用于癌症治疗的免疫疗法制造技术

描述了使用双阴性(DN)T细胞治疗癌症的方法。DNT可用于治疗化疗抗性癌症诸如再发的或复发的急性髓性白血病(AML)。还描述了对正常宿主组织不显示毒性和与移植物抗宿主病相关的并发症的同种异体DNT(诸如衍生自健康供体的那些)的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于癌症治疗的免疫疗法相关申请本申请要求2014年8月15日提交的美国临时专利申请No.62/037,889的优先权，该临时申请的内容通过引用整体纳入本文。
本公开内容涉及使用双阴性T细胞治疗癌症诸如白血病和淋巴瘤，包括急性髓性白血病(AML)。
技术介绍
急性髓性白血病(AML)是成人急性白血病的主要原因，占所有成人白血病的～80％(Menzin等，2002)。尽管为了开发更有效的靶向该疾病的方法进行了广泛的研究，但AML仍然与低长期存活相关；只有～5％的AML老年患者和～30％的AML年轻患者能够存活5年或更长时间(UngewickellandMedeiros,2012；Hoand等,2012)。常规化疗可在>70％的受治疗的AML患者中有效地实现疾病的初期缓解(UngewickellandMedeiros,2012)。然而，由于该疾病的高度异质性，～30％的AML患者不响应化疗(UngewickellandMedeiros,2012；Bucisano等,2012)。此外，化疗不能在大多数患者中实现疾病的完全清除，大于70％的缓解期患者在初期治疗后的2年内复发AML(UngewickellandMedeiros,2012；Bucisano等,2012)。对于复发AML的患者没有标准的治疗方案，复发的AML与预后不良相关(Ferrara等,2004)。复发的AML是由一种叫做微小残留病(MRD)的现象引起的，这种现象由具有化疗抗性的AML细胞群介导(Garces-Eisele,2012；LinandLevy,2012)。已知MRD很大程度上是由白血病干细胞(LSC)群引起的，因为其能够承受恶劣的环境和条件，诸如化疗(Ishikawa等,2010；Kadowaki和Kitawaki,2011；Vaz等,2013)。因此，开发靶向AML-LSC和MRD的治疗以实现疾病的无复发的清除是一个活跃的研究领域。同种异体造血干细胞移植(同种异体HSCT)是AML患者的潜在治愈性治疗，并且与常规化疗相比具有更高的无疾病存活率(Alatrash和Molldrem,2009)。供体来源的T细胞介导的抗白血病效应有助于增加患者的存活，因为T细胞耗竭的移植物导致更高的复发率(Alatrash和Molldrem,2009)。然而，临床上同种异体HSCT的使用受到短缺合适供体、治疗的毒性和其他相关并发症的限制(Alatrash和Molldrem,2009；Shlomchik,2007)。强烈的免疫应答可以在正常组织上诱导，导致组织损伤，并且可能在严重病例中导致患者死亡(Alatrash和Molldrem,2009；Shlomchik,2007)，因此构成限制使用同种异体细胞治疗的主要障碍。自从利用T细胞免疫疗法治疗黑色素瘤患者的早期工作以来，对其他癌症的过继性T细胞疗法已经取得了显著进展，这进一步支持了细胞疗法的潜在应用以实现无复发的AML清除(Rosenberg等,1988)。已鉴定了在白血病细胞中上调的抗原，白血病相关抗原(LAA)，并且已在体外和动物模型中证实了LAA-特异性T细胞的抗白血病作用(Vaz等,2013；Teague和Kline,2013)。然而，LAA-特异性T细胞的使用受碍于分离和扩增这些细胞的困难(Kochenderfer等,2010；Johnson等,2009；Parkhurst等,2011；Robbins等,2011)。此外，尽管许多LAA在AML中过表达，但这些抗原在其他组织诸如胸腺中的表达由于T细胞特异性的胸腺选择而阻止了具有对LAA高度亲和的受体的成熟T细胞的发育(Teague和Kline,2013)。或者，也已经尝试了使用表达针对LAA的转基因TCR或嵌合Ag受体的转基因CD8+T细胞，所述LAA分别诸如Wilms’肿瘤抗原或LewisY(Peinert等,2010；Xue等,2010)。这些T细胞具有显著增加的结合LAA的能力并且显示出优异的抗肿瘤活性(Kochenderfer等,2010；Johnson等,2009；Parkhurst等,2011；Robbins等,2011)。然而，与基因治疗相关的潜在副作用，连同复杂和漫长的程序，限制了使用这些策略来治疗AML。此外，注射超生理数量的基因工程T细胞可导致严重的不良事件，包括死亡。因此，开发对广泛的癌症具有有效作用而不需要鉴定LAAs的新的细胞免疫疗法将革新白血病免疫疗法。双阴性T细胞(DNT细胞或DNT)是成熟的外周T淋巴细胞，它们表达CD3-TCR复合体但不表达CD4、CD8或NKT细胞标志物αGalCer-加载的CD1d和Jα24-Vα14；它们代表了人体中1～3％的外周血单核细胞(PBMC)(Zhang等,2000)。已经描述了在化疗诱导的完全缓解期间从AML患者中扩增DNT的方法，并且已经证明AML患者DNT在体外对获自同一患者的原代AML细胞具有显著的抗白血病活性(Young等,2003；Merims等,2011)。先前已经证明DNT以剂量依赖性方式通过穿孔素-颗粒酶依赖途径诱导杀死同种异体AML细胞系(Merims等,2011)。在动物模型中，也已证明，与常规的CD4+或CD8+T细胞不同，灌注同种异体的小鼠DNT可赋予免疫抑制功能(Zhang等,2000；Young等,2003；He等，2007)。然而，还未在体内研究过DNT对于患者原代白血病细胞的活性。
技术实现思路
在本专利技术的一个方面，已经确定双阴性(DN)T细胞(DNT)对于治疗癌症诸如淋巴瘤或白血病是有效的。特别是，使用DNT的免疫疗法已被证明对于急性髓性白血病(AML)的治疗是有效的，包括杀死对化疗治疗有抗性的白血病细胞。任选地，DNT可以是自体的，诸如来自患有癌症或怀疑患有癌症的受试者的DNT，或同种异体的，诸如来自没有癌症的健康供体的DNT。值得注意的是，观察到DNT在体外以及在异种移植模型中体内对癌细胞具有细胞毒性，而在正常细胞和组织中没有可检测出的毒性。如实施例2中所示，已证明注射的DNT在体内增殖和存留，并迁移到不同的组织包括血液、脾脏和肺，还在肺、肝脏和骨髓观察到DNT群体，表明DNT可靶向这些器官中的肿瘤。本专利技术人还证明了来自健康供体的同种异体DNT选择性靶向AML细胞并显示癌症杀伤活性。DNT还显示出在AML异种移植模型中抑制植入，表明DNT在体内可减少白血病细胞的水平。此外，如实施例6所示，注射的DNT从血液迁移到骨髓并靶向预先存在的AML癌细胞，表明DNT在用于治疗患有AML的受试者的临床环境中可以是有效的。许多癌细胞系也被证明表现出体外对DNT细胞介导的细胞毒性的高度敏感性，包括Daudi(B细胞淋巴瘤(伯基特淋巴瘤))、Jurkat(急性T细胞淋巴瘤)、K562(慢性髓性白血病)、U937(慢性髓性白血病)以及原代和建立的肺癌细胞系(数据未显示)。化疗是用于AML患者的标准治疗，可有效减少白血病负荷并实现疾病的初期缓解。然而，化疗通常不能实现完全清除，导致AML患者的高复发率。因此，消除对化疗不响应的AML细胞并降低复发率的能力预期将显著增加AML患者的存活。如实施例7所示，本专利技术人已经证明DNT在杀死化疗抗性癌细胞特别是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗有需要的受试者的白血病或淋巴瘤的方法，包括给予所述受试者有效量的双阴性T细胞(DNT)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.15 US 62/037,8891.一种治疗有需要的受试者的白血病或淋巴瘤的方法，包括给予所述受试者有效量的双阴性T细胞(DNT)。2.如权利要求1所述的方法，其中所述白血病是急性髓性白血病(AML)。3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述DNT是自体的。4.如权利要求3所述的方法，其中所述DNT来自具有一个或多个可检测出的癌细胞的受试者。5.如权利要求3或4所述的方法，其中所述DNT来自先前被治疗癌症的受试者。6.如权利要求5所述的方法，其中所述DNT来自不处于完全缓解中的受试者。7.如权利要求3-7中任一项所述的方法，其中所述DNT获得自化疗之前、化疗期间或化疗之后的受试者。8.如权利要求7所述的方法，其中所述DNT获得自一轮或多轮化疗之后的受试者。9.如权利要求1或2所述的方法，其中所述DNT是同种异体的。10.如权利要求9所述的方法，其中所述DNT来自一个或多个没有癌症的受试者。11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述DNT获得自包含外周血单核细胞(PBMC)的样品。12.如权利要求11所述的方法，其中所述样品是血液样品。13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述DNT已在体外扩增或离体扩增。14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述受试者患有再发的AML、复发的AML或难治性AML。15.如权利要求14所述的方法，其中所述再发的AML或复发的AML是由微小残留病(MRD)或白血病干细胞引起的。16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述DNT通过静脉内注射给予所述受试者。17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述DNT在化疗之前、化疗期间或化疗之后给予受试者。18.如权利要求17所述的方法，其中所述DNT在化疗的同一天、3天内、1周内、2周内、3周内或1个月内给予受试者。19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，还包括给予所述受试者一个或多个另外剂量的有效量的DNT。20.如权利要求19所述的方法，其中所述另外剂量在最后一剂DNT的至少3天后、最后一剂DNT的至少5天后、或任选地最后一剂DNT的3天至两周之间之后给予。21.一种抑制白血病或淋巴瘤细胞生长或增殖的方法，包括使所述细胞与双阴性(DN)T细胞接触。22.如权利要求21所述的方法，其中所述DNT是同种异体的。23.如权利要求21或22所述的方法，其中所述白血病细胞或淋巴瘤细胞是化疗抗性的。24.如权利要求21-23中任一项所述的方法，其中所述白血病细胞是急性髓性白血病(AML)细胞。25.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中所述白血病细胞或淋巴瘤细胞在体外或体内。26.一种治疗有需要的受试者的白血病或淋巴瘤的方法，包括给予所述受试者有效量的同种异体DNT和化疗剂。27.如权利要求26所述的方法，其中所述化疗剂是细胞周期抑制剂。28.如权利要求27所述的方法，其中所述细胞周期抑制剂是AraC。29.如权利要求26-28中任一项所述的方法，用于治疗有需要的受试者的急性髓性白血病(AML)。30.有效量的双阴性(DN)T细胞用于治疗有需要的受试者的白血病或淋巴瘤的用途。31.如权利要求30所述的用途，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽，J·B·李，B·陈，
申请(专利权)人：大学健康网络，
类型：发明
国别省市：加拿大,CA