检测稳定在固体载体材料上的痴呆和阿尔茨海默病相关生物标记制造技术

本发明专利技术的实施方案提供用于检测源自体液的一种或多种生物标记的方法，包括对来自体液样品的生物标记进行一种或多种测定，其中样品先前保存在固体载体上；其中生物标记的变化提供脑中生物学事件的指示。本发明专利技术还提供用于鉴定人处于痴呆或阿尔茨海默病风险中，监测人的痴呆或阿尔茨海默病的发病或进展，评估潜在药剂的有效性的相关方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测稳定在固体载体材料上的痴呆和阿尔茨海默病相关生物标记专利
本专利技术涉及用于检测稳定在固体载体材料上的痴呆和阿尔茨海默病相关生物标记的方法。专利技术背景痴呆当前影响全球四千四百万个体。到2050年该数字将会上升至一亿三千五百万。当前全球费用为$600bn。对阿尔茨海默病治疗的研究饱受失败。2002到2012年之间，超过99%的旨在预防或逆转该疾病的试验失败。所有的失败均归于已经太晚时才治疗患者，因为症状在疾病开始后约十年出现。因此较早鉴定患者是痴呆研究的优先考虑之一。近来，研究者在血液中鉴定了一组可预测痴呆起始的血浆蛋白，并且已经提出这些生物标记可用于鉴定个体，用于发展新痴呆药物的血液检验/或试验。将452个健康人的血液中的蛋白质与来自220个具有轻度认知缺损的人和476个具有阿尔茨海默病的人的蛋白质比较。由此，研究者能够以87%准确度告诉哪些具有轻度认知缺损的患者将会继续发展阿尔茨海默病。该结果将允许候选者的早期鉴定，从而增加未来临床试验的成功机会。这些生物标记还代表鉴定将最终发展为阿尔茨海默病的人以及因此可较早进入临床试验的人的潜在手段。早期治疗将增加阳性药物作用以及因此治疗的潜能。存在对改善的样品储存和检测的需求，以促进鉴定处于痴呆或发展阿尔茨海默病风险中的人。专利技术概述本专利技术描述一种促进生物标记检测和定量的新方法，其支持检测与痴呆和阿尔茨海默病相关的生物标记。将血液、血浆或其它相关生物样品类型收集在固体载体上，将生物标记例如蛋白质、RNA和DNA稳定并检测。这些生物标记在固体载体上保持稳定，并且可在长期储存后检测。在一个方面，提供用于检测源自体液的一种或多种生物标记的方法，包括对来自体液样品的生物标记进行一种或多种测定，其中样品先前保存在固体载体上；其中生物标记的变化提供脑中生物学事件的指示。在另一个方面，提供用于鉴定人处于痴呆或阿尔茨海默病风险中的方法，包括：使用本专利技术某些方面的方法检测一种或多种生物标记；和基于检测结果预测人是否处于痴呆或阿尔茨海默病风险中。在另一个方面，提供用于监测人的痴呆或阿尔茨海默病发病或进展的方法，包括：随时间从人获取并保存许多生物样品到固体载体上；使用本专利技术某些方面的方法从一些保存样品检测一种或多种生物标记；和基于检测的生物标记随时间的变化预测痴呆或阿尔茨海默病的发病或进展。在另一个方面，提供用于评估潜在药剂的有效性的方法，包括：随时间从患有痴呆或阿尔茨海默病的人获取并保存许多生物样品到固体载体上，同时人使用潜在的药剂治疗；使用本专利技术某些方面的方法从一些保存样品检测一种或多种生物标记；和预测所述药剂是否有效治疗患有痴呆或阿尔茨海默病的人。本专利技术进一步的细节和优点将会从下列说明和权利要求显现。附图简述图1显示模式蛋白(IL-2)从固体载体的测量。图2显示模式酶(DNA酶)从固体载体的测量。图3显示模式酶(RNA酶)从固体载体的测量。图4显示500bp基因组DNA片段从用肝素处理并保存在不同固体载体上的人血液直接扩增的结果。图5显示1kb、3.8kb和7.5kb基因组DNA扩增子从用EDTA处理并保存在不同固体载体上的人血液直接PCR的结果。图6显示在用EDTA处理并保存在903和FTA基因卡(FTAGenecCard)样品收集卡上的来自若干哺乳动物物种的血液上进行的直接PCR的结果。图7显示从WT和NOS3缺失的基因敲除小鼠二者衍生的DNA扩增产物。图8显示来自若干组织源(蓝/亮和红/暗柱指不同的固体材料)的GADPH的相对表达水平。专利技术详述多种技术为基因组学和蛋白组学分析提供机会，其可用于评估血液和其它组织样品中改变的基因和蛋白质靶表达。将例如血液和/或脑脊液中的生物标记收集/储存在固体载体上，随后可进行简单直接或穿孔(punch-in)技术，其中将固体载体上的样品直接加入检测试剂中并经受生物标记检测方法，例如，但不限于，免疫测定和核酸扩增/检测技术，无需先前纯化目的生物标记或分析物。本专利技术人已经综述了几种基因组和蛋白质组生物标记和/或其它目的分析物对于其与脑中事件的关联的重要性，并建议将这些标记收集在固体载体例如Whatman/GEHealthcare提供的那些上。因此，在一个实施方案中，本专利技术提供用于检测源自体液的一种或多种生物标记的方法，所述方法包括对来自体液样品的生物标记进行一种或多种测定，其中样品先前保存在固体载体上；其中生物标记的变化提供脑中生物学事件的指示。在某些实施方案中，所述一种或多种测定包括核酸分子测定，或基于蛋白质的测定，或基于抗体的测定，或基于酶的测定。在某些实施方案中，所述变化可为生物标记水平的增加或减少。变化也可为缺乏对照或正常个体中存在的生物标记，反之亦然。变化也可为基因组水平的变化(即，单核苷酸多态性、插入、缺失或基因组水平的其它突变或多态性)。