标靶分子的检测方法及其中所用的试剂盒技术

本发明专利技术提供一种标靶分子的检测方法，该检测方法包括：复合体形成步骤，使标靶分子、载体和第二抗体反应，所述载体被修饰有与所述标靶分子特异性结合的第一抗体，所述第二抗体是与所述标靶分子特异性结合的、被标记有具有底物切割活性的酶的两个以上的抗体，且所述酶的底物特异性彼此不同，在所述载体上形成包含所述第一抗体、所述标靶分子和所述第二抗体的复合体；以及检测步骤，使底物与所述复合体反应，所述底物是具有所述酶的切割位点的、在该切割位点的一端侧结合有荧光物质、在另一端侧结合有猝灭剂的两个以上的底物，且所述荧光物质的荧光波长彼此不同，检测从所述荧光物质中发出的荧光。可以排除因检测抗体向载体上的非特异性吸附而产生的噪音，高灵敏度并且高精度地检测出来自于标靶分子的信号。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】标靶分子的检测方法及其中所用的试剂盒
本专利技术涉及标靶分子的检测方法及其中所用的试剂盒。更具体而言，涉及基于载体上的该标靶分子与抗体的抗原抗体反应来检测标靶分子的方法。
技术介绍
以各种疾病的早期诊断为目的，希望有用于高灵敏度地检测低浓度地存在于生物体样品中的疾病标记(生物标记)的生物传感技术。例如，在从体积1mm3的肿瘤中所含的100万个癌细胞的各个细胞向5L的血中分泌出100分子的生物标记的情况下，生物标记的血中浓度为30aM左右。希望有能够检测此种非常低浓度的标靶分子的技术。非专利文献1中，记载有使用单分子的酶联免疫吸附测定(ELISA)检测蛋白质的方法。该方法中，利用由蛋白特异性抗体覆盖的微细的球珠来捕捉微量的蛋白质，对球珠与蛋白质的复合体进行荧光标记。将包含该复合体的球珠利用离心力导入反应室，计数捕捉到蛋白质的球珠的个数，由此定量地测定蛋白质。专利文献1中，作为“单分子数字式计数器件”，公开有能够超高密度地形成微小的液滴的微阵列器件。通过在微小体积的液滴中进行ELISA，可以将来自于标靶分子的信号二值化而进行测定(数字式ELISA法)。具体而言，首先，使标靶分子、对捕捉抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种标靶分子的检测方法，该检测方法包括：复合体形成步骤，使标靶分子、载体和第二抗体反应，在所述载体上形成由所述第一抗体、所述标靶分子和所述第二抗体构成的复合体，其中，所述载体被修饰有与所述标靶分子特异性结合的第一抗体，所述第二抗体是与所述标靶分子特异性结合的、被标记有具有底物切割活性的酶的两个以上的抗体，且所述酶的底物特异性彼此不同；检测步骤，使底物与所述复合体反应，检测从所述荧光物质中发出的荧光，其中，所述底物是具有所述酶的切割位点的、在该切割位点的一端侧结合有荧光物质、在另一端侧结合有猝灭剂的两个以上的底物，且所述荧光物质的荧光波长彼此不同；以及分析步骤，将荧光波长不同的两个以上的荧光的检...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.22 JP 2014-1923111.一种标靶分子的检测方法，该检测方法包括：复合体形成步骤，使标靶分子、载体和第二抗体反应，在所述载体上形成由所述第一抗体、所述标靶分子和所述第二抗体构成的复合体，其中，所述载体被修饰有与所述标靶分子特异性结合的第一抗体，所述第二抗体是与所述标靶分子特异性结合的、被标记有具有底物切割活性的酶的两个以上的抗体，且所述酶的底物特异性彼此不同；检测步骤，使底物与所述复合体反应，检测从所述荧光物质中发出的荧光，其中，所述底物是具有所述酶的切割位点的、在该切割位点的一端侧结合有荧光物质、在另一端侧结合有猝灭剂的两个以上的底物，且所述荧光物质的荧光波长彼此不同；以及分析步骤，将荧光波长不同的两个以上的荧光的检测信号作为所述标靶分子的检测信号进行处理。2.根据权利要求1所述的检测方法，其中，在所述复合体形成步骤与所述检测步骤之间，包括向形成于基板上的液滴中分别各封入一个所述载体的封入步骤。3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其中，所述载体为微球。4.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：野地博行，
申请(专利权)人：国立研究开发法人科学技术振兴机构，
类型：发明
国别省市：日本,JP