚕蛹粉。本专利技术克服现有技术的不足，提供一种北冬虫夏草菌株G5及其诱变选育和培育方法，通过12C6+重离子辐照选育出一种北冬虫夏草高产菌株G5，并对北冬虫夏草高产菌株G5的人工栽培培养基与培养条件进行了探索研究，旨在筛选出北虫草诱变菌株的最佳人工栽培培养基与培养条件，为北虫草产业化、工业化生产提供技术支持。相比于现有技术的缺点和不足，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术培育方法简单，诱变与所得菌株之间的重复可再现性强；本专利技术获得的北冬虫夏草菌株G5子实体产量高、多糖含量高、虫草素含量高以及遗传稳定性好。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。一种北冬虫夏草菌株G5的诱变选育方法，该方法包括以下步骤：1、重离子束12C6+辐照诱变用兰州重离子加速器国家重点实验室提的12C6+重离子束按照辐射剂量150Gy对北冬虫夏草出发菌株的菌悬液进行辐照处理。2、突变菌株的初步筛选采用平板分离的方法，对经重离子束12C6+剂量150Gy辐照后的菌悬液进行浓度梯度稀释，稀释20倍，涂布到12cm平板上，沿用出发菌株的培养条件，对照辐照前菌株的生长特征，观察辐照后菌丝生长特性及菌落大小、形态、颜色变化等，从中挑选差异性较大的菌落转接到斜面培养基上进行培养；然后在平板培养基上分别接种出发菌株和诱变后初步筛选的菌株菌种块，两者相距2cm，25℃恒温培养，7天后观察是否有明显拮抗线产生。若菌丝能融合生长、连成一片的说明是同种菌丝，若出现拮抗线明显的，则说明菌种性质不同，可能产生了新的性状，为有效诱变菌株。3、复筛(1)子实体产量的测定对出发菌株和经初筛的变异菌株分别接种进行培育至子实体成熟时采收；其中，该培育方法中，培养温度为21℃，散射光照度为500Lx，所述培养基为80％大米和20％蚕蛹粉。将采收的子实体干燥，称重，计算平均产量(g/瓶)。培养测定方法参考文献：贾国军，赵凤舞，王剑虹.北冬虫夏草高产菌株人工培养条件的研究[J].甘肃农业科技，2016(11)：32-35.测定结果如下表1所示：表1子实体的产量的测定结果表1中，G0为出发菌株，G5为高产变异菌株。由上表1可知，经辐照后的变异菌株子实体产量明显增加，G5的子实体产量是原始出发菌株的提高了55.70％，差异非常明显。(2)子实体活性物质含量的测定①多糖含量的测定。测定方法：乙醇沉淀法。②虫草素含量的测定。测定方法：用高效液相色谱法(HPLC)。参考文献：孙军德，宋思丹，王颖，等.蛹虫草优良菌株的筛选[J].微生物学杂志，2011，31(2):40-43.王英娟，李多伟，王义潮，等.蛹虫草中虫草素、虫草多糖综合提取工艺研究[J].西北植物学报，2005，25(9):1863-1867.Ing-LungShih，Kun-LinTsai，ChienyanHsieh.EffectsofcultureconditionsonthemycelialgrowthandbioactivemetaboliteproductioninsubmergedcultureofCordycepsmilitaris[J].BiochemicalEngineeringJournal，2007，33(3):193-201.测定结果如下表2所示：表2子实体多糖和虫草素含量测定结果由上表2可知，G5菌株的多糖和虫草素含量均高于出发菌株，多糖含量和虫草素含量比相同条件下提取的出发菌株分别提高了67.71％和96.72％。4、遗传稳定性测定将筛选得到的高产突变菌株连续传代10次，每隔两代分别进行栽培实验，测定子实体的产量，以检测菌株的遗传稳定性。将筛选得到的高产突变菌株G5连续传代10次，每隔两代分别进行栽培实验，测定每株中子实体的产量。结果如下表3所示：表3北冬虫夏草菌株G5遗传稳定性结果从表3可知，突变菌株G5经过10次传代，子实体的含量变化不大，可以说明此突变菌株G5均具有稳定高产子实体的遗传特性。其中，G5突变菌株的子实体产量平均为8.21g/瓶，比原始出发菌株G0产子实体(5.26g/瓶)提高了56.08％，具有显著差异。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例而已，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种北冬虫夏草菌株G5的诱变选育方法，其特征在于，该北冬虫夏草菌株通过

【技术特征摘要】
1.一种北冬虫夏草菌株G5的诱变选育方法，其特征在于，该北冬虫夏草菌株通过12C6+重离子束按照150Gy辐射剂量辐照对北冬虫夏草出发菌株的菌悬液进行辐照处理，再通过对辐照处理后的菌悬液依次进行初筛、复筛后得到北冬虫夏草菌株G5。2.如权利要求1所述的北冬虫夏草菌株G5的诱变选育方法，其特征在于，所述初筛为：采用平板分离的方法从辐照处理后的菌悬液进行初筛，并选出有效诱变菌株。3.如权利要求1所述的北冬虫...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵凤舞，王桂荣，贾国军，王剑虹，马振贵，王春霖，高雪，
申请(专利权)人：兰州职业技术学院，
类型：发明
国别省市：甘肃,62