在某些实施方案中，所述体液为血液或脑脊液。科学文献的搜索已经鉴定约25种痴呆或阿尔茨海默病相关蛋白和核酸生物标记。尽管这些生物标记的表达可使用基于蛋白质、抗体、酶或RNA的基因表达测定检测，但基因组突变可在DNA水平检测。与痴呆和阿尔茨海默病相关的生物标记的列表在下表1中描述。表1：与脑中某些生物学事件有关的生物标记用于检测蛋白质和核酸生物标记的测定方法为已知的。这样的测定可选自：使用RT-PCR、聚合酶链反应(PCR)、定量PCR(qPCR)、等温扩增、免疫-PCR、微阵列测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫学技术、凝胶电泳(2DE)、毛细管电泳(TOFMS)、高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)、火焰光度法、原子吸收分光光度法和可见光分光光度法的基因表达或蛋白质表达谱分析。在某些实施方案中，样品先前保存在固体载体上。生物样品可简单施加到固体载体并让其在环境温度下干燥用于保存。在某些实施方案中，所述固体载体为纤维性的，例如纤维素纤维材料或玻璃纤维/微纤维材料。在某些实施方案中，所述固体载体为多孔聚合物，例如多孔膜材料例如聚酯、聚醚砜(PES)、聚酰胺(Nylon)、聚丙烯、聚四氟乙烯(PTFE)、聚碳酸酯、硝酸纤维素、醋酸纤维素、藻酸盐或氧化铝。在某些其它实施方案中，载体表面用化学品浸渍，所述化学品包括：弱碱、螯合剂、阴离子表面活性剂和/或离液剂例如硫氰酸胍。在某些其它实施方案中，所述固体载体为，但不限于，FTA纸、FTA洗脱纸、Whatman903纸或藻酸盐包覆的载体。本文中FTA(包括FTAmicrocards、FTAindicating和FTAclassic)为用稳定化学品，例如弱碱、螯合剂和阴离子表面活性剂处理的纤维素纤维纸，借此载体表面用稳定化学品浸渍。以这种方式生物样品材料可作为干燥物质在固体载体上储存许多月甚至许多年，从而允许在环境温度下转运固体载体(若需要)至实验室的时间。然后简单回收是可能的，通过例如从固体载体纯化生物样品材料。或者，样品可使用直接或洗涤的穿孔方案处理。将样品储存在固体载体上还使得能够通过按照需要移除部分样品并检验该部分，随时间再检验样品。FTA洗脱(FTAElute)在本文中描述相似的纸，但用离液剂例如硫氰酸胍包覆。在本文中Whatman903描述未包覆的纤维素纤维纸。WO2012113911、WO2012113907、WO20121本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测源自体液的一种或多种生物标记的方法，包括对于来自所述体液的样品的所述生物标记进行一种或多种测定，其中样品先前保存在固体载体上；其中所述生物标记的变化提供脑中生物学事件的指示。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.11.20 US 62/082,1991.用于检测源自体液的一种或多种生物标记的方法，包括对于来自所述体液的样品的所述生物标记进行一种或多种测定，其中样品先前保存在固体载体上；其中所述生物标记的变化提供脑中生物学事件的指示。2.权利要求1的方法，其中所述体液为血液或脑脊液。3.权利要求1的方法，其中所述生物标记为一种或多种运甲状腺素蛋白、簇蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、A1AcidG、胞内粘附分子1、细胞色素C4、色素上皮衍生因子、α1抗胰蛋白酶、RANTES、载脂蛋白C3、载脂蛋白E(基因型)、载脂蛋白A1、神经元特异性烯醇酶、脑衍生神经营养因子、补体因子H、α巨球蛋白、血清淀粉样蛋白P、血浆铜蓝蛋白、淀粉样蛋白β、纤维蛋白原α链前体、角蛋白1型细胞骨架9、血清白蛋白前体、SPARC样1蛋白、纤溶酶原结合蛋白、tau、突触核蛋白、tau激酶和tau磷酸酶。4.权利要求1的方法，其中所述固体载体为纤维性的，例如纤维素纤维材料或玻璃纤维/微纤维材料。5.权利要求1的方法，其中所述固体载体为多孔聚合物，例如多孔膜材料例如聚酯、聚醚砜(PES)、聚酰胺(Nylon)、聚丙烯、聚四氟乙烯(PTFE)、聚碳酸酯、硝酸纤维素、醋酸纤维素、藻酸盐或氧化铝。6.权利要求1的方法，其中载体表面用化学品浸渍，所述化学品包括：弱碱、螯合剂、阴离子表面活性剂和/或离液剂例如硫氰酸胍。7.权利要求1的方法，其中进行一种或多种测定直接从自包含样品的固体载体切除的穿孔物进行，所述方法任选包括在测定反应前洗涤切除的穿孔物以去除任何潜在的抑制性化学品的步骤。8.权利要求1的方法，进一步包括在检测生物标记之前从固体载体纯化生物标记的步骤。9.权利要求1的方法，其中测定两种或更多种所述生物标记。10.权利要求1的方法，其中所述一种或多种测定为选自核酸分子测定、基于蛋白质的测定或基于抗体的测定或基于酶的测定的不同测定。11....

【专利技术属性】
技术研发人员：PJ塔特内里，JK霍顿，
申请(专利权)人：通用电气医疗集团英国有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB